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产妇外周血单个核细胞及其新生儿尿液中人巨细胞病毒核酸的检测
人类巨细胞病毒(HCMV)是先天性感染中常见的致畸、致残病毒之一[1, 2].流行病学调查显示我国育龄妇女大多数已感染过HCMV [3].为了解HCMV的感染与新生儿黄疸、早产儿和低出生体重儿的相关性以及新生儿尿液作为HCMV感染的检测标本的可行性,我们应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测了产妇血浆、外周血单个核细胞(PBMC)及其新生儿尿液中HCMV-DNA含量.
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慢性乙肝病毒感染者乙肝病毒血清标志物与HBV DNA的相关性分析
本文对204例慢性乙肝患者与病毒感染携带者的乙肝病毒血清标志物(HBVM),应用聚合酶链反应(PCR)技术检测了HBV DNA.并根据检测结果结合临床分析了HBVM与HBV DNA之间的关系.
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921消毒剂对乙肝病毒DNA消毒效果的评价
乙型肝炎病毒为DNA病毒,患者在感染HBV的不同时期,血清内可以出现不同的HBV感染标志[1],其中包括检测HBV DNA,其为HBV复制和传染的直接标志。利用斑点杂交可检测pg水平的HBV DNA,应用聚合酶链反应(PCR)可检测fg水平的HBV DNA,较斑点杂交法敏感1 000倍。作者利用PCR技术检测HBV DNA,结合ELISA法检测HBsAg、HBeAg评价921消毒剂的消毒效果。
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42例结肠癌患者COX-2mRNA和蛋白的表达与临床病理的意义
结肠癌是临床常见的恶性肿瘤之一,随着我国经济的迅猛发展,生活方式和饮食结构的改变以及人口的老龄化,大肠癌的发病率迅速上升[1].虽然外科手术、放化疗技术设备有所提高,但结肠癌的总生存率却并无显著性提高[2],主要原因是结肠癌早期发现和治疗的病例无显著性增加.因此,明确结肠癌的发病机制具有十分重要的临床意义.本研究拟采用RT-PCR和免疫组化技术检测结肠癌、癌旁和正常组织中COX-2mRNA及蛋白的表达,探讨其与结肠癌病理特征的关系.
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胆汁淤积的分子机制及相关疾病
各种淤胆性肝损害时,肝细胞膜窦面或胆管面转运体蛋白分子的表达或功能将会受到不同的影响.其潜在的机制可能在于基因对转录速率的调控或转录后的改变(包括mR-NA加工,稳定性、转录效率)以及翻译后的机制(如胞内蛋白质分类/靶向受损、蛋白质磷酸化/去磷酸化受损).应用分子探针技术检测实验动物或临床淤胆性疾病患者,以及大鼠相关基因敲除(knockout)或自然发生突变导致转运蛋白缺失,继而可引起胆汁淤积性疾病,均提示了转运功能的受损会引起胆汁流减少,淤胆性疾病的发生.一些遗传性肝细胞转运体的突变也证实了是胆汁淤积性疾病的潜在病因.
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多聚酶链反应诊断女性淋菌性宫颈炎110例
女性淋菌性宫颈炎是常见的性传播疾病之一,近年来,其发病率呈上升趋势.多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是近几年发展起来的快速体外基因扩增技术,其准确性是常规涂片检查所不能比拟的,本组采用PCR技术检测110例女性淋菌性宫颈炎,其阳性检测率100%,现报道如下.
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军队干部HBsAg阳性者血清HBV DNA检测分析
乙型肝炎病毒(HBV)感染是一种世界性传染病,我国为乙肝高流行区.为了解军队干部HBsAg阳性者体内HBV复制情况及其传染性,以便更好地预防和控制乙肝在军队的感染和流行,我们应用聚合酶链反应(PCR)技术检测了本地区106名HBsAg阳性军队干部乙型肝炎病毒一脱氧核糖核酸(HBVDNA),并与血清标志物比较,现报道如下.
