首次从阿拉山口口岸地区沙鼠中检测到博卡病毒

目的 掌握中国-哈萨克斯坦边境阿拉山口口岸地区鼠类携带博卡病毒情况,为中哈边境口岸鼠传疾病的防控提供技术支持.方法 2016年3-11月,采用夹夜法、弓形夹法在中哈边境铁路沿线区域开展鼠类监测,利用巢式PCR法对95份鼠类样本进行博卡病毒检测.结果 共捕获鼠类300只,隶属8属12种,其中大沙鼠为优势鼠种.首次从1只大沙鼠和1只红尾沙鼠的肺脏样本中检测到博卡病毒核酸,阳性率为2.11％;2个博卡病毒NS1基因序列同源性为99.5％,在遗传进化树中单独聚为一支.结论 中哈边境阿拉山口铁路沿线区域鼠类存在博卡病毒感染,应加强该区域鼠类监测,保障口岸公共卫生安全.

评价肾综合征出血热疫苗效果的攻击毒株的选择

肾综合征出血热(HFRS)是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病.我国占全球发病总数的90%,病死率约为3%～10%,波及全国30个省市和自治区.在各种预防HFRS的措施中,疫苗是一种特异和有效的预防手段.迄今为止,本实验室已经研究出HFRS Ⅰ型、Ⅱ型和双价及双价纯化沙鼠肾灭活疫苗,并已取得正式生产文号,为预防HFRS起到了重要的作用[1,2].

流行性出血热Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗安全性及血清学效果观察

　为观察流行性出血热(EHF)Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗安全性及血清学效果，山东省卫生防疫站与中国药品生物制品检定所和浙江省台州市卫生防疫站合作于1999年在浙江台州和山东高密共同进行了人群接种观察。　　一、材料和方法　　1.疫苗：Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗为天元生物药业生产，新药临床研究批件(1999)制申体第六号，疫苗批号：980526、980623、980609，所用毒株为Z37;另以该公司生产的双价疫苗为对照组，批号：990307。以上两种疫苗有效期均为两年。　　2.观察对象：分设南北两个观察点，南方点设在浙江省台州市，北方点设在山东省高密市。选择16～60岁无EHF病史健康人，随机分组，分别接种单价Ⅱ型和双价疫苗。　　3.疫苗分组及接种对象：单价Ⅱ型疫苗(批号：980526、980623、980609)接种对象分别为高密市卫生防疫站职工(466人)、台州市交警(396人)、高密市农民(124人)和高密市卫生防疫站(60人)。双价疫苗(批号：990307)接种对象高密市税务局职工(503人)。　　4.接种部位与免疫程序：接种部位在上臂三角肌内，每人每次接种1 ml,按0、7、28 d接种3针。　　5.反应观察：在4个组中，每组各选50人于每次接种前及接种后24、48、72 h分别进行全身体温和局部红肿反应观察。具体观察方法及判断标准参见文献［1］。　　6.免疫学效果观察：4个组各选择30人，于免前、全程免后2周采静脉血，进行荧光抗体和中和抗体检测。　　(1)荧光抗体检测：抗原片为浙江省卫生防疫站制备，羊抗人荧光抗体购自上海生物制品研究所，批号：990310。阳性界值为1∶10。　　(2)中和抗体检测：由中国药品生物制品检定所用空斑减少中和试验检测。

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗基础免疫两针后的预防效果

目前经国家批准生产的肾综合征出血热(HFRS)灭活疫苗的单价疫苗(Ⅰ型、Ⅱ型)对同型病人保护性较好,对异型病人也有一定程度保护,而双价疫苗则对Ⅰ型和Ⅱ型病人皆产生保护.现行的3针(0、7、28 d)第2年再加强1针的免疫程序,由于注射针次较多,费时长,给较大人群的推广使用带来一定困难,并影响全程接种的完成,为减少或优化免疫针次,在试区进行了双价疫苗基础免疫接种2针,6个月后加强针的免疫效果和防病效果考核,结果报告如下.

肾综合征出血热Ⅱ型沙鼠肾灭活疫苗人群接种反应及免疫学效果观察

为观察肾综合征出血热(HFRS)Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗(Ⅱ型疫苗)对人群接种反应及免疫学效果,山东省疾病预防控制中心与中国药品生物制品检定所于1999-2003年共同进行了Ⅱ型疫苗人群接种反应及免疫学效果观察.Ⅱ型疫苗为天元生物药业生产,新药临床研究批件(1999)制申体第6号,批号:980526、980623、980609,所用毒株为Z37;另设该公司HFRS双价疫苗(批号:990307)为对照组.分组疫苗接种在山东省高密市进行,结果211例Ⅱ型疫苗接种者全身和局部反应率分别为5.6%和13.3%,101例双价疫苗接种反应率分别为1.0%和18.8%,全身反应为轻度体温升高(＜38℃),局部反应为轻度红肿、发热,红肿多在3天内消退.

