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五十年来中国钩端螺旋体病流行病学研究进展
一、钩端螺旋体病的早期发现和研究[1-5]我国汤泽光(1937年报告)在广州一个多鼠的监狱中观察到了3例Weil病(钩端螺旋体病,简称钩体病),经豚鼠动物试验,肝脏组织切片涂银染色,其中1例发现了典型的钩端螺旋体.1939年钟惠澜报告,观察2例脑膜炎症状的钩体病患者,该病人的血清对大型钩体呈阳性反应.
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理气化瘀法治疗HP相关性消化性溃疡63例临床观察
1997年~1999年我们以理气化瘀法为主,运用失笑散加减治疗HP相关性消化性溃疡63例,现将临床观察报道如下:1 一般资料选择经胃镜检查证实有活动期胃或十二指肠溃疡,并从组织活检作HP检查,快速尿激酶试验和银染色或13C呼气试验两项皆阳性者判断为HP感染,两周内未接受过铋剂、PPI和抗生素治疗的门诊患者.治疗组观察组中医辨证均属于胃脘痛之气滞瘀血证.
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HER2银染色原位杂交结果与前处理条件的相关性
HER2基因扩增和/或HER2蛋白过表达是判断乳腺癌患者预后的重要风险评估因子,同时也是判断曲妥珠单抗靶向治疗是否适用的重要依据。评价HER2状态的方法有免疫组织化学染色法( IHC)、荧光原位杂交( FISH)、显色原位杂交(CISH)及银染原位杂交(SISH)。 SISH法在亮视野下观察切片,切片可长期保存,观察结果与FISH结果的符合率高达90%~99%[1-5]。2013年美国临床肿瘤学会/美国病理医师学院(ASCO/CAP)乳腺癌HER2检测指南及中国乳腺癌HER2检测指南(2014版)相应增加了亮视野原位杂交的检测及判读指南等内容[6-7],使得HER2 SISH检测技术逐步走向规范化、标准化。为了更顺利的开展HER2 SISH的检测,提高检测的成功率,我们分析不同前处理条件对HER2 SISH染色结果的影响。
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恶性肿瘤患儿外周血T细胞核仁形成区嗜银蛋白的测定
监测恶性肿瘤患儿T细胞银染色核仁组织区(Ag-NORs)酸性非组蛋白转录活性,可反映机体细胞免疫水平、肿瘤状态及体内肿瘤因素与免疫功能间的相互作用关系.
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十二指肠溃疡患者H pylori根治前后NO、TNFα含量和NOS表达的变化及意义
目的:观察H pylori感染对十二指肠溃疡(DU)患者NOS、NO和TNFα的影响,探讨H.pylori感染、NO和TNFα在DU中的作用和意义.方法:随机选择经电子胃镜和病理检查确诊的H pylori阳性DU患者60例,采用快速尿素酶试验、组织涂片Gram染色和Warthin-Starryz银染色进行Hpylori检测.用兰索拉唑+阿莫西林+克拉霉素治疗7 d,于H pylori根治前后检测血清NO、TNFα的含量、免疫组化法检测胃窦黏膜eNOS和iNOS蛋白的表达,并与内镜和病理检查证实胃黏膜大致正常H.pylori阴性的15名健康志愿者作对照观察.结果:H pylori根治率为82.14%(46/56),溃疡愈合率89.28%(50/56).正常人胃黏膜以eNOS表达为主、iNOS表达很少,NO、TNFα含量少,H pylori感染后胃黏膜eNOS、iNOS表达和NO、TNFα含量较正常对照增加(3568.78±624.34,238.43±72.92与2448.27±723.31,138.53±59.65;P<0.001),iNOS表达更显著.H pylori根除后,eNOS、iNOS的表达以及NO和TNFα含量(2908.74±717.58,142.43±58.63)均低于治疗前(P<0.001),但iNOS和NO仍高于正常对照组(P<0.05).结论:iNOS过度表达和NO、TNFα含量增加可能在消化性溃疡的发病机制中发挥一定作用,有可能是H pylori感染导致消化性溃疡的发病机制之一.NO在溃疡的愈合中也起一定作用.
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广东潮阳地区海尔曼螺杆菌感染与食管疾病的相关性研究
目的:探讨广东省潮阳地区海尔曼螺杆菌(Helicobacter Heilmannii,Hh)感染与食管疾患的关系.方法:集我院内镜活检标本和连有部分食管的胃切除标本,共92例.以Warthin-Starry银染色,镜检Hh和幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp).结果与临床和病理结果对比分析.结果:92例共检出Hh(+)者43例,占46.74%,Hp(+)者32例,占37.78%,二者混合感染者12例,占13.04%.43例Hh(+)者中:食管癌19/33例(占本组的20.65%,占该疾病的57.58%,下同),食管贲门腺癌14/22例(15.22%,63.64%),食管溃疡3/11例(3.26%,27.27%),食管上皮增生4/8例(4.35%,50.0%),食管炎l/3例(1.09%,33.33%),食管平滑肌瘤l/2例(1.09%,50.0%),Barrett食管l/l例(1.09%,100%).随访家中养有猪狗猫或其中之一者16例,Hh(+)者10例(62.5%),未养上述动物者23例,其中Hh(+)者8例(34.78%).结论:食管Hh感染明显与食管癌、食管贲门腺癌、食管上皮增生等相关,Hh感染可能是潮阳地区上述疾病高发的重要因素之一,感染又可能与该地区普遍养有猪狗猫等动物有关.
