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流行性出血热Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗安全性及血清学效果观察
为观察流行性出血热(EHF)Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗安全性及血清学效果，山东省卫生防疫站与中国药品生物制品检定所和浙江省台州市卫生防疫站合作于1999年在浙江台州和山东高密共同进行了人群接种观察。 一、材料和方法 1.疫苗：Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗为天元生物药业生产，新药临床研究批件(1999)制申体第六号，疫苗批号：980526、980623、980609，所用毒株为Z37;另以该公司生产的双价疫苗为对照组，批号：990307。以上两种疫苗有效期均为两年。 2.观察对象：分设南北两个观察点，南方点设在浙江省台州市，北方点设在山东省高密市。选择16～60岁无EHF病史健康人，随机分组，分别接种单价Ⅱ型和双价疫苗。 3.疫苗分组及接种对象：单价Ⅱ型疫苗(批号：980526、980623、980609)接种对象分别为高密市卫生防疫站职工(466人)、台州市交警(396人)、高密市农民(124人)和高密市卫生防疫站(60人)。双价疫苗(批号：990307)接种对象高密市税务局职工(503人)。 4.接种部位与免疫程序：接种部位在上臂三角肌内，每人每次接种1 ml,按0、7、28 d接种3针。 5.反应观察：在4个组中，每组各选50人于每次接种前及接种后24、48、72 h分别进行全身体温和局部红肿反应观察。具体观察方法及判断标准参见文献［1］。 6.免疫学效果观察：4个组各选择30人，于免前、全程免后2周采静脉血，进行荧光抗体和中和抗体检测。 (1)荧光抗体检测：抗原片为浙江省卫生防疫站制备，羊抗人荧光抗体购自上海生物制品研究所，批号：990310。阳性界值为1∶10。 (2)中和抗体检测：由中国药品生物制品检定所用空斑减少中和试验检测。
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宁夏首次从社鼠鼠肺中分离到汉坦病毒
汉坦病毒属于布尼亚病毒科汉坦病毒属,是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS)的病原体[1].在我国流行的是HFRS,鼠类为其自然宿主和主要传染源.2009年,笔者从1只社鼠鼠肺中分离到汉坦病毒,经鉴定为汉滩型(HTN),现报告如下.一、材料与方法1.标本来源:于2009年在宁夏回族自治区泾源县HFRS监测点,采用夹夜法捕鼠,共捕鼠266只.捕获鼠类经分类鉴定和登记后,无菌解剖采集鼠肺标本,共采集266份鼠肺标本.2.鼠肺组织抗原检测:采用直接免疫荧光法,将采集的鼠肺标本用冷冻切片机制成3～5 μm厚的切片,冷丙酮固定10 min后吹干.玻片上滴加用伊文思兰PBS稀释的抗汉坦病毒单克隆荧光抗体(由国家出血热实验室提供)15 μl/孔,置湿盒内37℃水浴30 min.反应后的玻片用 pH 7.2～7.4,浓度为0.02 mol/L PBS冲洗3次,蒸馏水漂洗1次,吹干,荧光显微镜观察结果.
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女性生殖器疱疹中医证治需注意什么?
答:生殖器疱疹是一种常见的下生殖道性传播疾病,其致病原为人单纯疱疹病毒-Ⅱ型(HSV-Ⅱ)及Ⅰ型,前者约占85%,其发病率近年来有所上升,复发率也较高.本病属中医"阴疮"范畴,中医证治需注意以下几点.在诊断方面,本病原发病灶第一次发病常较严重,并有全身症状,病程亦长些,潜伏期为2～7天,首先在大小阴唇表面出现针刺感或痒感,然后发生多个水泡.水泡很快破裂形成溃疡,有痛感,亦可出现尿痛、尿潴留、发热、腹股沟淋巴结增大.疱疹性宫颈炎发作时,可有大量水样分泌物,外生殖器上未破的水泡是生殖器疱疹特殊的病变.实验室检查:荧光抗体HSV相关抗原呈阳性;血清中特异的单纯疱疹病毒抗体滴度增加4倍以上有诊断意义;溃疡涂片巴氏染色后,在涂片中可以找到典型的HSV多核巨细胞,上述三点都可作为验证病毒的方法,可结合临床加以确诊.
