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镉引起肾细胞凋亡的研究进展
本文综述了镉引起肾细胞凋亡的研究进展,并分析了镉引起肾细胞凋亡的几种可能的分子机制.主要内容包括:(1)体内、体外有关镉诱导肾细胞凋亡的研究及其时间-效应与剂量-效应关系.(2)镉诱导肾细胞凋亡的分子机制.认为与细胞内钙超载、原癌基因的表达、氧化应激及MAPKs引起的级联反应有关.一般认为镉是通过多途径引起细胞凋亡,且对于不同类型的细胞,引起凋亡的机制及具体过程不完全一致.
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溴虫腈对小鼠肾细胞DNA的损伤效应
化学农药的大量生产和使用给人体健康带来了较大的危害,特别是具有致DNA损伤效应的农药给人体带来的危害是不容忽视的.DNA损伤和致畸、致癌直接相关,流行病学资料显示肿瘤发生率的增长与使用农药的农产品密切相关,国际癌症研究署报告25%以上的杀虫剂属于致癌物[1].目前,国内外报道得较多的是有机磷农药和拟除虫菊酯类农药的致DNA损伤效应.溴虫腈(Chloffenapyr)是一种新型高效的吡咯类杀虫剂,许多国家正在大量推广和使用[2].溴虫腈是否具有DNA损伤作用,国内外未见报道.我们用单细胞凝胶电泳检测了溴虫腈对小鼠肾细胞DNA的损伤效应,旨在明确溴虫腈是否具有DNA损伤作用.
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大鼠肾细胞分离制备及培养方法的比较
目的比较胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法和胶原酶、胰蛋白酶两步消化法(简称两步消化法)对大鼠肾细胞分离效果及细胞产量的影响,以及不同培养基(MEM、RpMI1640)、鼠龄(乳鼠、成年鼠)对细胞产量、质量、增殖率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响.方法分别对两组Wistar大鼠(乳鼠和成年鼠)用三种不同的消化方法制备大鼠肾组织细胞悬液,分别在MEM培养液和RPMI1640培养液中原代培养,培养48小时之后第一次传代,观察细胞质量,计算细胞产量,MTT法检测传代细胞24～48小时之间的增殖率,生化分析仪检测传代细胞第1～7天培养液中LDH漏出量.结果胶原酶消化法和两步消化法的肾细胞产量显著高于胰蛋白酶消化法(P＜0.01),两步消化法的细胞质量优于胶原酶消化法,MEM培养液和RPMI1640培养液对细胞产量、增殖率和LDH漏出量的影响均无显著性差异,乳鼠的肾细胞产量显著高于成年鼠(P＜0.01).结论两步消化法对于肾细胞的分离制备尤为适合,MEM培养液和RPMI1640培养液均适于肾细胞的培养,乳鼠比成年鼠更适合肾细胞的制备.
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机械剪切对脾、肝、肾细胞DNA损伤程度的比较
目的探讨机械剪切对小鼠脾、肝、肾3种细胞DNA的损伤程度是否存在差异以及机械剪切法是否适于3种器官单细胞的分离.方法以未经任何处理的小鼠为实验组,以150mg/kg环磷酰胺处理的小鼠为对照组,用机械剪切法分离3种器官的单个细胞并制备单细胞悬液,然后用苔盼蓝排斥法检测细胞存活率,用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤程度.结果机械剪切法能快速分离出彗星实验所需的足量的脾、肝、肾3种器官的单个细胞;试验组脾、肝、肾细胞的拖尾率分别为3.20%、6.21%和9.22%,DNA迁移距离分别为27.30μm、28.45μm和47.10μm,且不同类细胞之间的拖尾细胞率以及脾细胞与肾细胞、肝细胞与肾细胞之间的DNA迁移距离均有显著差异(P＜0.05).试验组脾、肝、肾细胞的拖尾率和DNA迁移距离与阳性对照组的同类细胞比较都显著要低(P＜0.01,P＜0.001).结论机械剪切对小鼠脾、肝、肾3种细胞DNA的损伤依次加重.机械剪切法对脾、肝细胞的分离尤为适合.
