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基于分子模拟技术筛选大黄、羌活、秦艽的5-LOX、LTA4H抑制剂
5-LOX(5-lipoxygenase)和LTA4H(leukotriene A4 Hydrolase)作为花生四烯酸代谢途径中生成炎症介质白三烯(LTs)的重要支路,是抗炎药物研究的关键靶点.大黄、羌活、秦艽3味中药具有明确的抗炎活性.该文以5-LOX,LTA4H靶点为研究载体,利用DS4.0(discovery studio)中的Hiphop模块构建靶标抑制剂药效团初步筛选3味中药的成分数据库,获得5-LOX和LTA4H潜在活性成分.利用CDOCKER模块进行进一步筛选药效团初筛所得成分,基于原配体的打分值以及关键氨基酸建立筛选规则,终得到5-LOX潜在活性抑制剂12个,包括原矢车菊素B2-3,3'-O-双没食子酸酯、revandchinone 2在内的大黄成分6个,包括二十二烷酸在内的羌活成分4个以及褐煤酸甲酯、N-二十二烷酮-0-氨基苯甲酸乙酯2个秦艽成分;得到LTA4H潜在活性抑制剂7个,包括大黄中的revandchinone 1,revandchinone 4,羌活中的二十三烷酸、二十四烷酸以及二十烷酸甲酯,秦艽中的褐煤酸甲酯、N-二十二烷酮-O-氨基苯甲酸乙酯.该研究能够高效、低耗的筛选3味中药的5-LOX、LTA4H潜在抑制剂,为发现3味中药中发挥抗炎药效的化学质量指标提供助力,以推动对于3味中药的全程质量控制.
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5-脂氧酶信号通路与动脉粥样硬化的关系
5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是催化花生四烯酸为白三烯类(leukotriene,LT)炎症因子生成的关键限速酶,主要存在于内皮细胞、多形白细胞、巨噬细胞等,尤其在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)早期泡沫细胞中大量表达.LTs 中LTB4 和LTC4 为强效炎症因子,可增加血管通透性,由相应的G 蛋白偶联受体(LTB4 的受体BLT1/2,cys-LTs 的受体CysLT1/2)介导.
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齐留通在急性坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用
5-脂氧合酶(5-Lipoxygenase,5-LOX)是脂肪酸氧化代谢的重要酶类,近年的大量研究已经证实,5-LOX在许多肿瘤的发生和发展中都起到重要作用.而关于急性胰腺炎(AP)时,5-LOX在胰腺腺泡细胞凋亡中作用的研究却鲜有报道.本文旨在探讨5-LOX抑制剂与AP腺泡细胞凋亡的关系和意义.
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5-脂氧合酶基因沉默后裸鼠胰腺癌移植瘤相关基因的变化
目前认为,5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢途径异常是促进多种肿瘤发生、发展的重要原因之一.其机制为促进细胞过度增殖、抑制凋亡;促进恶性肿瘤血管生成;提高恶性肿瘤发生及转移的潜能、增加肿瘤细胞的侵袭力;抑制5-LOX能使多种恶性肿瘤细胞增殖减低并诱导细胞凋亡[1].本实验利用基因芯片检测靶向5-LOX的shRNA真核表达载体导入SW1990细胞形成的裸鼠皮下移植瘤内并联合雷公藤内酯醇(TL)治疗后移植瘤组织基因表达谱的变化,探讨沉默5-LOX基因表达治疗胰腺癌的应用价值.
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5-脂氧合酶代谢通路与肿瘤
花生四烯酸(AA)可通过环氧化酶(COX)途径代谢,亦可通过5-脂氧合酶(5-LOX)途径生成多种有生物活性的物质.5-LOX代谢通路中的蛋白在肿瘤中高表达,其表达水平与肿瘤的分期、转移、预后以及肿瘤对传统放化疗的敏感性相关,该代谢通路可通过影响细胞的增殖和凋亡、血管生成以及细胞的侵袭和迁移等机制参与肿瘤的发生发展;抑制该通路可以抑制肿瘤生长.现就5-LOX通路与肿瘤的关系及其在肿瘤诊治中的研究进展,综述如下.
