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两种出血热抗体检测方法实用性的评价
近几年来,我市出血热病例时有发生,并有逐年上升的趋势.选择实用的检测方法,对于出血热的诊断、治疗、预防、控制疫情十分重要,目前公认的常规检验方法有:间接免疫荧光试验(IFAT),抗μ链IgM捕获ELISA法,间接酶免疫吸附试验(ELISA),血凝抑制试验(HI)空斑减少中和试验(PRNT)等.
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血清学和分子生物学证实云南省勐海县存在恙虫病流行
目的 了解云南省勐海县恙虫病流行状况.方法 2011年6-9月,在勐海县采集恙虫病临床诊断和疑似病例急性期和恢复期血液标本,用巢式聚合酶链反应(nPCR)对患者凝血块进行恙虫病东方体(Ot)热休克蛋白(groEL)基因扩增和测序分析.用间接免疫荧光试验(IFA)检测患者血清中Ot-IgG抗体.结果 36例急性期患者凝血块标本经聚合酶链反应扩增,Ot核酸阳性25份,其中14份阳性标本被克隆和测序.同源性和进化分析显示,勐海县14株Ot的groEL区核苷酸同源性为99％ ～ 100％,氨基酸同源性均为100％,它们与来自GenBank的BJ-TZ-OT-O39、AH-GD-OT-S6、UT213、Kato和SH205株之间具有较高的同源性和较近的亲缘关系.17例病例双份血清经IFA检测,其中11例病例的恢复期血清IgG抗体滴度大于急性期血清4倍及以上.根据检测结果,26例病例被诊断为恙虫病(分子诊断15例和血清学诊断11例).结论 首次经血清学及分子生物学证实勐海县存在恙虫病流行.分子流行病学分析表明,勐海县Ot流行株具有稳定的遗传特点和明显的地域特征.
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哺乳动物细胞西尼罗病毒样颗粒表达、纯化及其鉴定
目的 利用哺乳动物细胞表达含有西尼罗病毒(W NV) prM和E蛋白,形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为西尼罗病毒感染的免疫诊断试剂的研制奠定基础.方法 筛选典型西尼罗病毒株,构建重组质粒,转染293T细胞,表达并纯化西尼罗病毒prM-E蛋白,利用透射电镜、免疫印迹试验、间接免疫荧光实验(IFA)和酶链免疫吸附试验(ELISA)对表达产物进行鉴定.结果 重组质粒转染细胞后产生病毒样颗粒(virus like particles VLPs),转染细胞上清纯化物中透射电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的病毒样颗粒蛋白能够与抗西尼罗病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性;间接ELISA证实,重组蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体.结论 在哺乳动物细胞中表达的西尼罗病毒样颗粒具有良好的抗原性,为西尼罗病毒感染快速特异诊断试剂研制奠定了基础.
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杭州市莱姆病血清流行病学调查
目的 了解杭州市莱姆病的感染状况、流行病学特征,分析影响感染率的因素,提出杭州市莱姆病防治对策.方法 选择余杭区、临安市和建德市等三地部分林场的职工和山村的居民进行血清流行病学调查.用间接免疫荧光方法(IFA)检测人血清抗莱姆病螺旋体抗体(IgG),对莱姆病抗体检测阳性血清进行钩端螺旋体和梅毒螺旋体交叉试验,以排除钩体和梅毒螺旋体的交叉感染.结果932份进行莱姆病抗体检测以及梅毒和钩体鉴别试验的血清标本中,判定为莱姆病感染的为111份,感染率为11.91%.男性的莱姆病感染率略高于女性,但经统计学检验,差异无统计学意义(P＞0.05).除10～岁组和70～岁组两个年龄组的感染率略低外,其余各年龄组间的感染率较为接近,且经统计学检验,各年龄组之间的感染率差异无统计学意义(P＞0.05).杭州市不同地区间的莱姆病感染率存在差异,经检验差异有统计学意义(P＜0.05),余杭区的感染率高,而建德市的感染率低.山村居民的莱姆病感染率略高于林场职工,但经统计学检验,两者间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 杭州市林场职工和山村居民中普遍存在莱姆病的感染,且感染率较高.人群对莱姆病普遍易感,不论年龄、性别、林场职工或山村居民,只要经常有接触传播媒介的机会,不做好防护而被蜱叮咬,就有可能被感染.提示在杭州市的山区和林场开展莱姆病的防治工作是非常有必要的.