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原代肝、肾细胞培养在保健食品原料毒性筛选中的应用
目的 建立肝、肾毒性的体外筛选方法,并研究其在保健食品原料毒性筛选中的应用.方法 以原代肝细胞、原代肾细胞、CHL和HepG2细胞为平台,用MTT法检测毒物对细胞活性的半数抑制浓度IC50,用生化学方法检测培养液中酶学指标的变化,作为毒性效应标志物;用已知毒物对该方法进行验证;用该方法对大黄、苍术、红花水提物进行毒性筛选.结果 该方法能够筛选出已知毒物的肝肾毒性;在本实验条件下,未发现大黄、苍术对肝肾存在靶毒性,红花可能存在潜在的肾毒性.结论 本研究建立的方法可用于保健食品原料的毒性筛选;有必要对红花进行更深入的安全性研究.
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胸腺肽α1体内抗流感病毒作用的实验研究
材料与方法实验材料:①实验药物:胸腺肽α1(Tα1),受试药物,1.5mg/支,试验时用生理盐水分别配成0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml低、中、高三个浓度,分装三个青霉素小瓶中备用.病毒唑(利巴韦林注射液),阳性对照药物,含量为100mg/ml.试验时用生理盐水配成13mg/ml浓度的药液.病毒株为流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1),本实验室保存.在MDCK细胞中的组织半数感染量(TCID50)为10-4.细胞为狗肾细胞(MDCK),本实验室保存.②实验动物:健康昆明小鼠,雌雄各半,3～4周龄,体重18～20g,雌雄分别分组,由实验动物中心提供.
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流行性出血热Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗安全性及血清学效果观察
为观察流行性出血热(EHF)Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗安全性及血清学效果，山东省卫生防疫站与中国药品生物制品检定所和浙江省台州市卫生防疫站合作于1999年在浙江台州和山东高密共同进行了人群接种观察。 一、材料和方法 1.疫苗：Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗为天元生物药业生产，新药临床研究批件(1999)制申体第六号，疫苗批号：980526、980623、980609，所用毒株为Z37;另以该公司生产的双价疫苗为对照组，批号：990307。以上两种疫苗有效期均为两年。 2.观察对象：分设南北两个观察点，南方点设在浙江省台州市，北方点设在山东省高密市。选择16～60岁无EHF病史健康人，随机分组，分别接种单价Ⅱ型和双价疫苗。 3.疫苗分组及接种对象：单价Ⅱ型疫苗(批号：980526、980623、980609)接种对象分别为高密市卫生防疫站职工(466人)、台州市交警(396人)、高密市农民(124人)和高密市卫生防疫站(60人)。双价疫苗(批号：990307)接种对象高密市税务局职工(503人)。 4.接种部位与免疫程序：接种部位在上臂三角肌内，每人每次接种1 ml,按0、7、28 d接种3针。 5.反应观察：在4个组中，每组各选50人于每次接种前及接种后24、48、72 h分别进行全身体温和局部红肿反应观察。具体观察方法及判断标准参见文献［1］。 6.免疫学效果观察：4个组各选择30人，于免前、全程免后2周采静脉血，进行荧光抗体和中和抗体检测。 (1)荧光抗体检测：抗原片为浙江省卫生防疫站制备，羊抗人荧光抗体购自上海生物制品研究所，批号：990310。阳性界值为1∶10。 (2)中和抗体检测：由中国药品生物制品检定所用空斑减少中和试验检测。
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双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗基础免疫两针后的预防效果
目前经国家批准生产的肾综合征出血热(HFRS)灭活疫苗的单价疫苗(Ⅰ型、Ⅱ型)对同型病人保护性较好,对异型病人也有一定程度保护,而双价疫苗则对Ⅰ型和Ⅱ型病人皆产生保护.现行的3针(0、7、28 d)第2年再加强1针的免疫程序,由于注射针次较多,费时长,给较大人群的推广使用带来一定困难,并影响全程接种的完成,为减少或优化免疫针次,在试区进行了双价疫苗基础免疫接种2针,6个月后加强针的免疫效果和防病效果考核,结果报告如下.