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5-脂氧化酶在膀胱癌中的表达及其临床意义
目的：检测5-脂氧化酶（5-lipoxygenase ，5-LOX）在膀胱癌组织中的表达水平并探讨其表达水平与膀胱癌预后的关系。方法采用免疫组化法检测5-LOX在23例膀胱癌患者癌组织中的表达水平，并用Kaplan-Meier法进行对患者进行生存分析。结果膀胱癌组织中5-LOX的表达明显高于癌旁组织，表达率与患者生存率明显呈反比关系（ P＜0.05）。结论5-LOX可以作为膀胱癌临床诊断参考标准之一，并可以作为膀胱癌患者预后状况的评判依据。
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消化系统肿瘤治疗以环氧合酶-2和5-脂氧合酶双通路作为靶点的研究进展
花生四烯酸(arachidonic acid,AA)主要通过环氧合酶(cyclooxygenase,COX),脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)通路代谢.研究表明,COX和LOX在多种人类肿瘤中呈高表达.其中,COX-2和5-LOX在某些肿瘤中还出现共同表达,其代谢产物在肿瘤的发生发展过程中起重要作用.
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米诺环素对5-LOX通路及动脉粥样硬化中炎症反应的抑制作用
目的 米诺环素对5-LOX通路及动脉粥样硬化(atherosclorosis,AS)中炎症反应的抑制作用.方法 以高脂喂养ApoE-/-小鼠建立AS模型,同时给予米诺环素或辛伐他汀治疗12周.比较各组小鼠的血脂水平,5-LOX的表达及其代谢物LTB4的含量;测定小鼠主动脉AS斑块的面积及斑块组成(脂质、胶原和巨噬细胞含量);PCR方法比较小鼠主动脉中相关炎症因子TNF-α、IL-6、VCAM-1、MMP-2、MMP-9 mRNA的含量.结果 米诺环素能显著减少主动脉中5-LOX的表达及血液中LTB4的含量;降低小鼠主动脉中相关炎症因子TNF-α、IL-6、VCAM-1、MMP-2、MMP-9 mRNA的含量.在AS斑块的形成和发展中,米诺环素显著降低了ApoE-/-小鼠AS斑块的面积,减少斑块中巨噬细胞的含量并增加胶原的含量,提高斑块的稳定性.但是米诺环素没有改变ApoE-/-小鼠的血脂水平.结论 米诺环素有抗AS的作用,其作用可能与其对5-LOX通路及炎性细胞和炎症介质的抑制作用有关.
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肝细胞肝癌中5-LOX的表达及其与bcl-2和bax表达的关系
目的 研究肝细胞癌(HCC)中5-脂氧合酶(5-LOX)的表达与bel-2和bax表达的关系及其可能机制.方法 检测48例HCC癌组织及其癌旁组织,应用RT-PCR和免疫组织化学S-P法检测5-LOX、bel-2和bax的表达情况.结果 在癌、癌旁组织中5-LOX、bel-2和bax基因mRNA表达分别是30/48、33/48、24/48和12/48、9/48、36/48,与癌旁组织比较,差异有显著性(P＜0.05).HCC中5-LOX蛋白阳性率为56.3%,与bel-2蛋白的表达呈显著正相关(r=0.447,P＜0.01),但与bax蛋白表达呈显著负相关(r=-0.567,P＜0.01).结论 5-LOX与肝细胞肝癌的发生、发展关系密切;其机制可能是通过上调bcl-2及同时下调bax等凋亡相关调节因子表达水平有关.