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中华按蚊旬密度与疟疾发病率、荧光抗体阳性率相关性分析
目的:了解中华按蚊密度与疟疾发病的关系.方法:1980～1998年在本省不同疟区设立监测站,采用人饵帐诱捕法、血检和间接荧光抗体法,对当地中华按蚊密度、疟疾发病及居民血清抗体水平进行系统监测.结果:当中华按蚊密度降低时,疟疾发病、居民血清抗体水平亦随之下降.结论:3项指标呈现相关关系.
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不同血清稀释度对动物莱姆病酶联免疫吸附试验检测结果分析
在当前尚无动物莱姆病诊断试剂和操作技术规程情况下,在引用人莱姆病诊断试剂及方法时,考虑人和动物抗体活性、血清学反应差异等因素,不能完全按人莱姆病检测标准.为选择动物佳血清稀释度,故进行了本项试验.1 材料和方法被检血清(牛、羊)共1 083份,分别采集于陈巴虎旗、鄂温克族自治旗、海拉尔市及我市所属各镇;莱姆病酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断试剂盒、莱姆病抗原包被载玻片和兔抗羊、兔抗马荧光抗体,均由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供;每份血清样品均以100、200、400倍稀释后分别进行ELISA测试.ELISA、间接免疫荧光法(IFAT)按中国疾病预防控制中心传染病预防控制所暂定的操作规程实施.
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口腔牙菌斑和胃液幽门螺杆菌荧光抗体检测方法的评价
目的 寻求一种简便、准确的非创伤性检测方法检测幽门螺杆菌(Hp)感染.方法 应用荧光抗体方法 、细菌培养、尿素酶试验、Hp诊断卡4种方法对62例胃、十二指肠疾病患者胃液、口腔牙菌斑进行Hp检测,胃液采集采用胶囊采样法.结果 4种方法胃液Hp检出率分别为85.5%、9.7%、61.3%、56.5%;口腔牙菌斑中Hp检出率分别为88.7%、25.8%、69.4%、90.3%.结论 应用荧光抗体结合胶囊采样法检测胃液Hp,是一种无痛性非创伤性手段,其特异性强,灵敏度高,值得临床应用.
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肾小球肾炎长期误诊致尿毒症
[病例] 男,66岁.主因无力、头痛、发热2天,于1998年1月15日第1次入院.既往体健,无肾病史.查体:体温38.2℃,脉搏78/min,呼吸19/min,血压118/76 mmHg.意识清楚,双眼睑无水肿,心肺未见异常,肝脾不大,双下肢无水肿.实验室检查:血白细胞11.8×109/L,中性粒细胞0.90,淋巴细胞0.10,血小板314×109/L;尿素氮7.28 mmo/L,肌酐167 μmol/L;出血热荧光抗体检查(-).尿红细胞0～2/HP,蛋白(3+),隐血(3+).
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改良衣原体、支原体荧光检测法
采用军事医学科学院微生物检验中心生产试剂的原方法,将标本涂于载玻片上,然后以甲醇固定10 min,在将荧光抗体染液滴于标本上,置湿盒中,于37℃温箱孵育30 min后,冲洗,晾干,封片,镜检,所需时间近1 h.