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儿童急性白血病不同治疗阶段端粒酶活性及其意义
我们用端粒重复序列扩增-银染色技术检测了不同治疗阶段儿童急性白血病患者骨髓细胞端粒酶活性,并探讨其临床意义.
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益气活血化湿方案治疗膜性肾病1例
病例患者陈××,男,54岁,因"双下肢浮肿,泡沫尿半年余,加重1周"而于2007年7月20日入院治疗.患者于2007年1月感冒后出现双下肢水肿泡沫尿,伴双侧腰背部酸胀乏力.2007年2月4日赴上海某二甲医院就诊,肾穿刺示:肾小球8个,其中2个小球球性硬化,其余肾小球弥漫性毛细血管基质增生,伴节段性系膜增宽,银染色毛细血管基膜呈钉突样改变,肾间质灶性纤维增生及灶性炎细胞浸润.
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银染法鉴定细菌生物被膜
细菌生物被膜的主要成分是多糖蛋白复合物,Costerton等人[1]在70年代通过扫描电镜观察到了细菌生物被膜的存在,但是通过钌红等染色后进行电镜观察,操作复杂,周期长,不易推广.近年来,临床微生物学研究工作者开始探索采用染料对细菌胞外糖进行染色,观察细菌生物被膜[2].本实验是通过银染色的方法鉴定细菌生物被膜的存在,该方法简单、可靠,现将报道如下.
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网状纤维染色改良新方法
网状纤维染色技术初由Bielschowsky于1904年设计,用于神经原纤维的研究,后经Mare于1950年发展应用于网状纤维染色,网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维.由交错纤细的纤维组成还有大量堆集时则形成致密的网状.若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色,所以以后又逐步发展为各种银氨溶液浸染法.为了探讨适合临床和科研的新方法,我科对各种网状纤维染色法进行多次试验,反复摸索,发现Gomori银染色与福州迈新网状纤维染色试剂相结合,而得到的染色效果明显好于前两种方法单独染色,且操作简单,染色时间短,与其他组织对比色强烈,切片色彩艳丽,可观性好,便于推广使用.
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改良SDS-PAGE法分析尿蛋白组成
目的建立一种快速的尿蛋白组分分析方法.方法将薄层垂直平板SDS-PAGE与高敏的银染色和微波技术相结合,建立改良SDS-PAGE法,快速分析蛋白尿组成.结果此法缩短分析所需的时间,使整个分析过程在7 h内就可以完成,并且提高蛋白条带的分辨率,使检测灵敏度达ng级水平.结论改良SDS-PAGE法分析尿蛋白组成简便,快速,灵敏度高.
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二种镀银法在研究牙本质构造中的特点
目的探讨二种镀银法在牙本质不同矿化区域内的染色特点,及银粒子沉积部位的微细构造.方法牙齿脱矿后,采用切片镀银法及银离子导入镀银法,光镜观察后,同一标本再行透射电镜观察.结果二种镀银法均显示牙本质矿化较差区域呈深黑色,前者染色中银粒子以吸附在较纤细纤维表面及内部为主,而后者的银粒子大多则沉积在疏松的纤维间隙中.结论二种方法中,切片镀银法更适合牙齿、骨组织等结构较致密的硬组织间质的研究.
