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结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白的制备和应用
全球结核杆菌感染者高达 20 亿人,每年新发病例约800 万 ~ 1000 万,其中我国每年新发患者高达 150 万.结核杆菌流行病学的一个重要特征是结核分枝杆菌的潜伏感染.结核分枝杆菌潜伏感染是一种亚临床状态,其中约有 10% 的结核分枝杆菌潜伏感染者会发展成为结核病患者[1].流行病学调查显示,我国受结核杆菌感染人数超过5 亿.因此,如何有效、全面地筛查出结核病患者和结核杆菌潜伏感染人群,是结核病控制首要解决的问题.结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白主要为小分子的分泌性蛋白,这些蛋白抗原是记忆性免疫 CD4+T 细胞的靶分子[2].以早期培养滤液蛋白为刺激源,结合 γ 干扰素释放技术,可以用于结核杆菌感染的体外诊断.
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结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的制备
CFP10和ESAT6都是结核分枝杆菌(M.tb)特有的、有良好抗原性的分泌性蛋白,将其编码基因1hp和esat6用GeneSOEing法通过Linker(Gly4Ser)3构建成融合基因,并克隆入pQE30质粒,表达、纯化、鉴定rCFP10-ESAT6,为其应用于M.tb感染的诊断和预防奠定基础.
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两种结核DNA疫苗的免疫原性和保护效力
MPT64和ESAT6都是结核分支杆菌复合群主要的分泌性蛋白,也是其重要的T细胞抗原,ESAT6编码基因在BCG菌株中缺失[1],而MPT64编码基因在某些BCG菌株中也缺失[2].因此,本研究将结核分支杆菌MPT64和ESAT6 DNA疫苗免疫小鼠后,观察小鼠的体液和细胞免疫应答,并通过脏器的菌落计数评价这两种DNA疫苗的保护效力,以筛选有效的结核病DNA疫苗.
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Klotho 基因及其与心血管疾病关系研究进展
Klotho 基因是一种与人类衰老密切相关的新基因,其主要在肾脏和脑脉络膜中表达,其分泌性蛋白是一种与衰老有关的激素,为此推测该基因表达可能对衰老相关性疾病(如老年高血压、冠心病、动脉硬化等)的发生发展起作用.本文就该基因与心血管疾病的关系研究新进展进行综述分析,以探寻其在心血管疾病中的发病分子生物学机制,为开展基因水平上预防和早期干预心血管疾病研究提供新线索.
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肿瘤分泌蛋白的临床研究进展
蛋白质作为生命功能的执行者,在内质网上合成后,运输至高尔基体内进一步加工和分选,然后被运送到相应的细胞器中,或被分泌到细胞外发挥功能,该过程称为细胞分泌,其中分泌到细胞膜外的蛋白质称为分泌性蛋白或分泌蛋白.分泌性蛋白占人类蛋白质组的十分之一,其中细胞蛋白的20%~25%是可分泌蛋白.
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酵母双杂交技术筛选Hcbp6结合的肝细胞蛋白编码基因
目的:Hcbp6是与核心蛋白相结合的未知功能蛋白基因,为了初步提示他的生物学功能和在细胞中的存在形式,采用酵母双杂交体系寻找与他相互作用的肝细胞蛋白,探讨Hcbp6的生物功能.方法:应用酵母双杂交系统3,构建Hcbp6诱饵质粒并转化酵母AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,在涂有x-α-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长.挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析.结果:筛选出4种与Hcbp6特异性相互作用的蛋白,包括Paralemmin(PALM)、Ran结合蛋白2(Ranbp2)、跨膜运输蛋白21(Tmp21)和血清白蛋白.结论:推测该蛋白可能为一分泌性蛋白,或与分泌蛋白的形成有关,进一步的生物学功能的研究需要更多的实验加以探讨.
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结核中心结核分支杆菌Ag85A蛋白的克隆、表达及其血清学诊断价值的研究
10多年来国内、外学者一直从结核分支杆菌培养滤液中提纯蛋白质抗原进行多方面的研究,由于该方法制备蛋白抗原较烦琐、费时,因此,近年来许多研究者应用大肠杆菌来表达结核分支杆菌基因,简便地获得了大量结核分支杆菌单一的蛋白抗原.Ag85复合物是结核分支杆菌主要的分泌性蛋白,在结核分支杆菌H37Rv株中占分泌蛋白总量的30%,可从早期培养物中分离,是一种热不稳定的蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦分析可分为Ag85A、Ag85B和Ag85C三个组分[1].因此本研究通过基因工程技术构建结核分支杆菌Ag85A表达株,获得重组Ag85A(rAg85A)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,为研制更有效的结核病免疫诊断试剂和新型的结核病疫苗奠定了基础.