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出血热疫苗致类出血热表现一例
患者,男,38岁.主因发热、头痛、腰痛、眼眶痛、酒醉貌6 d于1999年6月16日入院.患者于1999年6月15日预防接种流行性出血热灭活疫苗(卫生部长春生物制品研究所),次日即出现发热、头痛、头晕、腰痛、眼眶痛、无流涕、打喷嚏、咳嗽,按感冒治疗无效.3 d后发现颜面、颈部、上胸部皮肤潮红,酒醉貌.近一月本地有出血热散发流行.入院检查:体温36.5℃,脉搏66次/min,呼吸18次/min,血压18/13 kPa.神清合作,颜面、颈部、上胸部皮肤潮红,压之褪色,全身皮肤无出血点,双眼睑轻度浮肿,诸副鼻窦无压痛,扁桃体无红肿.心肺(-),肝、脾无肿大,腹部无征.辅助检查:尿常规示:尿蛋白(+),红细胞0～1个/HP,透明管型2～3个/HP.血象:白细胞9.7×109/L,嗜中性70.2%,淋巴29.8%.血色素、血小板、尿素氮、粪常规均正常.出血热荧光抗体(-).诊断:出血热疫苗致类出血热表现.治疗:立即使用抗病毒、扩张肾血流量等药物.选用:病毒唑0.5/d,清开灵20 mL/d,丹参20 mL/d,能量合剂1次/d,均采取静滴.潘生丁50 mg/次,3次/d,口服.治疗2 d发热、头痛、眼眶痛停止,酒醉貌消退,3 d后腰痛停止,尿蛋白消失而痊愈出院,随访4个月未见复发.
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荧光标记免抗淋球菌IgG的研制
淋病是对人类健康危害较大的性传播疾病之一,对淋病的检验应力求快速、准确,我们应用淋球菌标准菌株免疫家兔,再经异硫氰酸荧光黄(FITC)标记免抗淋球菌IgG,制成的兔抗淋球菌IgG荧光抗体获得了良好的效果,现报告如下.
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弓形体致眼病三例
例1 男 42岁 89年患急性虹膜睫状体炎,经散瞳、眼局部及全身应用糖皮质激素及抗菌素类药物治疗后症状消失,但以后频繁复发,每年1-2次.98年8月来我院就诊.右眼球结膜充血:角膜后大量点状kp,房水混浊,瞳孔12-9时位后粘连,玻璃体透明,眼底无异常.诊断为虹膜睫状体炎.追问病史;患者养猫5年以上.实验室检查:弓形体血清学试验阳性.荧光抗体染色检查查见弓形体虫体.治疗:结膜下及半球后注射庆大霉素2万单位、地塞米松5mg,日一次,5日后改为隔日一次.1%阿托品眼膏日一次散瞳.
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应用三种方法测定水痘病毒抗体滴度比较
水痘是儿童一种急性、高传染性疾病,建立水痘病毒抗体测定方法,对水痘血清流行病学调查、水痘疫苗免疫效果考核具有十分重要意义.作者应用蚀斑减少中和试验、间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验,对22份健康人群血清和2份带状疱疹病人恢复期血清进行了VZV抗体测定.结果24份血清VZV中和抗体、荧光抗体、酶标抗体GMT分别为1:2.38、1:4.36和1:110.07,3种抗体GMT比值为1:1.83:46.25.此结果提示,蚀斑减少中和试验测定VZV抗体敏感性低,与荧光法接近,酶联免疫吸附试验的敏感性高.
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疱疹病毒感染者病毒抗原和相应抗体的检测对比
免疫荧光技术用于检测衣原体，EB病毒［1］抗体等已较广泛，但用于测定病毒抗原报道甚少。为此，我们采用免疫荧光法检测疱疹病毒(HSV)抗原，并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。材料和方法 一、主要试剂 羊抗人lgG抗体，羊抗人lgG荧光抗体，卫生部上海生物制品所产品；酶联免疫测定盒广州中山生物制品公司产品。 二、标本采集与处理 对照组取自健康妇科体检的宫颈刮片，淋病及霉菌性阴道炎分泌物，梅毒皮损刮取物等标本共64份，患者组取自皮肤性病科和性病防治研究中心初诊为疱疹病毒感染的患者皮肤粘膜损伤处刮片及疱疹液，年龄18～55岁，刮取物及分泌物均涂布于洁净载玻片上以备检验。 作ELISA检验者取临床初诊为疱疹病毒感染患者的血清作检测。作直接荧光抗体法(DFA)和间接荧光抗体法(IFA)检验的标本，将疱疹液及皮肤粘膜病灶刮取物作细胞涂片，丙酮固定，干燥后分别进行DFA和IFA测定。
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流行性出血热病后血清特异性抗体持续状态的临床研究
近年来由于流行性出血热(出血热)病毒分离成功[1]以及检测技术迅速发展,从临床角度研究病后血清特异性抗体的持续状态已成为可能.本文用出血热病毒感染Vero-E6细胞作抗原,以间接免疫荧光法对上海松江县20年来的428例出血热患者的随访血清检测IgG荧光抗体,借以追溯核对该地区既往病例的临床诊断;了解病后抗体的持续状态;同时探索某些临床因素是否会影响病后抗体水平;为研究病后能否获得持久免疫提供依据.