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肾综合征出血热Ⅱ型沙鼠肾灭活疫苗人群接种反应及免疫学效果观察
为观察肾综合征出血热(HFRS)Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗(Ⅱ型疫苗)对人群接种反应及免疫学效果,山东省疾病预防控制中心与中国药品生物制品检定所于1999-2003年共同进行了Ⅱ型疫苗人群接种反应及免疫学效果观察.Ⅱ型疫苗为天元生物药业生产,新药临床研究批件(1999)制申体第6号,批号:980526、980623、980609,所用毒株为Z37;另设该公司HFRS双价疫苗(批号:990307)为对照组.分组疫苗接种在山东省高密市进行,结果211例Ⅱ型疫苗接种者全身和局部反应率分别为5.6%和13.3%,101例双价疫苗接种反应率分别为1.0%和18.8%,全身反应为轻度体温升高(＜38℃),局部反应为轻度红肿、发热,红肿多在3天内消退.
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陕西省周至县司竹乡、马召镇2001-2004年接种肾综合征出血热疫苗免疫效果评价
周至县是陕西省肾综合征出血热(HFRS)高发病县之一.为了有效控制HFRS疫情,在周至县高发病的司竹乡、马召镇连续4年于HFRS发病高峰前,使用浙江天元生物药业公司生产的Ⅰ型及双价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗,对16～60岁人群开展集中普种,并对免疫效果进行了评价.
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流行性出血热疫苗免疫后的抗体反应和防病效果
1988年,我们流行性出血热疫苗协作组研制的沙鼠肾细胞Ⅰ型灭活疫苗,通过动物试验,经卫生部批准,进入人体观察.由于此疫苗在我国首次使用,对人体观察要求特别严格,一期临床观察,经历了10人的小试,再100人的扩大,又经1 000人的再次扩大,然后进入1 500人的二期临床观察.
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扶正解毒汤对镍诱导NRK细胞微核形成的抑制作用
目的:研究扶正解毒汤(FJD)对硫酸镍(NiSO4)诱导大鼠肾细胞系(NRK)微核形成的抑制作用.方法:以NiSO4、FJD含药血清处理NRK细胞,检测微核率的变化及细胞总的清除自由基抗氧化力(TRAC).结果:NiSO4(400μmol/L)暴露组细胞微核率、TRAC明显下降,低、中、高剂量FJD血清与NiSO4共处理组细胞微核率显著低于NiSO4暴露组(P＜0.05,P＜0.01),细胞TRAC则显著提升(P＜0.05,P＜0.01).结论:NiSO4可诱发细胞微核形成,FJD对镍诱导NRK细胞微核形成有明显抑制作用,其机制可能与抗氧化应激有关.
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内皮祖细胞对小鼠肾癌血管新生化的影响
目的 检测内皮祖细胞(EPCs)在小鼠肾癌(RCC)中的分布特征,探讨EPCs在肾癌新生血管化中的作用.方法 雄性BALB/c裸鼠70只按数字表法随机分为A组(35只)、B组(35只),另取6只作为对照组(C组).A组小鼠右肾下极移植人肾癌细胞,B组为假手术,C组不做任何处理;于实验后21、28、35、42、49 d,A、B、C组各时间点分别处死7只、7只和1只小鼠,收集标本评估C组右侧正常肾组织(NT)、B组右肾损伤肾组织(ST)、A组的癌组织(TT)和癌旁组织(AT)中EPCs水平及分布,以及微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF-1)、内皮生长因子受体2(FLK)、趋化因子受体(CXCR4)等mRNA表达.结果 流式细胞仪检测显示,AT中EPCs水平在28 d后逐渐升高,明显高于TT、NT及ST中的表达(P＜0.05);TT中EPCs水平则先升高以后逐渐降低,且明显高于NT中表达(P＜0.05).免疫荧光检测EPCs主要聚集于AT;免疫组织化学检测AT中MVD明显高于TT和NT,而TT中MVD则低于NT(P＜0.05);AT中VEGF、FLK、SDF-1和CXCR4mRNA水平对比TT和NT明显升高(P＜0.05).结论 EPCs可通过分泌促血管内皮生长因子和参与血管形成来参与肿瘤新生血管化,并以此促进肾癌的进展.