陕西省周至县司竹乡、马召镇2001-2004年接种肾综合征出血热疫苗免疫效果评价

周至县是陕西省肾综合征出血热(HFRS)高发病县之一.为了有效控制HFRS疫情,在周至县高发病的司竹乡、马召镇连续4年于HFRS发病高峰前,使用浙江天元生物药业公司生产的Ⅰ型及双价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗,对16～60岁人群开展集中普种,并对免疫效果进行了评价.

流行性出血热疫苗免疫后的抗体反应和防病效果

1988年,我们流行性出血热疫苗协作组研制的沙鼠肾细胞Ⅰ型灭活疫苗,通过动物试验,经卫生部批准,进入人体观察.由于此疫苗在我国首次使用,对人体观察要求特别严格,一期临床观察,经历了10人的小试,再100人的扩大,又经1 000人的再次扩大,然后进入1 500人的二期临床观察.

补肾活血方对沙鼠增龄过程中腰椎软骨终板钙化干预作用的初步研究

目的:探讨补肾活血方对腰椎软骨终板钙化的干预作用.方法:选取30只2月龄和7月龄健康雄性长爪沙鼠,分别喂养至2月龄(50～60 g)和12月龄(60～80 g)建立老龄沙鼠模型,采用随机数字表方法分为5组:正常组(n=6),模型组(n=6,给予生理盐水4ml/kg,灌胃30 d),补肾活血方低剂量组(n=6,给予补肾活血方1.9×10-3 ml/g灌胃30 d),补肾活血方中剂量组(n=6,给予补肾活血方3.8×10-3 ml/g灌胃30 d),补肾活血方高剂量组(n=6,给予补肾活血方7.6× 10-3 ml/g灌胃30 d),干预组从7月龄开始连续给药1.36 g,30 d.正常组2月龄及其他组12个月龄时处死动物,取腰椎间盘组织,HE染色体视法分析腰椎体软骨终板组织形态学、血管芽面积、非钙化/钙化层比值,兔单克隆抗体免疫组化染色方法测定软骨终板X型胶原、BMPs的表达.结果:软骨终板血管芽相对面积测量显示,与模型组相比,补肾活血方中剂量组,正常组增高(P＜0.05),大、小剂量组虽各有不同程度的增加,但差异均无统计学意义(P＞0.05);软骨终板非钙化层/钙化层厚度比值测量显示,与模型组相比,补肾活血方中剂量、正常组增加,差异具有统计学意义(P＜0.05),而补肾活血方大、小剂量组虽各有不同程度的增加,但差异均无统计学意义(P＞0.05).免疫组化染色软骨终板X型胶原的表达与模型组相比,正常组、补肾活血方低、中、高剂量组均降低,差异具有统计学意义(P＜0.01);BMPs的表达,与模型组相比,正常组、补肾活血方中剂量组升高,差异具有统计学意义(P＜0.01),大、小剂量组虽各有不同程度的升高,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:补肾活血方中剂量可延缓增龄过程中椎间盘软骨终板钙化,提示可作为早期椎间盘退变的预防用药.

抗OPN抗体干预感染泡球蚴沙鼠后细胞因子水平的动态变化

目的 观察人工接种泡球蚴(EM)沙鼠在抗骨桥蛋白(OPN)抗体干预下体内白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、IL-5和IL-10水平动态变化,探讨抗OPN抗体对泡球蚴感染免疫机制的影响. 方法 采用开腹直视下肝脏穿刺注射的方法,用20％泡球蚴组织混悬液感染长爪沙鼠180只,每只0.1 ml,建立肝泡球蚴病(AE)沙鼠模型.将感染沙鼠随机分为实验组、对照组和空白组,每组60只.实验组沙鼠接种泡球蚴后当天经尾静脉注射抗OPN抗体,每次0.15 ml,每隔两日注射一次,注射7次后,每隔1周注射一次；对照组沙鼠经尾静脉注射兔血清(时间和剂量同上)；空白组为单纯模型组.分别于感染1、20、40、60、80和100 d后,各组随机选取10只沙鼠,摘眼球取血,离心,收集血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-2、TNF-α、IL-5和IL-10含量. 结果 感染100 d时实验组IL-10为(77.93±4.13)pg/ml,对照组为(82.46±4.24) pg/ml,空白组为(84.69±5.57)pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05),其余各时间段的IL-10水平及各时间段其他3种细胞因子水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 Th1细胞介导的细胞免疫与Th2细胞介导的体液免疫共同参与宿主抗肝泡球蚴免疫.抗OPN抗体可能对血清IL-10表达水平有一定的抑制作用.