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长白山地区几种蜱媒传染病的血清学调查研究
目的 为了解长白山地区正常人群蜱媒传染病的感染状况.方法 采集长白山部分地区正常人血清629份,应用间接免疫荧光试验检测5种蜱传病原体的血清抗体,应用SPSS软件进行x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 调查地区人群5种蜱传病原体的感染普遍,抗体阳性率分别为斑点热立克次体11.92％、莱姆病螺旋体7.15％、贝氏柯克斯体7.14％、森林脑炎病毒4.45％、查菲埃立克体3.18％,斑点热立克次体明显高于其他4种病原体(x2 =13.431,P＜0.01),莱姆病螺旋体和贝氏柯克斯体高于蜱传脑炎病毒和查菲埃立克体(x2=11.061,P＜0.05).阳性率分布的比较,长白山脉北部、中部地区的6市县阳性率有差别,但无统计学意义(x2=8.759,P＞0.05),珲春地区明显高于南部地区桓仁(x2=11.579,P＜0.01).调查地区存在西伯利亚和黑龙江立克次体感染,黑龙江立克次体阳性率(9.1％)明显高于西伯利亚立克次体(2.4％),差异有统计学意义(x2=11.267,P＜0.01).结论 长白山地区人群5种蜱媒传染病感染普遍.提示调查地区存在其自然疫源地,应积极做好蜱媒传染病防治及蜱叮咬的防护工作.
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西安市儿童和育龄期妇女中人疱疹病毒6型的血清流行病学调查
用人疱疹病毒6型(HHV-6)国内分离株建立的间接免疫荧光试验(IFA)方法,对西安市区儿童和育龄期妇女中HHV-6的感染和免疫水平状况进行调查.
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西尼罗病毒与乙脑病毒免疫交叉反应的实验研究
为明确西尼罗病毒(WNV)与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应,本文分别用WNV全抗原与JE减毒活疫苗免疫小鼠,采用间接免疫荧光试验检测血清中2种病毒IgG抗体水平及其交叉反应情况.结果表明:WNV组在第4次免疫后的14天和35天出现2个高峰,平均效价分别为6 088和4 305;JEV组第4次免疫后,小鼠血清JEV抗体呈现缓慢上升的趋势.无论是在WNV全抗原免疫小鼠血清中还是在JE减毒活疫苗免疫小鼠血清中,同一血清对WNV抗原和JEV抗原均有反应,且抗体效价差异有显著性.在抗WNV抗体阳性血清中,两者交叉反应相对较强,在抗JEV抗体阳性血清中,两者交叉反应较弱.WNV与JEV存在一定交叉反应,但是否有交叉保护作用则需要中和试验等进一步证实.
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日本血吸虫生殖相关蛋白SjWD40的虫体免疫定位
目的 研究抗重组日本血吸虫生殖相关蛋白WD40(SjWD40)多克隆抗体对天然SjWD40的结合活性,观察SjWD40在虫体内的定位.方法 从阳性钉螺体内逸出尾蚴,感染家兔,于感染后42 d剖杀收集成虫和虫卵制备石蜡切片,利用抗重组蛋白SjWD40多克隆抗体,通过间接免疫荧光方法探讨SjWD40在虫体内的分布.结果 SjWD40广泛分布于雌虫的卵黄腺、雄虫的睾丸,虫卵的毛蚴体壁,尾蚴的头腺、钻腺、腺管等部位.结论 免疫荧光染色法确定SjWD40蛋白主要分布于血吸虫成虫的生殖腺、毛蚴体壁及尾蚴腺体等组织.