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5-LOX siRNA人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤模型的建立及意义
目的 建立5-脂氧合酶(5 -lipoxygenase,5-LOX)5-LOX siRNA转染人肝癌细胞HepG2裸鼠瘤动物模型,探讨iR-NA干扰技术在裸鼠瘤模型中应用的可行性,为肿瘤的实验研究提供平台.方法 分别用pRNAT-U6.1-5-LOX siRNA转染的HepC2细胞、空白质粒pRNAT-U6.1转染的HepG2细胞和未转染的HepG2细胞接种裸鼠建立移植瘤模型,分为转染组、转染空载体组和未转染组.建模前,用免疫荧光定量PCR检测转染HepG2细胞5-LOX mRNA表达,成瘤后测量种植瘤体积,并用Westem-blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX的蛋白和mRNA表达.结果 5-LOX siRNA转染的细胞5-LOX mRNA表达量下降(P＜0.01),转染组肿瘤平均体积与转染空载体组及未转染组比较明显减小(P＜0.01),而且瘤体5-LOX蛋白及mRNA表达量亦明显下降(P＜0.01).结论 5-LOX siRNA转染肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤瘤实验模型建立成功.将干扰技术和裸鼠移植瘤相结合,为肿瘤的实验研究提供一种更可靠有效的研究方法.
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5-LOX siRNA对人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤生长的作用和ERK的影响
目的 研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响.方法 将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制.再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型.裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2).接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积.Western blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达.结果 转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01).结论 抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖.
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5-脂氧合酶和血管内皮生长因子在肾癌中的表达及与预后的关系
5-脂氧合酶(5-Lox)是近年来发现的一个与肿瘤生长相关的新基因,已发现它在很多恶性肿瘤中呈高表达,如胃癌、肠癌,并且其表达与肿瘤的发展和患者的存活率相关,极具临床研究价值.我们采用免疫组织化学方法联合检测5-LoX和血管内皮生长因子(VEGF)在肾癌上的表达情况及相互关系,探讨它们作为肾癌的有效预后因素和预测指标的可行性.
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脂氧合酶在胃癌中的表达及其意义
目的 检测5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)和15-脂氧合酶-1(15-lipoxygenase-1,15-LOX-1)mRNA及蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并研究两者间的关系.方法 采用RT-PCR和western blot检测胃癌组织及相匹配的癌旁正常组织中5-LOX、15-LOX-1 mRNA和蛋白的表达.结果 5-LOX mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著高于癌旁正常组织(P＜0.05),而15-LOX-1 mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织(P＜0.05).5-LOX与15-LOX-1在胃癌组织中的表达无明显相关(P＞0.05).结论 胃癌组织中存在5-LOX和15-LOX-1的表达失衡,且可能与胃癌的发生发展有关,但二者之间无相关性.
关键词： 胃肿瘤 5-LOX 15-LOX-1 逆转录-聚合酶链反应 免疫印迹 -
5-LOX代谢途径与牙周炎相关性的研究进展
花生四烯酸的代谢产物在炎症性骨破坏疾病的病理过程中发挥着重的作用,其主病理机制为破骨细胞的形成和活化,近年来发现花生四烯酸经脂氧酶(1ipoxygenase,LOX)途径代谢的产物LTB4在牙周炎患者龈沟液中的含量高于正常者,给予5-LOX抑制剂的炎症模型中破骨细胞的数量和骨破坏的程度均低于对照组,因而探讨花生四烯酸经5-LOX途径代谢对牙周炎的影响及其机制将有利于进一步阐明牙周炎的发病机理,为牙周炎的防治提出新的思路,本文就有关花生四烯酸脂氧酶代谢途径与牙周炎关系的研究做一综述.