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Caveolin-1与 E-cadherin表达与胃癌临床病理特征及EMT关系
目的:研究Caveolin-1与E-cadherin与胃癌临床病理特征及之间的关系,分析Caveolin-1与E-cadherin表达水平与胃癌细胞EMT之间的相关性。方法:应用免疫组织化学技术检测组织芯片中胃癌及癌旁组织Caveolin-1与E-cadherin蛋白表达。对Caveolin-1、E-cadherin表达与胃癌临床病理特征(临床分期、病理分级及转移)进行回顾性分析。应用Real-time PCR技术检测70例胃癌组织、5例正常胃黏膜组织以及多种不同胃癌细胞系(SGC-7901、AGS、MKN-28、MKN-45、BGC-803、HGC-823、KATOⅢ、HGC-27)中Cav-1与 E-cadherin mRNA的表达。结果:在正常胃黏膜组织中Caveolin-1与E-cadherin蛋白表达较高,在胃癌组织中表达下调,其表达水平分别与肿瘤临床分期、病理分级及转移状态有关,即Caveolin-1与E-cadherin在Ⅲ期和Ⅳ期胃癌中比在Ⅰ期和Ⅱ期胃癌中表达降低;在III级胃癌比在I级和II级胃癌中表达降低;在有淋巴结转移或远处转移的胃癌中比在未转移的胃癌中表达降低。并且Caveolin-1与E-cadherin在胃癌组织中的表达水平有明显的相关性(r=0.35,P=0.003)。与正常胃黏膜细胞系GES-1相比,Cav-1与E-cadherin在多种人胃癌系(SGC-7901、AGS、MKN-28、MKN-45、BGC-803、HGC-823、KATOⅢ、HGC-27)中表达明显降低,且Cav-1与E-cadherin在转移来源的细胞系(SGC-7901、MKN-45、BGC-803、KATOⅢ、HGC-27)比在非转移来源的细胞系(AGS、MKN-28、HGC-823)中的表达水平更低。Cav-1与E-cadherin在未分化细胞系KATOⅢ中表达比在高分化细胞系MKN-28中表达显著降低。在E-cadherin相对高表达的上皮表型细胞系AGS中,Cav-1表达相对较高,而在间质表型的E-cadherin相对低表达的间质表型细胞系HGC-27中Cav-1表达相对较低。结论:Cav-1和E-cadherin表达水平的降低在胃癌进展中具有重要作用;Cav-1与E-cadherin表达呈正相关,Cav-1可能通过调控E-cadherin表达参与胃癌EMT和转移。
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SARS实验室诊断技术
SARS的实验室诊断技术分为常规的临床检验、病原学诊断和血清学诊断.临床检验是SARS诊断的辅助手段,血清学诊断和病原学诊断为临床提供早期或确诊SARS的依据.血清学诊断是检测SARS感染后病人血清中抗SARS冠状病毒抗体反应的情况,病原学诊断是检测SARS病人体内感染病毒的情况.目前应用于检测SARS抗体的血清学方法主要有间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、中和试验、胶体金技术和斑点酶免疫技术等;用于检测SARS的病原学方法主要有组织培养技术分离SARS冠状病毒、分子生物学技术检测SARS冠状病毒核酸、电镜和间接免疫荧光技术检测病人组织或细胞培养物中的病毒等.
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TNFα、oxLDL对单核细胞玻璃粘连蛋白mRNA表达的影响及其可能的信号转导途径
玻璃粘连蛋白(vitronectin)含有精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(PGD)序列和肝素结合区.单核细胞表面的玻璃粘连蛋白是血管内皮细胞表面β3整合素族的配基之一,二者的结合能够促进血液循环中的单核细胞和内皮细胞的粘附.一些致动脉粥样硬化因素作用血管内皮细胞的同时,也作用于单核细胞,使其表面的玻璃粘连蛋白表达增高,从而成为动脉粥样硬化早期单核细胞与病变部位动脉内皮细胞粘附异常增强的机制之一.目的:是观察单核细胞株U937细胞在TNFα、oxLDL及蛋白激酶C抑制剂H-7、Calphostin和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD098059的作用下玻璃粘连蛋白基因的表达.方法:利用传代培养的单核细胞株U937进行实验,分为TNFα、ox-LDL刺激组、TNFα+H-7、TNFα+Calphostin、 TNFα+PD098059组、ox-LDL+H-7、ox-LDL+Calphostin、ox-LDL+PD098059组和正常对照组,分别作用18小时.玻璃粘连蛋白基因的mRNA表达用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测.结果:与正常对照组相比,TNFα、oxLDL可明显刺激U937细胞玻璃粘连蛋白mRNA的表达;蛋白激酶C抑制剂H-7和Calphostin显著抑制TNFα的诱导作用,而H-7和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD098059则可抑制oxLDL的诱导作用.结论:TNFα、oxLDL可能通过激活蛋白激酶C和/或丝裂素原活化蛋白激酶途径,启动单核细胞玻璃粘连蛋白基因的表达,从而参与了动脉粥样硬化的发生发展过程.
