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腺苷脱氨酶检测的临床应用
腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类,属于巯基酶.ADA代谢终产物为尿酸.ADA广泛分布于人体各组织中,其含量有所不同.血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞,其活性约为血清中的40～70倍,T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高.
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酶清洗剂的临床应用进展
器械在消毒灭菌之前需全面细致的清洗,器械表面残留的有机和无机污物会阻碍消毒剂和灭菌剂与器械表面的接触,从而影响消毒和灭菌效果[1-2].因此,彻底清洗是保证消毒或灭菌成功的关键[3].卫生部《内镜清洗消毒技术操作规范(2004年版》[4](以下简称《规范》)明确要求器械采用含酶清洗剂清洁.大量研究证明,酶清洗剂能分解人体的有机物和蛋白质,降低物体表面微生物负荷3～5个对数级别[5],并能有效消化细菌内毒素中的蛋白成分,使细菌内毒素失去活性成分[6-7],具有去热原的作用[8].因此,选用酶清洗剂是保证清洗彻底的前提.本文主要对目前清洗医疗器械中酶清洗剂的理化性质、分类、应用方法、影响因素等进行综述.
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急性酒精摄入致酶谱变化的实验研究
目的探讨健康志愿者急性酒精摄入后肝酶谱、心肌酶谱的变化及意义.方法健康志愿者单次摄入182 ml白酒(含纯酒精80 g)后,分别于饮酒结束起0.5、1、1.5、2、2.5、3、6、24 h用呼气测醉仪测定血酒精浓度及外周血肝酶谱、心肌酶谱的实验室指标.结果健康志愿者单次摄入含80 g纯酒精的白酒后,血酒精浓度于1 h后达到峰值,后不断下降,至24 h后恢复正常;与血酒精浓度为0 g/L时相比,丙氨酸氨基转移酶/门冬氨酸氨基转移酶(ALT/AST)比值于血酒精浓度大于1.2 g/L时显著升高(1.28、0.94,P<0.05);碱性磷酸酶和谷胺酰转肽酶于血酒精浓度为0～0.4 g/L时显著升高[分别为(84.0±15.1)U/L 、(67.9±18.6)U/L、(27.1±16.3)U/L 、(13.8±11.5) U/L,P<0.01];肌酸激酶同工酶升高和羟丁酸脱氢酶降低[于血酒精浓度大于1.2 g/L时较0 g/L时分别为:(13.2±2.1)U/L、(5.9±2.8)U/L;(27.1±5.0)U/L、(37.5±5.5)U/L,P<0.05]. 结论急性酒精中毒可引起健康志愿者肝脏相关酶类及心肌酶谱指标改变,造成肝脏、心肌一过性损害.
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酶学参考测量系统量值传递方法的研究
目的 应用酶学参考方法实验室网络赋值的人源新鲜冰冻血清作为准确量值的媒介物,探寻酶学参考测量系统向常规检测系统量值传递的方法.方法 量值传递研究.由首都医科大学附属北京朝阳医院、北京航天总医院、首都医科大学附属北京世纪坛医院、中国医学科学院北京协和医院、北京利德曼生化股份有限公司、四川迈克生物科技股份有限公司6家实验室组成的酶学参考方法实验室网络使用国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)推荐的肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)参考测量程序为新鲜冰冻混合人血清赋值.北京市临床检验中心于2013年2月用此赋值血清(B Cal)对北京市49家三级医院互认实验室常规检测系统进行校准或验证.各实验室分别在厂家校准品及B Cal校准后,重复检测B Cal、水平1患者样本(S1)和水平2患者样本(S2)2次,记录并收集实验数据.通过统计患者样本B Cal校准前、校准后的均值、标准差、变异系数等统计学指标,观察系统间酶学检测结果可比性的改善.结果 使用B Cal校准后,S1和S2 CK的CV分别由4.67％和5.96％降至1.86％和1.47％；LDH的CV分别由5.72％和5.04％降至3.67％和3.62％.仪器分组数据显示:对于可应用B Cal校准的A、B仪器组,CK项目,校准后两个仪器分组B Cal、S1、S2检测结果的系统间CV均小于2.0％；LD项目,系统间CV分别为1.64％～ 3.80％和1.45％～4.05％.对于不适用B Cal校准的C仪器组,CK、LDH检测结果的偏移分别为-4.75％和-13.10％；大CV分别为3.64％和7.57％.试剂分组数据显示:校准后,CK项目各试剂组CV从1.60％～ 4.44％减少至0.23％ ～ 1.62％;LDH项目各试剂组CV从0.93％ ～6.07％减少至1.06％ ～ 2.72％.结论 应用参考方法实验室网络赋值的新鲜冰冻人源血清通过校准或验证方式进行量值传递是一种可行的方式,可有效解决酶学检测结果的溯源与可比问题.对于不适用B Cal校准的检测系统,可使用B Cal进行正确性判定,并制定相应标准.