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t(X;17)ASPL-TFE3型肾细胞癌临床病理特征及融合基因改变
目的 探讨t(X；17) ASPL-TFE3型肾细胞癌的临床病理特征及融合基因改变.方法 对3例t(X；17)ASPL-TFE3型肾细胞癌进行光镜观察及免疫组化染色.对癌以及癌旁组织进行融合基因的检测.结果 例1镜下可见癌细胞排列成宽阔的腺管状、乳头状结构,形态学符合经典的t(X；17) ASPL-TFE3型肾细胞癌.例2肿瘤组织呈不规则腺管状、巢状或条索状浸润性生长,界限不清,伴间质促纤维组织增生；瘤细胞高度异型,胞质丰富、嗜酸性,可见靴钉样内衬于管腔的生长方式,符合肾集合管癌的组织学形态.例3肿瘤细胞呈卵圆形或短梭形,片状或弥散性分布,并可见瘤细胞呈放射状围血管分布的结构形态,非常类似于肾上皮样血管平滑肌脂肪瘤.3例肿瘤TFE3为弱到强(+),癌旁组织为(-).RT-PCR结果示3例肿瘤组织及远离10 cm的癌旁组织均检测出ASPL-TFE3融合基因,并为测序所证实.结论 t(X；17) ASPL-TFE3型肾细胞癌可具有特殊形态,当形态学不典型时,RT-PCR检测法有助于肿瘤的精确诊断.此外癌旁组织被检测出融合基因,其原因尚需进一步研究.
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PDCD5通过Wnt/β-catenin通路抑制肾细胞癌侵袭转移及其机制研究
目的 探讨肾细胞癌(RCC)患者PDCD5的表达水平及其参与调控RCC侵袭与转移的可能机制.方法 利用免疫组化检测RCC标本与癌旁组织中PDCD5的蛋白表达水平,同时分析PDCD5与疾病分期、预后的相关性;利用transwell及划痕实验检测PDCD5对肾癌细胞系A498侵袭与转移的影响;利用Western blot检测A498细胞转染PDCD5后MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin及Wnt/β-catenin通路的变化.结果 ①与癌旁组织相比,RCC标本中PDCD5明显下调(P<0.001),且与疾病分期及预后正相关;②PDCD5明显抑制了肾癌细胞系A498的转移与侵袭能力(P<0.01);③PDCD5通过抑制A498细胞系中MMP2、MMP9及N-cadherin的表达水平,增强E-cadherin的表达水平调控EMT转化,同时Wnt/β-catenin通路关键蛋白下调.结论 PDCD5通过调控Wnt/β-catenin通路影响肾细胞癌EMT转化,负性调控了RCC病人的侵袭与转移进程.
关键词： 癌 肾细胞 肿瘤侵润 上皮-间质转化 程序化细胞死亡因子5 Wnt/β-catenin通路 -
伴横纹肌样特征的肾细胞癌的临床病理特征
目的 探讨伴横纹肌样特征的肾细胞癌(RCC)的临床病理特征.方法 对1995-2005年南京军区南京总医院常规外检档案352例RCC中的10例伴横纹肌样特征的RCC进行了光镜、免疫表型检测和超微结构观察,并结合临床病理特征进行分析.结果 10例伴横纹肌样特征的RCC患者年龄33～69岁(平均年龄52岁),男9例,女1例.5例肿瘤侵犯肾包膜,2例伴淋巴结转移,1例伴肺转移.组织学观察,10例伴横纹肌样特征的RCC中透明细胞型9例,乳头型1例,均可见不同程度的具横纹肌样特征的瘤细胞区域.横纹肌样特征的瘤细胞排列成梁索状、腺泡样、器官样或团片状,瘤细胞散在分布,细胞间无黏附或黏附性差,呈类圆形或多角形,核泡状、偏位,核仁突出,胞质内见红染均质包涵体样物,瘤组织常伴明显坏死.免疫组织化学观察,具横纹肌样特征的瘤细胞CD10、CK(AE1/AE3)、上皮细胞膜抗原(EMA)、波形蛋白均阳性表达,CK7、CK20、结蛋白、肌细胞生成素、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肌肉特异性肌动蛋白(MSA)均阴性表达,神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100蛋白灶性阳性表达.横纹肌样瘤细胞区Ki-67阳性表达较周围经典型瘤细胞区增高,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).随访8例,2例于术后6个月及29个月死亡,6例存活.结论 伴横纹肌样特征的RCC主要见于透明细胞型,应与胞质嗜酸的肾细胞肿瘤和肾恶性横纹肌样瘤等相鉴别.RCC中伴横纹肌样特征的瘤细胞较周围经典型瘤细胞Ki-67表达明显增高,可能与此类肿瘤临床生物学行为更具侵袭性有关.