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TNFα、LPS诱导EA、hy926细胞一氧化氮合酶基因的转录
一氧化氮(NO)由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸生成.诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是NOS三种亚型中催化产生NO较多的一种,可被多种炎症因子诱导,而诱导环节多在基因转录水平.目的:观察肿瘤坏死因子α(TNFα)、脂多糖(LPS)对内皮细胞系EA.hy926细胞iNOS基因转录的影响,并探讨蛋白激酶C(PKC)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的作用. 方法:传代培养的EA.hy926细胞用TNFα,LPS处理18小时,并同时加入或不加蛋白激酶C抑制剂H-7、Calphostin和丝裂素原活化蛋白激酶抑制剂PD098059;人iNOS(hiNOS)基因表达以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测.结果:200 IU/mL TNFα、100 ng/mL LPS均明显诱导EA.hy926细胞hiNOS基因的表达;H-7、Calphostin和PD098059可抑制TNFα诱导的hiNOS基因的表达.但PKC和MAPK抑制剂对LPS诱导的抑制效应均不显著.结论:TNFα诱导hiNOS基因的表达需要PKC和MAPK的活化,而LPS诱导hiNOS基因的表达可能还涉及其它蛋白激酶的途径.
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乌头碱诱导的心房颤动对内皮素1分泌及其受体表达的影响
目的:观察和探讨乌头碱诱导的心房颤动(房颤)对内皮素1( ET-1)分泌及其受体表达的影响,并观察ET-1下游的信号通路的变化。方法:采用大鼠左心房离体灌流模型,利用放射性免疫技术检测ET-1分泌的水平;利用蛋白免疫印迹法分析心房肌缝隙连接蛋白40(Cx40)、43(Cx43)、ETA型受体(ETRA)、ETB型受体(ETRB)蛋白水平的变化以及MAPK/ERK和PI3K/Akt的磷酸化作用。结果:房颤时Cx40和Cx43表达明显下调(P<0.01);房颤明显促进心房ET-1的分泌(P<0.01);房颤时ET受体表达呈现异常,ETRA 明显上调(P<0.05),而ETRB 则显著下调(P<0.01);房颤时ET-1下游的MAPK/ERK及PI3K/Akt信号转导发生变化,pERK及pAkt明显上调( P<0.01,P<0.05)。结论:房颤明显增加心房ET-1的分泌,并导致其受体及其下游ERK和Akt信号通路的异常表达,这可能与房颤诱导的心房肌结构重构相关。
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TGF-β1基因多态性与急性脑梗死相关性研究
目的:探讨转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因多态性与内蒙古汉族人群急性脑梗死的相关性。方法:采用PCR-SSP技术检测脑梗死组(55例)和对照组(48例) TGF-β1869T/C基因多态性。结果:脑梗死组TT型13例(27.1%),TC型25例(52.1%),CC型10例(20.8%),T等位基因频率53.12%,C等位基因频率46.88%;对照组TT型16例(29.1%),TC型31例(56.4%),CC型8例(14.6%),T等位基因频率57.27%,C等位基因频率42.73%。组间比较,差异无统计学意义。结论:内蒙古汉族人群急性脑梗死发病与TGF-β1869T/C多态性无明显相关性。
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PDCD5对肥厚心肌的保护作用及作用机制
目的:探讨程序性细胞死亡分子5(PDCD5)在心肌肥厚发生发展过程中的作用及机制。方法:腹主动脉缩窄术(AAC)建立大鼠心肌肥厚病理模型;苯肾上腺素( PE)刺激分离培养的乳鼠心肌细胞肥大;RT-PCR和蛋白印迹实验分别检测mRNA及蛋白表达;含PDCD5 cDNA腺病毒或PDCD5 shRNA腺病毒转染心肌细胞以过表达或敲低PDCD5;萤光素酶报告基因系统及染色质免疫沉淀技术检测活化T细胞核因子( NFAT)与PDCD5启动子区的结合。结果:在AAC所致肥厚心肌组织及PE刺激的肥大心肌细胞中,PDCD5表达量均显著增加;PDCD5过表达可抑制PE诱导的心肌肥大,而敲低PDCD5则诱导心肌细胞肥大并加重PE刺激的心肌肥大。肥大心肌细胞中NFAT表达量增高,升高的NFAT可与PDCD5启动子结合,上调PDCD5表达量。结论:心肌肥大过程通过NFAT信号通路上调PDCD5表达量,增高的PDCD5反馈性抑制心肌肥大,从而对心肌起保护作用。