肾综合征出血热疫苗研究进展及免疫效果评价

肾综合征出血热(以下简称出血热)是由汉坦病毒引起的一种自然疫源性疾病,我国每年新发病例数约占整个世界的90%.在20世纪90年代初,我国开始研制并生产分别以沙鼠肾细胞、地鼠肾细胞和乳鼠脑为基质的出血热单价疫苗,在1996年开始生产双价出血热灭活疫苗.为进一步降低疫苗接种的副反应、简化免疫程序,在双价灭活疫苗的基础上,研制并生产了双价出血热纯化疫苗,另外也开展了对减毒活疫苗、DNA疫苗和基因工程疫苗的研究.

补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤沙鼠VEGF和Ang-1表达的影响

目的 探讨补阳还五汤预处理对局灶性脑缺血再灌注沙鼠脑组织血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-1(Ang-1)表达的干预作用.方法 45只雄性长爪沙鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组、补阳还五汤预处理组,每组15只.采用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型.2,3,5一氧化三苯基四氮唑(TTC)染色法显示脑梗死区域,免疫组化法检测脑组织VEGF和Ang-1的表达.结果 TTC染色显示模型组及补阳还五汤预处理组均出现白色梗死灶,位于颞顶叶皮质和纹状体,补阳还五汤组脑梗死体积较模型组明显减小(P<0.05);免疫组化结果显示,补阳还五汤预处理组VEGF和Ang-1表达较模型组均显著上升(P<0.01).结论 补阳还五汤预处理可通过上调脑缺血后VEGF和Ang-1的表达,促进缺血区脑组织的血管新生.

Ouabain诱导沙鼠蜗外电诱发听性脑干反应变化研究

目的 沙鼠耳蜗圆窗应用毒毛旋花甙G(Ouabain),观察沙鼠蜗外电诱发听性脑干反应(EABR)的变化.方法 显微镜下将浸有50 μl Ouabain(1 mM)的明胶海绵置于沙鼠耳蜗圆窗膜表面,观察应用Ouabain 24 h、96 h后听觉脑干反应(ABR)、耳蜗微音电位(CM)、蜗外电诱发听性脑干反应(EABR)阈值变化.结果 沙鼠圆窗应用Ouabain 24 h、96 h后ABR、EABR阈值明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),CM阈值无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05).结论 沙鼠圆窗膜表面应用50 μl Ouabain(1 mM)24 h、96 h后可导致沙鼠ABR、EABR阈值明显升高,而CM阈值无明显变化.

血管内皮生长因子和微血管密度在接种肝泡状棘球蚴沙鼠体内的表达及意义

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)-CD34在接种肝泡状棘球蚴(HAE)沙鼠体内的表达及意义.方法 将60只健康长爪沙鼠随机平均分为3组,即模型组、对照组和假手术组.模型组沙鼠采用开腹肝穿刺法,每只鼠接种泡球蚴原头节混悬液0.1 ml.对照组以相同方法接种等量磷酸缓冲盐溶液(PBS),假手术组开腹肝穿后直接缝合.接种后120天,眼球取血.模型组取泡球蚴组织、泡球蚴周围肝组织和远端肝组织,剩余两组取肝组织,以苏木精-伊红(HE)染色、免疫组化、蛋白印迹及酶联免疫吸附法(Elisa)分析VEGF及CD34的表达.结果 模型组肝脏中可见大小不等的囊泡组织,部分播散至腹腔.阳性VEGF呈黄色或棕黄色颗粒,主要存在于胞质,偶见于包膜.泡球蚴组织、泡球蚴周围肝组织和远端肝组织以及对照组和假手术组肝组织VEGF评分和VEGF/β-肌动蛋白比值分别为5.13±1.81和1.12 ±0.05、4.20±1.52和0.91 ±0.02、2.46±1.06和0.28±0.02、2.20±0.77和0.30±0.02、2.13±1.72和0.25±0.01.VEGF的表达随组织部位的不同呈梯度改变,在泡球蚴组织中表达高(P＜0.05).阳性CD34颗粒呈黄褐色,主要位于内皮细胞的细胞膜.泡球蚴组织、泡球蚴周围肝组织CD34计数和CD34/β-actin比值分别为:5.06±2.46、0.66±0.01和2.43±1.26、0.58±0.02,以泡球蚴组织中表达高(P＜0.05),其余部位未检测到CD34阳性表达.模型组、对照组、假手术组沙鼠血清VEGF和CD34的表达分别为(106.17±14.17) pg/ml和(1.47±0.28) ng/ml、(38.13±21.36) pg/ml和(0.82±0.12) ng/ml、(42.88±17.25) pg/ml和(0.72±0.16) ng/ml.模型组沙鼠血清VEGF和CD34含量明显高于对照组与假手术组(P＜0.05).结论 沙鼠HAE组织存在血管新生迹象,而血管新生则可能是泡状棘球蚴浸润性生长的作用机制之一.