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Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌的病理特征与临床分析
目的 探讨Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌的临床病理特征、免疫表型、鉴别诊断及预后.方法 对11例Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌进行光镜观察和免疫组织化学研究及随访10～112个月,并复习相关文献.结果 11例肿瘤中女性7例,男性4例.年龄8～26岁,平均16.3岁.肿块直径2.5～6.0 cm.光镜下癌组织呈两种结构,一种为腺管状、乳头状、巢状分布.细胞界限清楚,有大量透明或嗜酸性胞质.泡状染色质、核仁明显,沙砾体多见.另一种结构更加紧密,多见实性巢状结构,癌细胞缺乏大量的胞质,核仁不明显,沙砾体少见.免疫表型:本组11例均TFE3、CD10、a-甲酰基-CoA消旋酶(P504s)弥漫表达,细胞广谱角蛋白(CK-pan)、上皮细胞膜抗原(EMA)、波形蛋白仅部分病例表达,所有病例CK7、肾脏特异性钙黏蛋白(Ksp-cadherin)、CD117阴性表达.结论 Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌是一种少见肿瘤,诊断主要依据患者的年龄、病理学形态和免疫组织化学TFE3阳性.
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多房性囊性肾细胞癌的临床病理学特征和分子遗传学观察
目的 探讨多房性囊性肾细胞癌(MCRCC)的临床病理及分子遗传学改变特征.方法 对1990年1月至2006年12月间第二军医大学附属长海医院病理科病理诊断为肾细胞癌(706例)中的21例MCRCC进行了光镜、免疫表型观察和微卫星不稳定性(MSI)及杂合性缺失(LOH)检测.结果 21例MCRCC患者年龄34～72岁(平均年龄50岁),男19例,女2例.肉眼或镜下血尿3例,18例因体检而偶然发现.10例肿瘤位于左肾,11例位于右肾.T1期18例,T2期2例,T3期1例.其中1例侵犯肾包膜,均无淋巴结转移.随访20例,无一例死于肾癌,未发现肾癌转移或复发病例.组织学观察,肿块大直径0.3～10.0 cm(平均3.6 cm).切面呈多房性囊性,囊腔大小不等,囊腔间隔厚薄不均(0.1～0.5 cm.平均0.2 cm),内含淡黄色液体或胶冻样或血性液体.囊腔内衬单层或多层上皮细胞,胞质透明或淡嗜酸性.囊腔间隔内也可见呈巢状或腺泡状排列的透明细胞.Fuhrman 1级16例,Fuhrman 2级5例.免疫组织化学观察,瘤细胞波形蛋白、ABC、CAM5.2、上皮细胞膜抗原(EMA)均呈阳性表达,CD10阳性表达6例.神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性表达16例.分子遗传学观察,21例标本中,PCR扩增成功的有11例,5例发现微卫星变异,3例有LOH,其中D3S1560基因座2例,D14S617基因座1例;2例有MSI,分别为D9S168和D14S617各1例.结论 MCRCC是一种少见的肾囊性肿瘤,具有独特的临床和病理学特征,肿瘤预后良好,可通过手术切除而治愈.