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胰岛素样生长因子Ⅰ及其与炎症关系的研究进展
胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factor I,IGF-Ⅰ)属分泌性蛋白,主要在肝脏中合成分泌,具有诱导干细胞增殖和分化、促进骨骼生长、营养保护神经、参与调节血糖等生理功能.组织中高表达IGF-Ⅰ可导致肿瘤发生.在炎症状态下IGF-1处于低水平状态,如果升高IGF-1水平,炎症则趋于好转.因此深入探讨IGF-1与炎症的关系有重要意义,IGF-1有望成为控制炎症的作用靶点.本文就IGF-1的生理作用、IGF-1/IGF-1受体(IGF-1R)信号转导轴、IGF-1与炎症的关系以及以IGF-1为作用靶点的治疗等综述如下.
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PLUNC家族蛋白在鼻部抗炎症及肿瘤作用的研究进展
PLUNC(palate,lung,and nasal epithelium associated)作为一种分泌性蛋白,其在炎症性疾病中的显著作用,已受到国内外学者的重视.近几年来其在肿瘤的诊断及抗肿瘤方面表现出的应用价值再次成为研究的热点.本文将对PLUNC家族蛋白在鼻部抗炎症及肿瘤相关研究进展进行综述.
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Trefoil因子和癌症关系研究进展
Trefoil因子(TFFs)是出现在血浆的一种分泌性蛋白,主要由胃肠道粘液细胞分泌.一旦胃肠道粘膜遭受损伤,TFFs会介导粘膜上皮向损伤区迁移,提高迁移上皮的活力,促进粘膜血管形成,使粘膜快速复原.但TFFs以上功能调节异常,则会导致细胞过度增生,并向癌细胞转化,抑制癌细胞捌亡和失巢凋亡,促进癌组织血管形成.本文就TFFs促进细胞增生、抑制细胞凋亡和失巢凋亡、促进癌细胞侵润和转移、促进癌组织血管形成方面来阐述TFFs与人癌症的关系.
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沙眼衣原体质粒蛋白pgp3单克隆抗体制备及鉴定
目的:原核表达沙眼衣原体( Ct)质粒分泌性蛋白pgp3,制备其单克隆抗体( mAbs)并鉴定其基本生物学特征。方法:构建pGEX-6p2-pgp3原核表达载体,在大肠杆菌中表达GST-pgp3融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA法筛选分泌抗pgp3蛋白mAbs的细胞株,对mAbs特异性、型别、类及亚类和效价进行鉴定。结果:GST-pgp3融合蛋白表达成功,且成功筛选出5株稳定分泌mAbs的杂交瘤细胞株,其中4株为分泌抗pgp3 mAbs的杂交瘤细胞株(P1B3、P2A1、P2B6、P2C2),mAbs类型为IgG1/κ型,剩余1株为分泌抗GST 蛋白的杂交瘤细胞株(P3B4),mAbs类型为IgG2b/κ型。交瘤细胞株P1B3、P2A1、P2B6、P2C2、P3B4培养上清中的mAbs效价分别为1∶6400、1∶3200、1∶12800、1∶6400和1∶6400。结论:成功制备出抗pgp3 mAbs,为进一步研究Ct质粒蛋白pgp3功能及为Ct检测方法的建立奠定了基础。
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5种结核分枝杆菌分泌性蛋白的纯化及血清学特性
[目的]分离纯化结核分枝杆菌分泌性蛋白30-kDa,38-kDa,ESAT-6,Rv3872,HBHA,并比较此5种蛋白及其3种联合蛋白38-kDa-30-kDa Ag,38-kDa-ESAT-6 Ag,38-kDa-HBHA Ag的免疫学特性,并评价在结核血清学诊断中的应用价值.[方法]利用间接酶联免疫吸附试验评价肺结核患者组和健康对照组血清中5种蛋白及3种联合蛋白的抗原性.[结果]成功分离纯化了5种分泌性蛋白;酶联免疫吸附试验结果表明,与其他4种结核分枝杆菌分泌性蛋白比较,38-kDa抗原具有较强的敏感性和特异性,尤其在抗IgM抗体的诱导免疫反应强(P<0.000 1),敏感性和特异性分别为44.44%和95%,而38-kDa-30-kDa联合抗原的敏感性高达80.00%,并且也具有较高的特异性;ESAT-6抗原和HBHA抗原在与3种抗体的反应中具有相似的敏感性与特异性;Rv3872抗原的敏感性和特异性与其他4种抗原相比均较低.[结论]作为结核分枝杆菌分泌性蛋白单一抗原,38-kDa抗原的免疫原性优于30-kDa,ESAT-6,Rv3872,HBHA,而38-kDa-30-kDa联合抗原有望成为结核血清学新型诊断试剂有效的候选抗原.
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细菌的Ⅲ型和Ⅳ型分泌系统
细菌拥有很多分泌系统,通过这些系统,许多分泌性蛋白和外露蛋白被输送到菌体细胞外,与宿主细胞发生相互作用而发挥其毒性.革兰阴性菌拥有5型蛋白分泌系统,其中Ⅲ型和Ⅳ型分泌系统与细菌的致病性密切相关,正日益受到各方学者的关注.本文对细菌Ⅲ型和Ⅳ型分泌系统的组成、结构和功能等进行概述.