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滴金免疫测定法检测血清弓形虫IgG抗体的研究
弓形虫病是一种人兽共患寄生虫病,如孕妇感染弓形虫后,可通过胎盘垂直传播给胎儿,引起胎儿严重的神经系统损害而致畸形或智力障碍.由于其临床症状缺乏特异性,在诊断上发现病原体很困难,所以主要依靠血清学方法检测特异性抗体.目前,已建立补体结合试验、间接免疫荧光试验、间接血凝试验、ELISA和RIA等多种方法.这些方法或由于特异性、敏感性不够高,或由于操作繁琐,需一定设备条件等而使应用受到限制.我们以胶体金-SPA作为标记物,建立了一种检测血清弓形虫抗体的快速、简便的滴金免疫检测法.
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IFA、ELISA和WB用于莱姆病血清学诊断的比较研究
目的 比较研究间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白免疫印迹试验(WB)3种检测方法对莱姆病血清学的诊断效果.方法 收集临床疑似莱姆病患者血清标本及其流行病学和临床资料,分别采用IFA、ELISA和WB进行血清抗伯氏疏螺旋体抗体(IgM和IgG)检测,结合流行病学和临床资料进行综合分析.结果 实验共检测莱姆病疑似患者血清398份,ELISA阳性86例,阳性率21.61%,其中IgM阳性27例,IgG阳性59例;IFA阳性82例,阳性率20.60%,其中IgM阳性26例,IgG阳性56例;WB阳性83例,阳性率20.85%,其中IgM阳性31例,IgG阳性52例;并且实验表明,在对于游走性红斑病例的诊断上,WB法阳性率明显高于ELISA和IFA(x2=6.34,P＜0.05).结论 在莱姆病的实验室诊断中,IFA、ELISA和WB 3种方法结合运用,可提高诊断的灵敏性和特异性;WB在排除ELISA和IFA的假阳性结果中有着重要作用.
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首次实验室证实北京平谷地区恙虫病东方体暴发流行
目的 了解北京市平谷地区是否存在恙虫病东方体感染.方法 采用巢式聚合酶链反应(nPCR),对平谷地区采集的30份临床标本进行恙虫病东方体热休克蛋白(groEL)基因和56×103蛋白扩增并测序分析.采用间接免疫荧光试验(IFA)对血清标本恙虫病东方体特异抗体检测.结果 采用PCR共检测血液标本30份,均阳性(100%);用IFA检测28份患者血清抗体,25份阳性(89.3%);长片段PCR扩增,3份标本扩增阳性,阳性结果测序比对所有核苷酸序列相同,与Kawasaki的同源性为96%.结论 首次从分子流行病学和血清流行病学的角度证实北京平谷地区存在恙虫病东方体.
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山西省首例莱姆病病例分析
目的 对山西省首例拟诊莱姆病患者进行血清学检测和结果分析,为证实山西省存在莱姆病典型病例提供科学依据,同时加深医务工作者对莱姆病的认识,提高临床医师对该病的诊治水平.方法 应用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白免疫印迹(WB)2种方法,对此例患者进行血清抗伯氏疏螺旋体IgM和IgG抗体检查,并结合临床症状进行综合分析.结果 第1份血清标本检测结果显示,IFA和WB两种试验方法IgM均为阳性,其中IFA的IgM抗体滴度达到1:64,WB的IgM有2条蛋白带P41和P31;2种试验方法IgG均为阴性.间隔半个月后的第2份血清检测结果显示,2种试验方法IgG均为阳性,其中IFA的IgG抗体滴度达到1∶256,WB的IgG有2条蛋白带P41和P31,2种试验方法IgM均为阴性.结论 患者临床表现和病程发展符合莱姆病的特征,实验室检测结果阳性,莱姆病的诊断成立,证实山西省存在莱姆病典型病例.