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抗人免疫球蛋白G多克隆荧光抗体的制备及在肾活检中的应用
目的:制备抗人免疫球蛋白G(IgG)多克隆荧光抗体,并用于肾病的病理诊断. 方法:以免疫新西兰兔制备多克隆抗体, 用亲和层析的方法纯化抗体,并用ELISA法双向琼脂扩散,Westen-blot和免疫组化等方法对多克隆抗体进行测定.纯化的抗体标记荧光素,用免疫组化的方法鉴定并用于临床肾病的辅助诊断. 结果:获得的抗体琼脂双扩滴度为1∶32.ELISA法测定效价为1∶128000,Westen-blot 证实抗体特异性识别人IgG.纯化后抗体效价仍有1∶56000 ,灰度分析证实纯化后的抗体纯度达80%.间接法免疫组化检测抗体滴度为1∶800.标记荧光后效价无明显下降,免疫组化鉴定在临床病例中该荧光抗体能特异性识别人IgG. 结论:得到纯化后的抗人IgG抗体有良好的特异性和亲和性,抗体的结合力较高,标记荧光后得到的多克隆荧光抗体对具有IgG阳性的肾组织反应特异性强, 与商品化的抗人IgG抗体比较,效价及特异性均无显著差异,可用于肾病的临床诊断.
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流行性出血热并发脊髓炎1例
患者男性,农民,40岁.因发热后两下肢无力1周人院.半月前无明显诱因出现畏寒,发热,全身酸痛.当地测流行性出血热荧光抗体IgM1:32,诊断为流行性出血热.经输液,予青霉素、病毒唑等治疗,4～5天后症状缓解,但出现口渴,尿量增多,每天约5000ml,以夜尿为主,持续4～5天恢复正常.近1周来不明原因出现两下肢无力行走不稳,不能站立,进行性排尿困难,但无咳嗽、腹泻,无头痛、神志改变等症状.
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从海南省人血清中检出甲属虫媒病毒HYM1抗体
1995年,从海南省立才蚊虫标本中分离到1株病毒,编号为HYM1.经理化、生物学性状及血清学鉴定表明HYM1与MAY病毒抗原性相近.应用间接免疫荧光法对海南省部分地区人血清标本共426份,进行了抗体检测.其中当地人血清标本226份,阳性17份,阳性率为7.08%.驻海南省部队人血清标本200份,阳性1份,阳性率为0.5%.