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1998深圳市秋冬季婴幼儿轮状病毒的感染状况及分子流行病学调查
轮状病毒在全世界分布广泛,是引起婴幼儿腹泻的重要病原,在腹泻病的病毒病因中,它占整个腹泻病的1/4,无论在发达或发展中国家,A组(婴幼儿)轮状病毒引起的腹泻都有较高的发病率,是婴幼儿发病和致死的重要病因。因此,对婴幼儿腹泻及时明确病因,对治疗、预防和流行病学研究都有重要意义。本文对深圳市1998年53例腹泻婴幼儿类便标本中轮状病毒感染状况进行分析。现报道如下。1 材料与方法1.1 标本收集 1998年10月至次年1月份,在深圳市人民医院采集急性胃肠炎患儿粪便标本53份,保存于-20℃备用。1.2 HRV-RNA提取基本上按Clarke等[1]报道的方法进行。1.3 PAGE及银染色取HRV-RNA20ul及样品缓冲液10μl混匀后,加样15μI,在垂直板不连续电泳系统上进行电泳,恒定电流20mA,电泳约4h,并用Herring〔2〕法对电泳后的凝胶进行镀银染色。1.4 金标法试剂来源为福建三明市蓝波生物技术研究所生产的金标免疫斑点试剂盒,操作按说明书进行。结果判定:板孔中央出现红色圆斑(不论强弱)为阳性,不出现红色圆斑为阴性。2 结果2.1 PAGE和金标法检测HRV的结果用PAGE检测的53份标本中,阳性23例,阳性率为43.4%;金标法检测结果,阳性率为39.6%,两种方法检测均呈阳性的20例,均呈阴性29例,两者的符合率为92.5%,经统计学显著性检验,x2=0.25,P>0.05,提示两种方法的检测结果无显著性差异(见表1)。
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肺孢子虫病原学检查的一种快速染色方法
在肺孢子虫病原学检查中,常用的方法有姬姆萨(Giemsa)染色、亚甲胺蓝染色(toluidine blue stain,TBO)、哥氏亚甲胺银染色(Gomori's methenamine silver nitrate stain,GMS)[1].姬氏染色简便、快速,囊内小体呈紫红色,囊壁不着色,但周围组织也染上同样颜色,缺乏对比,易漏检.TBO染色特点是囊壁染成蓝紫色,囊内小体不着色,背景、组织碎片也染成淡蓝色.GMS染色使包囊壁呈棕褐色,部分包囊内可见到括弧样特征结构,此法准确、特异性强,可作为确诊依据,但耗时太长,操作复杂.
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银染mRNA差异显示方法的建立
目的建立银染mRNA差异显示方法,为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础. 方法采用随机引物和锚定引物各1条,建立差异显示反转录聚合酶链式反应(DDRT-PCR)和银染方法,对DDRT-PCR过程中各实验影响因素进行优化,割取差异条带进行二次扩增. 结果当总RNA用量为0.2 μg,引物浓度为0.6~1.0 μmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,MgCl2浓度为1.6~2.0 mmol/L时,同时起始5个循环的退火温度为50 ℃,扩增效率佳,特异性好,背景干净. 结论 DDRT-PCR方法简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因.
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单层扁平上皮标本制作技术的改进
制作单层扁平上皮标本,以往采用青蛙、蟾蜍、大鼠的肠系膜,经过浸硝酸银溶液后,在阳光下照射还原,使上皮细胞界线变黑[1].该方法存在着一些缺点.如青蛙、蟾蜍、大鼠的肠系膜脂肪较多,浸银后脂肪很容易被硝酸银镀上,使背影不透亮,影响清晰度.标本需阳光照射还原,如阴天或下雨天难制作.而阳光含有红外线,容易使标本产生银沉淀,背景不美观.笔者经过多年的摸索,改进了单层扁平上皮标本的制作方法,介绍如下.
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蛋白质凝胶电泳银染色法的改进
目的探索一种快速、灵敏的蛋白质凝胶电泳银染色方法.方法对蛋白质凝胶电泳银染色过程中的多种因素进行了实验探索,在此基础上探索出一种改良的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色法.结果改进方法灵敏度为Coomassie Brilliant Blue R-250法的100倍以上,对牛血清白蛋白的检测限在0.5ng以下,整个染色过程不超过60min,染色重复性好.结论改进后的方法比以前使用的方法简便、快速、灵敏、成本相对低廉.
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空肠弯曲菌脂多糖基因ORF6在脂多糖生物合成中作用的研究
[目的]研究空肠弯曲菌脂多糖基因ORF6在脂多糖生物合成中的作用.[方法]通过同源搜索,推测基因ORF6的可能功能;通过PCR扩增基因ORF6,将基因ORF6插入质粒载体pBluescript中,再通过抗卡那霉素弹夹的插入,使基因ORF6失活;通过自然转移,失活的ORF6基因与野生株空肠弯曲菌的常染色体融合而产生突变株;通过银染色、蛋白质印迹对突变株脂多糖进行分析;结合同源搜索的结果,推测基因ORF6的可能功能.[结果]ORF6 DNA序列与鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis)的转氨酶基因相似;通过自然转移得到基因ORF6失活突变株;基因ORF6突变株的脂多糖比野生株的脂多糖短,基因ORF6的改变影响空肠弯曲菌血清反应.[结论]基因ORF6在脂多糖的生物合成中起着重要作用;基因ORF6很可能是一种氨基转移酶.
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胃类癌的病因和诊治进展
胃类癌(Gastric carcinoid tumor)过去由于发病率低,长期未引起人们的重视.近年来,随着内窥镜的广泛开展以及银染色、免疫学标记和电镜等新诊断方法的使用,临床胃类癌病例报道日益增多.其特殊的生物学行为,更成为研究热点之一.
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核仁形成区银染色法对良恶性肿瘤的鉴别
经63例几种肿瘤石蜡切片和细胞学涂片进行核仁形成区(AgNORs)银染色,并以各种炎症组织对照,其染色结果和定量观察表明:该法有助于良恶性肿瘤的鉴别诊断是肿瘤病理学研究的有效方法.本文重点从方法学的角度进一步进行了探讨.