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105例拟诊莱姆病患者抗伯氏疏螺旋体抗体检查结果分析
目的 分析拟诊莱姆病患者血清学检查结果,明确莱姆病临床病症及区域分布情况,为有效诊治莱姆病提供科学依据.方法 应用间接免疫荧光试验(IFA)和ELISA方法,对来自全国各地的临床拟诊莱姆病患者进行血清抗伯氏疏螺旋体IgM和IgG抗体检查,并结合临床疾患进行综合分析.结果 2007-2008年共检查临床拟诊莱姆病患者105例,血清呈阳性反应者16例,阳性率15.24%.其中神经系统患者44例,阳性4例;心血管系统患者5例,阳性1例;皮肤病变25例,阳性6例;发热患者10例,阳性1例;关节痛14例,阳性2例;精神障碍疾患7例,阳性2例.16例患者应用抗生素治疗后有效率达87.50%.16例莱姆病患者分布在9个省(直辖市、自治区),确诊病例以黑龙江、吉林、内蒙古地区较多.结论 我国人群确实存在莱姆病螺旋体散发感染,通过血清学检查能及早发现病例,提高诊疗效率.
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827例拟诊莱姆病患者抗伯氏疏螺旋体抗体检查结果分析
目的 分析拟诊莱姆病患者血清学检查结果,明确莱姆病临床病症及地区分布情况,为有效诊治莱姆病提供科学依据.方法 2001-2006年应用间接免疫荧光试验和ELISA 2种方法对来自全国各地的827例临床拟诊莱姆病患者血清进行抗伯氏疏螺旋体IgM、IgG抗体检查.结果 有135例患者血清抗伯氏疏螺旋体IgM、IgG抗体呈阳性反应,阳性率16.32%.其中神经系统疾病344例,阳性88例;心血管系统疾病39例,阳性3例;皮肤病变193例,阳性30例;发热病人102例,阳性6例;关节痛病人105例,阳性5例;精神障碍病人44例,阳性3例.135例患者应用抗生素治疗后有效率达92%.我国18个省(直辖市、自治区)有莱姆病病例发生,以黑龙江、吉林、内蒙古、新疆多,其次是青海、四川、贵州、云南、浙江等省.结论 我国人群确实存在莱姆病螺旋体散发感染,通过血清学检查能及早发现病人,提高诊疗效率.
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北京奥运会期间的一例输入性莱姆病病例分析
目的 分析拟诊莱姆病患者血清学检查结果,为有效诊治莱姆病提供科学依据.方法 应用间接免疫荧光试验(IFA)、ELISA和蛋白免疫印迹(WB)3种实验方法,对此例患者进行血清抗伯氏疏螺旋体IgM和IgG抗体检查,并结合临床疾患进行综合分析.结果 3种试验方法IgG均为阳性,其中IFA的IgG抗体滴度达到1:128,WB的IgG有2条蛋白带P83和P39;3种试验方法IgM均为阴性.结论 患者临床发展病程符合莱姆病的特征,实验室结果阳性,莱姆病的诊断可以成立.
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麻疹的实验室诊断研究进展
麻疹是一种致病力很强的传染病，当前仍不时有疫情暴发。其临床诊断准确率不高，需实验室检查辅助确诊。麻疹病毒IgM抗体检测易操作，结果可靠，但发病早期易出现假阴性。一步法实时荧光定量RT-PCR能在发病早期检出病毒RNA。操作简单、快速、结果敏感。使用单克隆抗体间接免疫荧光法检测脱落细胞内麻疹病毒抗原的可靠性有待进一步研究。病毒分离和蚀斑中和实验不宜作为常规诊断使用。
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仙台病毒抗原的制备及初步应用
目的 纯化和制备仙台病毒(Sendai Virus,SeV)抗原,初步应用于间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹(Western-blot)试验对SeV抗体进行检测.方法 通过鸡胚尿囊腔及BHK-21细胞增殖法培养增殖SeV,低温冻融去除细胞碎片后,用差速离心及超声破碎法纯化并制备SeV抗原,以SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定；优化确定间接SeV-ELISA抗原的佳包被浓度,对比检测间接免疫荧光试验(IFA)初筛小鼠SeV阳性血清,同时用Western-blot检测法进行特异性验证.结果 用BHK-21细胞培养增殖的SeV,病毒滴度HA为1∶128,SeV抗原的电泳纯度达80％；确定SeV-ELISA抗原佳包被浓度为2.5 μg/mL时,测得小鼠SeV抗体ELISA与IFA的阳性符合率为100％,并由Western-blot检测法得到了证实.结论 通过BHK-21细胞增殖和差速离心及超声破碎法制备的SeV抗原,可用于ELISA及Western-blot法对小鼠SeV抗体的检测,进而验证了SeV具有较强的抗原特异性及蛋白活性.