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醒脑静提取物对脑缺血再灌注炎性损伤5-LOX-CysLTs-CysLT通路的影响
目的:通过检测缺血2h再灌22h时,实验性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织5-LOX、LTB4、LTD4、CysLTs含量变化和CysLTR受体在皮层和海马的表达,以期发现5-LOX通路在脑缺血再灌注损伤的作用,并探讨醒脑静对该通路的防治作用.方法:大鼠连续灌胃给药5天后,复制MCAO模型,缺血2h再灌注22h,用ELISA法检测上述时间点患侧脑匀浆中5-LOX、LTB4、LTD4和CysLTs的含量;用Western blot方法检测了CysLT1和CysLT2受体蛋白表达.结果:①大鼠脑缺血2h再灌注22h时,模型组大鼠脑匀浆中5-LOX含量与假手术组相比有明显增强,醒脑静(25mg/kg)与模型比较有明显降低,齐留通组亦出现显降低;②模型脑匀浆中LTB4与假手术相比明显增强,与模型比较,醒脑静25mg/kg组和齐留通组明显含量有所降低;③模型脑匀浆中LTD4与假手术有明显增强,与模型比较,各给药组均出现明显降低;④模型脑匀浆中CysLTs与假手术有明显增强,与模型比较,醒脑静50mg/kg组现明显降低.结论:急性脑缺血损伤后5-LOX、LTB4、LTD4和CysLTs的模型含量均有不同程度增高,试验药醒脑静各剂量组和5-LOX阻断剂齐留通组可使造模组5-LOX、LTB4、LTD4和CysLTs含量不同程度减轻,表明醒脑静可能通过抑制花生四烯酸5-LOX途径产生抗实验性脑缺血损伤.
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毛蕊花糖苷对内毒素诱导的急性肺损伤的保护作用
目的:探讨毛蕊花糖苷对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)保护作用.方法:于小鼠腹腔注射LPS(8 mg/kg)复制ALI动物模型.将小鼠随机分为空白组对照组、LPS组、地塞米松组(2 mg/kg)、毛蕊花糖苷组(20 mg/kg、40 mg/kg).观察各组肺组织病理学改变,测量肺湿/干重比,支气管肺泡灌洗液中性粒细胞百分比、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列素E2(PGE2)含量及肺组织中环氧酶-2(COX-2)5-脂氧合酶(5-LOX)蛋白表达.结果:毛蕊花糖苷组(20 mg/kg、40 mg/kg)可有效减轻LPS所致肺组织病理学变化,能降低肺泡灌洗液中炎症细胞的数目、MDA、IL-6、TNF-α、PGE2,增加肺泡灌洗液中SOD;著降低肺湿/干重比重,减低COX-2与5-LOX蛋白水平.结论:毛蕊花糖苷20 mg/kg、40 mg/kg可减轻LPS所致急性肺组织损伤,对LPS诱导的急性肺损伤有保护作用.
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麝香和冰片对大鼠脑缺血再灌注恢复早期炎性损伤的保护作用研究
目的 研究麝香和冰片对大鼠脑缺血再灌注恢复早期炎性损伤的保护作用.方法 将105只大鼠分为假手术组、模型组、麝香、冰片50mg/kg,25mg/kg剂量组,醒脑静10mL/kg组.各组预防给药4d后,采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注模型,缺血72h后,考察麝香和冰片对缺血再灌注后对神经功能损伤的改善作用,脑组织环氧化物酶(COX-2)及5脂氧酶(5-LOX)活性的影响.结果 麝香与冰片能改善大鼠行为学异常,降低缺血再灌注后恢复早期脑内 COX-2和5-LOX的活力.结论 麝香和冰片对脑缺血再灌注恢复早期炎性损伤有一定的保护作用.
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大鼠闭合性脑损伤后5-LOX、c-fos蛋白、NSE的表达及表达时相的研究
目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)、c-fos蛋白及神经元特异性烯醇化酶(NSE)在闭合性脑损伤后不同时间点的表达情况及其意义.方法 Wistar大鼠55只随机分成正常对照组、假损伤组及损伤后0.5 h组、1 h组、2 h组、4 h组、8 h组、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组.用免疫组化(SP)法检测5-LOX、c-fos蛋白和ELISA检测NSE在闭合性脑损伤后不同时间点的表达情况.结果 5-LOX免疫阳性细胞在损伤后8 h明显增高,24 h达到高峰,然后逐渐降低,损伤72 h后仍高于正常值;c-fos蛋白于损伤0.5 h后表达明显增高,8 h达到高峰,24 h降至正常值;血清中的NSE于损伤2 h候表达增高,24小时达到高峰,损伤72 h后仍高于正常值.结论 大鼠闭合性脑损伤后5-LOX、c-fos蛋白及血清中的NSE表达均上调,且各自具有时间规律,有希望为法医学中的颅脑损伤时间的推断提供参考.