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乳头状肾细胞癌组织学分型的探讨及其临床病理学观察
目的 探讨两种不同组织学分型方法的乳头状肾细胞癌(PRCC)形态学特点及预后意义.方法 回顾性分析2003-2013年间诊断的48例PRCC,对每一例复查切片,终确定39例为PRCC.给予详尽的组织形态学评价,按照两种方法进行组织学分型,并进行预后分析.一种为通用的WHO分类中的分型方法;一种为新近提出的分型方法,界定1型PRCC为单层立方上皮,不考虑核级别高低、胞质性质及其他组织形态学特点,2型PRCC具有假复层排列方式,核级别较高.结果 1型PRCC涵盖的肿瘤形态有所扩大,占33.3％ (13/39),2型PRCC显示更高级别的病理T分期和国际泌尿病理协会分级,更易发生肾窦/肾周脂肪浸润及肉瘤样分化.32例PRCC患者获得随访,随访时间3～144个月,7例失访,其中4例死亡,均为2型PRCC.2型PRCC患者生存率明显低于1型PRCC.结论 新的分型方法较WHO分型方法更具有可操作性.1型、2型PRCC形态学方面有很多重叠,2型患者预后更差.正确认识PRCC多样的形态学特点并且准确进行组织学分型,对PRCC的预后评价具有重要意义.
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X染色体内易位/TFE3融合基因相关性肾细胞癌的临床病理分析
目的 探讨Xp11.2易位/TFE3融合基因相关性肾细胞癌中2种罕见基因亚型的临床病理学特征、免疫表型、荧光原位杂交(FISH)的特征性表现及预后.方法 对2009年至2016年南京军区南京总医院收集的10例NONO?TFE3肾细胞癌和4例RBM10?TFE3肾细胞癌,分别进行光镜观察、免疫组织化学EnVision法、FISH检测、逆转录?聚合酶链反应(RT?PCR)及随访.结果 NONO?TFE3肾细胞癌由比例不等的"分泌期子宫内膜样腺体"和片状的上皮样细胞混合组成,与透明细胞乳头状肾细胞癌有形态学交叉.RBM10?TFE3肾细胞癌中大多数出现双相结构,即上皮样细胞构成的腺管状和/或乳头状结构与小细胞区域形成的"假菊形团样"结构混合存在,另可见胞质空泡化、核沟和沙砾体等特点.免疫组织化学结果显示,NONO?TFE3肾细胞癌均中等至强阳性表达TFE3、CD10、肾细胞癌标志物(RCC)和PAX8,CK7、Cathepsin K、Melan A、HMB45、Ksp?cadherin、波形蛋白和CD117均阴性.RBM10?TFE3肾细胞癌强阳性表达TFE3、Cathepsin K、CD10、Ksp?cadherin、P504s、RCC、PAX8和波形蛋白,广谱细胞角蛋白(CKpan)和Melan A所有病例中均灶性阳性,TFEB、HMB45和CK7阴性,Ki?67阳性指数约3％～8％(平均约5％),且不同的组织学区域内免疫组织化学表达情况有所不同:PAX8、P504s、Ksp?cadherin在上皮样细胞区域表达,而在小细胞区域几乎不表达;上皮样细胞区域内Ki?67阳性指数高于小细胞区域.在分子方面,NONO?TFE3肾细胞癌中有6例扩增出融合基因产物,5例为NONO基因的第7号外显子和TFE3基因的第6号外显子融合,1例NONO基因的第9号外显子和TFE3基因的第5号外显子融合;4例RBM10?TFE3肾细胞癌均扩增出融合基因,融合位点为RBM10基因的第5号外显子和TFE3基因的第17号外显子.在FISH检测中,10例NONO?TFE3肾细胞癌均表现为距离固定且间隔较小的分离信号,约等于2个信号宽度;4例RBM10?TFE3肾细胞癌均显示<1个信号宽度的异常信号(融合或者微小分离信号),均可视为阴性结果.共7例NONO?TFE3和4例RBM10?TFE3肾细胞癌获得随访资料,所有患者至今均无病生存.结论NONO?TFE3肾细胞癌和RBM10?TFE3肾细胞癌为2种罕见基因亚型,肿瘤均具有特殊的形态学特征和良好的临床预后,TFE3免疫组织化学阳性表达,但由于利用TFE3分离探针进行FISH检测时表现出模棱两可或假阴性结果,容易造成漏诊或误诊,应值得注意,PCR检测或二代测序可明确基因型.