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基因组学、蛋白质组学、抗原组学与疫苗的发展
疫苗免疫是机体抵御微生物和寄生虫感染的有效措施,然而还有许多病原体缺乏有效的疫苗,疫苗研究任重而道远.随着许多病原体基因组测序的完成,利用基因组学筛选疫苗抗原显示了强大的优势.同时由于近年来比较基因组学、蛋白质组学、抗原组学等的发展,病原体毒力相关蛋白、分泌性蛋白和膜表面结合蛋白基因可以被分离出来,从而可以更加准确地分析候选抗原,极大地提高了疫苗抗原分析的效率.总之,利用基因组和蛋白质组进行疫苗抗原筛选是疫苗研究的革命,将极大地推动疫苗的研究和开发.
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分枝杆菌Ag85研究进展
抗原85复合体(Ag85)是一组具有较强细胞免疫及体液免疫活性的分枝杆菌分泌性蛋白.近年来Ag85在分布、结构、生化特性、功能及用途方面的研究有了很大进展,提示Ag85在结核和麻风病的预防及诊断方面具有良好的应用前景.
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佐剂性关节炎大鼠滑膜及血清中MANF的表达及其与炎症的相关性
目的 观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte- derived neurotrophic factor, MANF)在佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)大鼠膝关节滑膜和血清中的表达情况,分析MANF表达与关节炎症是否具有相关性.方法 SD大鼠足趾皮内注射弗氏完全佐剂(Freund complete adjuvant,FCA)制备AA模型;足容积法测量继发侧足肿胀度,关节炎指数(arthritis index, AI)评价AA严重程度,HE染色观察膝关节病理学变化;分别采用Western blot和RT-PCR法检测致炎后不同时期继发侧膝关节滑膜组织中MANF和内质网应激标志蛋白BiP、CHOP的蛋白和mR-NA水平;ELISA法检测致炎后不同时期血清中MANF、C-反应蛋白(C- reactive protein, CRP)、白细胞介素1β(interleu-kin-1 β, IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)水平,并进行相关性分析.结果 AA大鼠模型建立成功,致炎d 2滑膜组织中BiP表达明显升高,到d 28稍有下降;MANF表达在致炎 d 2略有升高并保持稳定,d 14表达明显上调,随后逐渐下降;而CHOP则保持低水平缓慢上升的趋势;致炎d 14血清中MANF水平明显增高,随后逐渐下降,d 28仍高于正常水平;CRP与MANF变化趋势基本一致;在AA大鼠继发性反应期,MANF水平与关节炎症状、血清IL-1β和TNF-α水平呈负相关.结论 关节炎症能诱导MANF表达和分泌,且MANF水平与关节炎症进展和程度密切相关.
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结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6研究新进展
结核分支杆菌的多种分泌蛋白已成为现今对该菌研究的热点,如 Ag85复合物、MPT64、ESAT-6及Mtb8.4等,其中结核分支杆菌早期分泌性抗原靶(ESAT-6 )是从结核杆菌短期培养滤液(ST-CF)中分离的一种低分子量分泌性蛋白,具有较强的细胞免疫活性,在卡介苗(BCG)各菌株中缺乏其编码基因,可望成为人和动物结核病的特异性诊断试剂、抗结核病亚单位疫苗的侯选抗原和结核病DNA疫苗的侯选目的基因.
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结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6基因测序质粒及真核表达重组质粒的构建
目的构建结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6基因测序质粒及真核表达重组质粒,为结核病的诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础.方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对基因ESAT-6进行扩增,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,经测序反应确定无误,再将PCR反应产物经酶切后,克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+)上.结果构建了结核杆菌基因ESAT-6的重组测序质粒,并对其进行了测序.真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-ESAT-6亦构建成功.结论结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6真核表达重组质粒的成功构建为结核病的诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及相应抗原、抗体的制备打下基础.
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信号肽捕获系统及其在寄生虫学领域的应用
分泌性蛋白是生物体各组织细胞间传递信息的主要途径.因此,分离和鉴定编码分泌性蛋白的基因将会对整个生命科学的发展起到促进作用.信号肽捕获系统是一种近年发展起来的分离和鉴定编码分泌性蛋白基因的新方法,利用分泌性蛋白在N末端都含有信号肽这一特性,来特异性克隆编码这些蛋白的基因.本文主要对信号肽捕获系统的发展及其在寄生虫学领域的应用作一概述.
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肝癌中结缔组织生长因子的研究进展
新统计数据表明,肝癌发病率居全球肿瘤的第5位,然而仅我国肝癌年发病例数就占全世界的55%,且发病例数仍在逐年增加[1]。对肝癌发病机制的研究有利于患者的早期发现和有效治疗。目前研究表明,肿瘤的发生发展、浸润和转移涉及多个癌基因、抑癌基因及生长因子。结缔组织生长因子( connective tissue growth factor ,CTGF)是一种富含半胱氨酸的分泌性蛋白,在许多生理、病理过程起作用。近年来研究显示,CTGF通过多种机制参与肿瘤的发生发展、浸润转移及血管生成等过程。本文就CTGF在肿瘤,尤其是在肝癌中的作用的研究进展进行综述。