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雾化吸入γ-干扰素增强免疫低下大鼠肺部抗感染能力的研究
免疫低下患者日益增多，难治性呼吸系统感染是这些患者的主要死亡原因，且已成为临床医学的研究重点。本研究旨在探讨雾化吸入提高肺局部干扰素γ(IFN-γ)水平，对免疫低下大鼠肺部抗感染能力和细胞免疫的影响。 一、材料和方法 1.实验方法：（1）动物模型的制备、分组和标本留取：方法请参见参考文献［1］。（2）肺泡巨噬细胞（AM）的吞噬及杀菌功能检测：白色念珠菌法［2］。（3）AM的Ⅰa抗原表达：间接免疫荧光试验［3］。（4）AM培养上清和血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平检测：酶联免疫吸附(ELISA)法。（5）AM培养上清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子(TNF)-α活性的检测：L929细胞毒性试验［4］。（6）血清和BALF中IFN-γ活性的检测：L929细胞病变抑制试验［5］。BALF的测定结果用小牛血清白蛋白的含量校正，以U/ml的形式表示。
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海南岛不明发热病人血虫媒病毒分离鉴定及抗体检测
目的从海南岛不明发热病人血中分离和鉴定虫媒病毒,并在当地人群进行抗体检测,以了解南方地区虫媒病毒的感染情况. 方法采用微量法细胞培养对205份发热原因不明患者血标本进行病毒分离,应用生物学性状检测、间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制试验(HI)等技术对分离病毒进行鉴定.采用IFA检测从当地人群血清中分离出的病毒的抗体水平.结果从发热早期患者血标本中分离出2株病毒,鉴定为甲病毒,命名为HF 7和HC 6.这2株病毒与8种甲病毒免疫腹水中的SIN的免疫腹水呈现高的血凝抑制滴度(分别为1∶160和1∶320),与SIN免疫腹水的交叉荧光效价高(分别为1∶320和1∶640),但HF 7和HC 6病毒的免疫腹水与8种甲病毒的血凝抑制试验和交叉免疫荧光试验无反应,表明HF 7和HC 6病毒虽与SIN病毒的免疫腹水血抑效价及荧光效价高,但HF 7和HC 6的免疫腹水与SIN病毒无抑制效价和免疫荧光效价.当地人群对这两株病毒感染的抗体阳性率分别为3.3%(15/451)和8.4%(38/451).结论 HF7和HC6为甲病毒的一个新种.海南岛人群存在甲病毒感染.
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新疆地区人群森林脑炎血清流行病学调查
目的 调查新疆山地林区人群森林脑炎感染情况,为当地森林脑炎防控提供科学依据.方法 选择新疆北部山地林区5个不同的调查地区,采集林区人群血清,应用间接免疫荧光试验(IFA)方法,检测血清森林脑炎病毒IgG抗体.结果 共检测血清431份,阳性70份,阳性率16.24％;调查的5个地区中,阿拉套山南坡和天山北坡西段阳性率较高,分别为29.17％ (21/72)和28.77％ (21/73);其次为天山北坡中段,阳性率为14.86％ (22/148);阿尔泰山南坡北段较低,阳性率为5.26％(6/114);阿尔泰山南坡中段未检出阳性血清.结论 森林脑炎感染人群为边防军人和当地的农牧民,其中20 ～39岁的青壮年男性感染风险高.
