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胸腺肽α1体内抗流感病毒作用的实验研究
材料与方法实验材料:①实验药物:胸腺肽α1(Tα1),受试药物,1.5mg/支,试验时用生理盐水分别配成0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml低、中、高三个浓度,分装三个青霉素小瓶中备用.病毒唑(利巴韦林注射液),阳性对照药物,含量为100mg/ml.试验时用生理盐水配成13mg/ml浓度的药液.病毒株为流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1),本实验室保存.在MDCK细胞中的组织半数感染量(TCID50)为10-4.细胞为狗肾细胞(MDCK),本实验室保存.②实验动物:健康昆明小鼠,雌雄各半,3~4周龄,体重18~20g,雌雄分别分组,由实验动物中心提供.
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H6亚型流感病毒在小鼠肺内的适应性传代研究
目的 为了进一步探讨H6亚型禽流感病毒(AIV)对哺乳动物的感染与致病能力,建立H6亚型AIV哺乳动物感染模型. 方法 用H6N1亚型AIV感染BALB/c小鼠,并在小鼠肺组织中连续传代,测定病毒的EID50.观察感染鼠临床症状和体征,评价病毒的致病性. 结果 经8~9代的适应后,该病毒即对小鼠产生明显的致病性,小鼠表现出精神萎靡、食欲减退、竖毛、弓背等临床症状.测定鼠肺适应株病毒H6N1-P8-M1、H6N1-P9-M2、H6N1-P8-M3的EID50分别为108.5、106.75和108.25/ml,三毒株感染鼠在发作期全部死亡.H6N1-P0组小鼠感染后14 d仍全部存活. 结论 H6N1亚型AIV与其他亚型相似,同样具有经适应后对哺乳动物呈现高致病性的能力,提示应关注H6亚型AIV对人类的潜在风险,得到的毒力增强鼠肺适应株为H6N1流感病毒疫苗和药物研究以及致病分子机制研究提供了动物模型.
关键词: Balb/c小鼠 H6N1亚型禽流感病毒 动物模型 适应株 -
一例注射狂犬疫苗致过敏反应的护理
目前,人用狂犬疫苗为"狂犬病固定毒(aG)适应株"接种于原代地鼠肾单层细胞,培养后收获毒液,加入甲醛溶液灭活后再加氢氧化铝制成.用于被犬或其它动物咬伤、抓伤时预防"狂犬病".临床效果好,副作用少,其不良反应仅占1%~2.02%.[1]1998年6月30日,我院急症收治一例因注射狂犬疫苗而至过敏反应的患者,体会报告如下.
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我国狂犬病细胞疫苗的发展和存在问题
我国1980年前生产和使用的狂犬病疫苗是经石碳酸灭活的羊脑组织悬液的疫苗,接种后副反应大,特别是由脑组织引起的变态性脑脊髓炎副反应更为严重,同时免疫效果也不够满意.为解决这些问题,由武汉生物制品研究所牵头,中国药品生物制品检定所、长春、兰州生物制品研究所等单位合作,于1965年开始用北京株狂犬病固定毒株通过原代地鼠肾细胞适应传代,获得aG株适应株,研制成功一种原代地鼠肾细胞培养的狂犬病灭活疫苗.
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狂犬病病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代适应性
目的 探讨狂犬病病毒( Rabies virus,RV )aG株在原代鸡胚成纤维细胞上的传代适应性.方法 将RV北京株固定毒10aG株豚鼠脑毒种在鸡胚成纤维细胞上连续传代培养,显微镜观察细胞的形态变化,ELISA检测各代次收获液中的病毒量,取11、21、31代病毒收获液,小鼠脑内毒力测定法检测病毒滴度.利用正交试验筛选适病毒培养条件,以筛选的佳比例接种病毒,绘制病毒生长曲线,并进行特异性及免疫原性检测.结果 狂犬病病毒aG株感染鸡胚成纤维细胞未观察到明显的细胞病变效应,随着传代次数的增加,病毒含量呈上升趋势,11、21、31代病毒收获液的滴度分别为4.0、7.7和7.17 LogLD50/ml;多次传代后,适培养条件为细胞浓度150×104个/ml、接种比例1∶500、血清浓度2%、收获时间为5 d;病毒连续收获3次后,细胞开始脱落,经检测其病毒滴度可达7.0 logLD50/ml以上,中和指数可达8 500,第21代病毒制备成的试制疫苗效价为2.0 IU/ml.结论 RV北京株固定毒10 aG株豚鼠脑毒种可适应于鸡胚细胞培养,为鸡胚细胞狂犬病疫苗的研究奠定了基础.
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黄热疫苗病毒17D株在Vero细胞上的适应性传代
目的 建立黄热疫苗病毒17D株的Vero细胞适应株.方法 将2批鸡胚黄热疫苗病毒在Vero细胞上进行2次蚀斑筛选,并连续传代培养,然后对获得的4株Vero细胞适应株病毒YFV-Vero(5)-A1、YFV-Vero(5)-A2、YFV-Vero(5)-B1和YFV-Vero(5)-B2进行稳定性和免疫原性检测.结果 4株Vero细胞适应株病毒可被黄热病毒(17D)猴免疫血清中和.在传代过程中,不同代次的病毒滴度稳定在6.90LgPFU/ml以上,高峰病变出现时间为5~7 d.家兔和小鼠的免疫血清中和抗体效价分别为1:640~1:5 120和1:640~1:2 560.结论 4株Vero细胞适应株病毒生物学性状稳定,免疫原性良好.
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011 伯氏疏螺旋体天然外膜蛋白Oms66可诱导预防宿主适应株的保护性免疫
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地鼠肾细胞培养的CTN株狂犬病新疫苗研究
应用细胞毒种代替豚鼠脑毒种制备狂犬病地鼠肾细胞纯化疫苗.将狂犬病毒CTN株在原代地鼠肾细胞(PHKC)传代适应,用病毒培养液上清作为生产用毒种,结果通过在PHKC传10多代,适应后病毒滴度达到7.0LogLD50/ml,并应用适应株(CTN-LS-HK)细胞毒种制备三批疫苗,其效力在6.11~6.55IU/ml,高于用aG株豚鼠脑毒种制备的三批疫苗效力(3.77~5.85IU/ml).