NF-κB经典信号通路介导铁过载对沙鼠心肌细胞线粒体的损伤

目的 通过检测铁过载沙鼠心肌细胞内NF-κB经典信号通路关键物质的水平及电镜观察线粒体损伤程度,探索NF-κB经典信号通路是否介导了铁过载损伤心肌细胞线粒体的过程.方法 将24只蒙古沙鼠随机分为4组,分别为对照组(不进行任何干预)、溶剂对照组(腹腔注射生理盐水)、铁过载组(腹腔注射右旋糖酐铁16周)及铁过载+PDTC组(腹腔注射右旋糖酐铁,同时注射PDTC 16周).Western blot方法检测心肌细胞中NF-κB经典信号通路的关键物质IκB-α、p-IκB-α、胞浆p65及胞核p65的水平;电镜观察各组心肌细胞线粒体形态学改变并行Flameng评分.结果 (1)与其它3组比较,铁过载组p-IκB-α、胞浆p65水平降低,胞核p65水平明显增高,差异有显著性(P＜0.05);(2)铁过载组线粒体Flameng评分高于其它3组,差异有显著性(P＜0.05);铁过载+PDTC组线粒体Flameng评分高于对照组和溶剂对照组,但低于铁过载组,差异有显著性(P＜0.05).结论 铁过载能够激活沙鼠心肌细胞NF-κB经典信号通路,从而损伤心肌细胞线粒体.

沙鼠胆脂瘤中基质金属蛋白酶(MMPS)抑制的初步发现

Ouabain诱导沙鼠听觉电生理变化研究

目的 沙鼠耳蜗圆窗应用毒毛旋花甙G(Ouabain),观察沙鼠听觉电生理变化.方法 显微镜下将浸有100 μl毒毛旋花甙G(Ouabain)1 mM的明胶海绵置于沙鼠耳蜗圆窗膜表面,观察应用Ouabain 5、12 h后沙鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)、耳蜗微音电位(cochlear microphonic,CM)、复合动作电位(compound action potential,CAP)的变化.结果 应用Ouabain 5 h:ABR阈值明显升高(P<0.05),且波形不典型;CM阈值无明显变化(P>0.05):CAP阈值明显升高(P<0.05);应用Ouabain12 h:ABR消失;CM阈值无明显变化(P>0.05);CAP波形消失(P<0.05).结论 沙鼠圆窗膜表面应用Ouabain(5、12 h)导致沙鼠CAP与ABR阈值升高甚至波形消失,而CM阈值不变.为建立听神经病动物模型提供了较好的研究方法.

复方红景天制剂对沙鼠前庭功能的影响

目的 研究复方红景天制剂对沙鼠前庭功能的影响.方法 采用视频眼震电图检测沙鼠前庭功能,检测前庭眼动反射与视前庭眼动反射.观察不同剂量复方红景天制剂对沙鼠前庭功能的影响.结果 复方红景天制剂对前庭眼动反射与视前庭眼动反射的增益无明显影响.结论 复方红景天制剂无影响前庭平衡机能的副作用.

海人酸致沙鼠癫痫模型初探

采用腹腔注射海人酸(KA)的方法制作沙鼠癫痫模型.结果 显示,实验中所设的四个剂量组(5 mg/kg,10mg/kg,15 mg/kg,20 mg/kg)均能成功诱发癫痫发作,是良好的颞叶癫痫动物模型.随着KA剂量的增加,沙鼠癫痫发作的潜伏期、发作时间均明显缩短(P＜0.01),但动物的死亡率增加(P＜0.01).提示制作沙鼠癫痫模型时腹腔注射KA的适宜剂量是5 mg/kg.

沙鼠作为衰老实验动物模型的探索

沙鼠常应用于老年医学研究.测定青年沙鼠和老年沙鼠肝中超氧化物歧化酶、丙二醛、脑中单胺氧化酶、皮肤中羟脯氨酸、尿中17-酮类固醇并比较其差别.老年沙鼠肝中超氧化物歧化酶活性,尿中17-酮类固醇及皮肤中羟脯氨酸的含量较青年沙鼠低,肝中丙二醛、脑内单胺氧化酶B活性较青年沙鼠高.沙鼠年龄变化与大鼠、小鼠相似,在某些情况下可作为衰老实验动物模型.

实验动物在神经科学领域中的应用

实验动物学是生命科学和医学发展的重要基础.神经科学的各项研究也都是建立在动物实验的基础之上.近年来,随着实验动物资源的丰富和生物学特性的挖掘,越来越多的实验动物可供进行神经科学的研究.结合当前神经科学的研究前沿,我们选取了一些不同层次、各具特点的实验动物作一总结,为实验动物在神经科学领域的应用和推广前景进行分析与展望.