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两种检测阴沟肠杆菌AmpC酶方法的比较
目的建立一种新的简便易行的AmpC酶的表型筛选方法并对其进行评价.方法采用表型筛选和三维试验,对144株阴沟肠杆菌进行AmpC酶检测,对检测结果进行比较,并检测部分菌株的等电点和ampD基因.结果 144株阴沟肠杆菌表型筛选结果显示高产AmpC酶的菌株共有35株,占24.31%(35/144).表型筛选与三维试验相比总符合率为89.58%(129/144).2种方法检测结果相反的有5株菌,其中4株菌的等电点条带均不能被氯唑西林抑制,另1株菌株等电点检测有5条带(其中2条被氯唑西林抑制).3株ampD基因阳性菌株测序结果显示均存在71,72,75位氨基酸发生改变,其中有2株还存在101位氨基酸改变.结论表型筛选法检测AmpC酶结果可靠、方法简便,易于在临床实验室中推广应用.
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体内外微量酒精对血清酶活性的影响
目的研究体内外微量酒精对血清酶活性的影响.方法利用14名健康志愿者,观察口服56°白酒(1 ml/kg体重)前后不同时间血液中酒精浓度及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶 (GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)活性的变化;同时在体外加入血清中与体内浓度相近的酒精,以观察酒精对酶活性的直接影响.结果酒精在体内可使血清AST活性由(24.04±3.66) U/L降至(22.25±3.27) U/L;使血清LIPA活性由(155.86±93.51) U/L降至(128.35±84.85) U/L.其余酶活性均有不同程度的升高,但仅有AMY的活性升高[由(48.78±10.66) U/L升高至(55.50±12.60) U/L]有统计学意义(P<0.01).等浓度酒精在体外对所有酶活性均有一定程度的抑制作用.结论微量酒精对酶活性均有一定直接抑制作用,但在体内则可使部分血清酶活性增高,因此在常规血清酶学检测中,应避免酒精在体内外对待检样品的污染.
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儿童患者中对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶基因型研究
目的 研究儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的基因型.方法 本研究收集了2003年12月至2005年11月我院住院患儿中分离出的对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌59株.使用E试验法检测产金属酶的耐药表型,PCR技术检测编码金属酶的IMP、VIM、SPM和GIM 4种基因型.PCR反应产物进行纯化后,使用双脱氧末端终止法进行DNA测序.将得到的拼接序列与GenBank中Blast进行同源分析,确定其基因亚型.结果 59株对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌中,纸片法检测金属酶表型结果阳性29株,占49.2%.PCR检测金属酶基因型阳性39株,占66.1%,其中IMP型阳性35株,占89.7%,VIM型阳性4株,占10.3%.未检测出SPM和GIM型金属酶.测序结果显示,IMP型测序结果均为产IMP-1亚型金属酶的绿脓假单胞菌.VIM型测序结果均为产VIM-2亚型金属酶的绿脓假单胞菌.结论 儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌,产金属酶率高于成人报道.产生的金属酶同时存在IMP-1和VIM-2两种基因型,其中以IMP-1亚型为主,少部分为VIM-2亚型.产金属酶是儿童患者对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌的重要耐药机制.在儿科进行对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的监测十分重要.
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北京和广州地区四家医院不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究
目的调查北京、广州地区不动杆菌属对碳青霉烯类的耐药性,确定其耐药株产生的碳青霉烯酶的基因型.方法用WHONET-5软件分析1999-2002年北京、广州两地不动杆菌的耐药性;从北京、广州4家医院收集对亚胺培南耐药且具有多重耐药性的不动杆菌39株;等电聚焦电泳测定酶的等电点;碱裂解法提取质粒;脉冲场凝胶电泳(PFGE)确定耐药株的亲缘关系;对TEM、SHV型基因及碳青霉烯酶基因OXA-、IMP-、VIM-进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及序列分析.结果近4年北京协和医院分离的鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性在1.8%～8.5%之间.多重耐药(即3种以上的抗生素耐药)的菌株从1995年的5%升至2002年的67%,常见的多重耐药模式为同时对头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林/三唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦及环丙沙星耐药的菌株(占44%).广州中山医科大学附属第一医院多重耐药株从1998年的20%升至2002年的57%,同时对上述4～5个药耐药的达35%.39株亚胺培南耐药株均不含质粒,接合试验证实亚胺培南的耐药基因不能转移.所有测定菌产多种β内酰胺酶:TEM-1酶、高产AmpC酶、SHV型酶及pI为6.7, 6.0的2个酶.PCR及序列分析证实35株菌产生OXA-23型碳青霉烯酶(pI为6.7),有3株携带PER-1型酶.PFGE发现在4家医院均有耐药株的克隆传播,并且常见于医院呼吸机相关肺炎及外科术后感染.结论北京、广州两地对亚胺培南耐药的不动杆菌,绝大多数产生OXA-23型碳青霉烯酶,亚胺培南耐药株的增加主要由耐药克隆株播散所致.