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云南山区崀峨乡有钉螺无血吸虫病区的研究
据不完全统计，我国存在有钉螺孳生而无血吸虫病流行(简称有螺无病)地区分布于10省、市、自治区的88个县(市)，约735个乡(镇)，而我省有7个县18个村[1]。为证实永胜县峨乡是否存在有螺无病现象，并分析其形成原因，本文于1996年对峨乡血吸虫病流行的病情、螺情等方面进行了系统调查，现将研究结果报告如下。1 方法1.1 人群病情调查1.1.1 调查对象峨乡4～60岁人群共965人。1.1.2 抗原的制备采用云南日本血吸虫尾蚴感染成功后的家兔肝脏，按常规方法，制备石蜡包埋福尔马林固定含有大量血吸虫卵肉芽肿肝组织切片，做成厚6μm的石蜡切片，存于4℃冰箱备用。1.1.3 诊断血清羊抗人IgG荧光抗体购自上海生物制品研究所。其工作浓度为1：8，批号为960201。1.1.4 受检血清从调查对象的耳垂或手指采血制成两个滤纸干血滴(每个血滴直径1cm)，凉干后置于4℃冰箱备用。IFAT法：按[2]进行。1.1.5 粪便检查对IFAT法检测阳性者，按常规粪便检查法进行。1.2 保虫宿主感染情况调查对峨血吸血病保虫宿主的粪便进行孵化(顶管孵化法)。其中包括马9匹，黄牛8头、水牛28头、猪88头、骡14头、驴13头、羊四群。1.3 螺情调查1.3.1 1996年8月通过系统抽样和环境抽样方法对峨钉螺分布情况进行调查。依据螺点分布理论[3]，共调查145个条(块)，18169.5m2。1.3.2 对捕获的钉螺进行解剖和逸螺，以检查有无血吸虫感染。
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应用流式细胞仪减少荧光抗体用量的方法学探讨
目的:探讨淋巴细胞数量＜1.5×109/L肝移植受者应用流式细胞仪检测时,减少荧光抗体用量的可行性.方法:25例肝移植受者,淋巴细胞数量＜1.5×109/L,用流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+及NK细胞,按所用荧光抗体量分为3组,3组荧光抗体量分别为20、10、5μl.统计分析3组间差异的显著性意义.结果:所测CD3+、CD4+、CD8+及NK细胞的结果三组间差异无显著性意义(P＞0.05).结论:对于淋巴细胞数＜1. 5×109/L的肝移植受者,减少荧光抗体用量至5μl对CD3+、CD4+、CD8+及NK实验结果没有影响,比常用量可节约试剂成本4倍.对临床肝移植受者应用流式细胞仪监测T细胞亚群及NK细胞具有推广价值.
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荧光抗体标记法在小鼠脉络膜新生血管中的应用
背景 脉络膜新生血管(CNV)是导致多种眼底疾病视力损害的主要原因,准确建立CNV模型对于其实验和临床研究具有重要的意义,但目前尚无一种可重复且可靠的评估CNV模型及其有效治疗的方法.目的 探讨荧光抗体标记法在定性和定量评价氪激光诱导的小鼠CNV中的应用价值.方法 选取15只雄性SPF级 C57BL/6J小鼠,用氪激光(波长为647.1nm)视网膜光凝的方式建立CNV模型.分别于光凝后5min,4、7、14 及28d随机选取3只模型小鼠行眼底照相和荧光素眼底血管造影(FFA)检查.摘除眼球行脉络膜铺片,用荧光抗体(DAPI、isolectin-B4及phalloidin)分别标记光凝区域的细胞核、内皮细胞和肌动蛋白.用Image pro plus 6.0软件测量CNV面积.结果 FFA和脉络膜铺片检查结果显示激光光凝后5min及4d无CNV形成,光凝后7d开始出现CNV.光凝后7、14、28d有荧光素渗漏的光凝斑的百分率分别为76.47%(26/34)、81.81%(18/22)和50.00%(5/10).脉络膜铺片后荧光显微镜检测结果显示,在正常的未光凝区域,视网膜色素上皮(RPE)细胞呈均匀一致的六边形排列;光凝后5min,在光凝部位可检测到一个环形荧光素缺损区,表明脉络膜-Bruch膜-RPE复合体已被破坏;光凝后4d出现一些细胞碎片以及核碎片,Bruch膜破损处可见自发荧光环.光凝后7d时,激光损伤区出现界限清楚的CNV网,并持续到28d.7、14及28d时根据脉络膜铺片所测得的CNV面积分别为(7.99±0.42)×103、(16.89±8.77)×103、(14.37±4.02)×103μm2,差异有统计学意义(F=17.340,P=0.000).光凝后14d和28d脉络膜铺片上CNV面积相差不大,但与7d时相比面积均明显增加(q=16.46、q=15.54,P＜0.01).结论 荧光抗体标记法不仅能很好地显示氪激光诱导的小鼠实验性CNV及其形态,而且能测定CNV的面积,为抗新生血管药物应用的疗效研究提供依据.