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荧光分光光度法测定儿童知浆壳三糖苷酶活性的评价
目的 探讨测定血浆壳三糖苷酶活性的荧光分光光度法,同时评估方法的可靠性.方法 采用荧光分光光度法测定了44例10～14岁的健康儿童血浆壳三糖苷酶的活性,同时对实验条件、方法的检出限和精密度等多方面进行了分析.结果 本法的佳激发波长和发射波长分别为358 nm和458 nm.低检出限为3.24 nmol·h-1·ml-1.回归方程为Y=38.124X+111.6,r=0.997、P＜0.01.该方法得出的样品日内和日间CV值分别6.43%和12.70%.44例10～14岁男性和女性儿童该酶活性的数值分别为(11.69±1.71) nmol·h-1·ml-1和(11.07±1.28) nmol·h-1·ml-1.结论 血浆壳三糖苷酶的活性是临床溶酶体疾病的筛查的一个重要生物学指标,初步应用结果表明,荧光分光光度法是分析该酶活性的一种简单、快速、灵敏、可靠的方法.
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发现一株产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌
目的 研究1株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的耐药机理.方法 采用浓度梯度法 (Etest)测定细菌对各抗菌药物低抑菌浓度(MIC).通过等电点分析(IEF)、质粒抽提、接合试验、转化试验、聚合酶链反应(PCR)扩增及耐药基因克隆测序分析细菌编码的β内酰胺酶.结果 临床分离的肺炎克雷伯菌等电点显示3条β内酰胺酶条带,分别为5.4、6.7和8.2.PCR扩增测序临床分离菌含TEM-1(pI, 5.4)、SHV-12(pI, 8.2)和KPC-2(pI, 6.7)β内酰胺酶编码基因.转化菌只有一条β内酰胺酶条带,为6.7.从转化菌质粒(60 000 bp)上获得1 500 bp的克隆片段,测序证实其为KPC-2编码基因.结论 亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的质粒上携带水解碳青霉烯类抗生素的A类2f组KPC-2酶的编码基因.
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凝血检查在肝病中的临床应用进展
肝脏合成几乎所有的凝血因子、抗凝因子及与纤溶系统有关的蛋白酶类,此外,它还通过清除已激活的凝血因子和纤溶激活物以及灭活肝素等方式调节体内凝血系统的平衡.目前越来越多的凝血检查指标被用于临床,对肝病的诊断、治疗和预后具有重要的临床价值.本文就肝病时伴有的PLT异常、凝血-抗凝系统障碍、纤溶系统亢进等几个方面凝血检查的临床应用进展作一综述.
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CK及其同工酶CK-MB测定的方法学进展和临床应用
肌酸激酶(creatine kinase,CK)是人体能量代谢中的重要酶类,可以调节组织细胞的功能,保证细胞生理活动的需要.从首次在进行性肌营养不良症患者的血清中发现CK的存在开始,CK及其同工酶的结构、在疾病的诊治和预后评估中的应用、测定标准化等方面的研究从未间断.
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产AmpC酶阴沟肠杆菌耐药与ampR调节基因的研究
目的 对阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的检出率、耐药性及ampR调节基因序列进行分析,探讨阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的耐药性与ampR调节基因的关系.方法 采用琼脂稀释法对阴沟肠杆菌进行药敏试验,酶粗提物头孢西丁三维试验检测AmpC酶,经表型筛选法筛选,对其中2株去阻遏高产突变株和1株高度诱导株产AmpC酶的ampR基因行PCR扩增并对产物序列进行分析.结果 阴沟肠杆菌产AmpC酶株的检出率为26.1%.产AmpC酶株中检出去阻遏高产突变株9株,高度诱导株2株,阴沟肠杆菌去阻遏高产突变株ampR基因的氨基酸序列Asp-135→Asn发生突变.结论 产AmpC酶细菌多呈多重耐药,亚胺培南是治疗产AmpC酶细菌感染的较可靠的药物.阴沟肠杆菌ampR基因突变可能与其去阻遏表达有关.
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碳青霉烯酶和肺炎克雷伯杆菌碳青霉烯酶:当前水平
多药抵抗的肠杆菌伴随一系列碳青霉烯酶的出现给相关疾病的临床诊断和治疗带来了挑战.肺炎克雷伯杆菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemases,KPC)具有水解几乎所有β-内酰胺类包括青霉素、头孢菌素、单环β-内酰胺类和碳青霉烯类抗生素的能力.当前抗微生物表型易感性试验检测KPC的结果不可靠,但改良的Hodge试验和PCR可用于对KPC的检测.治疗碳青霉烯类耐药菌感染可选掸多粘菌素、磷霉素、替加环素和多尼培南,也可以尝试一些多药联合或延长疗程的治疗.严格的感染控制措施对阻断感染的传播也是必要的.
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肝素酶:抗肿瘤转移的新靶点
肝素酶(hpa)是裂解硫酸乙酰肝素蛋白多糖的惟一酶类,能破坏细胞外基质及基底膜,并参与肿瘤血管生成,与肿瘤的侵袭转移密切相关.hpa也由此逐渐成为引人注目的抗肿瘤治疗新靶点,其抑制剂的研制可望为抗肿瘤治疗开辟新的途径.本文综述了hpa的结构与功能,对肿瘤转移的促进作用与机制,以及hpa抑制剂作为抗肿瘤新药的新研究进展.
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乙型肝炎的实验检查及其临床意义
0引言乙型肝炎在临床上的表现千变万化,给临床医生的诊断和治疗带来困惑.为了准确恰当的评估乙肝患者的病情,必须依赖相关的实验室检测和辅助检查,主要包括HBV血清标志物检测、肝脏酶类生化检测、肝组织病理学检查和B超、CT、MRI等影像学检查及胃镜等器械检查.本文主要探讨以上几种检查在乙型肝炎诊断中的临床意义.
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糖友夏季警惕高尿酸血症——它让您不仅仅面临痛风威胁
尿酸高是不是就是痛风呢?尿酸是什么?尿酸是嘌呤代谢的产物,而嘌呤是我们的遗传物质核酸的组成成分之一,这类物质也需要代谢,经过一系列复杂的代谢之后,大分子物质转变成小分子物质,嘌呤分解代谢为三氧嘌呤,这就是我们常说的尿酸.人以及其他动物都有遗传物质,因此都会有尿酸这种代谢产物,只是其他动物可以把尿酸继续分解转化成更小的分子,而人体缺乏分解尿酸的酶类,因此尿酸便是人体嘌呤代谢的终产物了.人体的尿酸有两个来源,一个是外源性的,也就是我们摄取的食物中含的嘌呤代谢而来的,另一个是内源性的,就是自身分解代谢产生的,不管是内源性还是外源性的尿酸都是来自嘌呤代谢,并且共同组成血尿酸,其中内源性的尿酸是人体尿酸的主要来源(大约占80％),而外源性尿酸只占小部分(大约占20％).
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齐留通在急性坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用
5-脂氧合酶(5-Lipoxygenase,5-LOX)是脂肪酸氧化代谢的重要酶类,近年的大量研究已经证实,5-LOX在许多肿瘤的发生和发展中都起到重要作用.而关于急性胰腺炎(AP)时,5-LOX在胰腺腺泡细胞凋亡中作用的研究却鲜有报道.本文旨在探讨5-LOX抑制剂与AP腺泡细胞凋亡的关系和意义.
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赖氨酰氧化酶与肝纤维化研究进展
赖氨酰氧化酶(lysyl oxidases,LOXs)又称蛋白赖氨酸-6-磷酸酶,是一种在细胞外基质(如胶原和弹性蛋白)的修饰过程中起重要作用的酶类,可以引起胶原纤维和弹性纤维的交联效应,包括分子内和分子间的交联[1].因此,在细胞外基质形成和修复反应中发挥关键作用[2].
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颅脑损伤继发肝功能损害159例临床分析
颅脑损伤常引起多器官损害,肝功能损害是颅脑损伤后常见并发症之一,也是颅脑损伤并发多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS )的重要组成部分,笔者针对1045 例颅脑损伤患者进行检测,发现肝功能酶类指标超出正常参考范围[1] 者182 例,其中23 例有肝脏外伤或肝炎病史.现仅对剩余的159 例患者进行分析,发现其肝功能损害程度与颅脑损伤程度有密切关系,现报告如下.