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HDL通过ANXA1发挥对内皮细胞保护功能
目的:高密度脂蛋白(HDL)通过抗炎作用发挥重要的心血管保护功能。膜联蛋白A1(ANXA1)早被发现是一种抗炎因子,能抑制血管损伤的白细胞浸润。本研究探讨了HDL调节内皮细胞中ANXA1对单核细胞黏附的影响及相关机制。方法:采用蛋白质组学和质谱鉴定技术研究HDL对人内皮细胞系Hy926蛋白的表达,通过siRNA干扰和抗体阻断分析ANXA1表达对单核细胞黏附的影响。采用Western blot技术检测HDL诱导ANXA1表达过程中ERK、p38、MAPK、Akt和PKC的表达。结果:HDL能上调人内皮细胞系Hy926和人脐静脉内皮细胞中ANXA1的表达,并抑制TNF-α导致内皮细胞中ANXA1的下调。同时在BALB/c动物体内验证了上述结果。 ANXA1 siRNA干扰、抗ANXA1抗体封闭和EDTA缓冲液孵育内皮细胞后, HDL抑制单核细胞与内皮细胞黏附能力均降低。 HDL通过ERK、p38、MAPK、Akt和PKC通路上调内皮细胞中ANXA1的表达。结论:本研究表明,HDL上调内皮细胞中ANXA1的表达,抑制单核细胞与内皮细胞黏附,为进一步研究ANXA1在动脉粥样硬化中的作用开辟思路。
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WDR26过表达对大鼠心肌细胞缺血所致线粒体自噬的影响
目的:观察WDR26过表达对大鼠心肌细胞缺氧所致线粒体自噬的影响,探讨其作用机制。方法:构建真核表达载体pcDNA3.1,克隆入WDR26ORF,转染H9c2心肌细胞株;实验分为对照组和实验组(转染pcDNA3.1-WDR26);建立H9c2心肌细胞缺氧模型;采用免疫荧光、Western blot等技术检测缺氧后心肌细胞线粒体自噬情况及PINK1、Parkin线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果:(1)WDR26过表达时可以促进H9c2心肌细胞缺氧时线粒体自噬;(2)WDR26过表达时可以促进缺氧所致的Parkin向线粒体聚集。结论:WDR26参与心肌细胞缺血所致的线粒体自噬,并且通过与线粒体蛋白发生相互作用形成复合物,影响PINK-Parkin信号通路,从而调控线粒体自噬,在心肌缺血过程中起到内源性保护作用。
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NAC通过调控胞浆抗氧化蛋白的氧化还原状态减轻心肌细胞氧化应激损伤
目的:探讨N-乙酰半胱氨酸( NAC)是否通过影响心肌细胞内抗氧化通路蛋白的氧化还原状态从而在心肌细胞氧化应激中发挥保护作用。方法:用H2 O2刺激H9c2心肌细胞导致氧化应激损伤。采用CM-H2 DCFDA荧光染料检测细胞内ROS变化情况;谷胱甘肽试剂盒检测细胞内GSH和GSSG的水平;非还原Western blot技术检测Trx1、GR、Prx1和PTEN的氧化还原状态;还原Western blot检测ASK1和AKT的磷酸化。结果:NAC预处理组明显增加心肌细胞氧化应激时的细胞活力和GSH/GSSG比值,并且降低细胞内ROS水平。非还原Western blot显示H2 O2刺激使还原型Trx1明显减少,氧化型GR、Prx1和PTEN显著增多,NAC预处理可以增加还原型Trx1,减少氧化型GR、Prx1和PTEN。还原Western blot发现,NAC预处理之后, H2 O2诱导的ASK1磷酸化明显减少,而H2 O2诱导的AKT磷酸化明显增加。结论:NAC通过减少胞浆内抗氧化蛋白的氧化从而保护心肌细胞氧化应激损伤。
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转化生长因子III型受体促心肌肥厚的作用及机制
目的:在首次发现转化生长因子III型受体( TGFBR3)在心肌细胞中存在较高丰度表达的基础上,探讨TGFBR3在心肌肥厚中的作用以及其生理病理学意义。方法:采用分子生物学等实验技术检测体外ISO诱导的心肌肥大模型中TGFBR3的表达水平变化。运用超声和HE染色等方法检测心脏特异性过表达TGFBR3转基因小鼠中心肌肥厚表型,探讨TGFBR3促心肌肥厚的作用机制。结果:TGFBR3在ISO诱导的心肌肥大模型中表达水平升高。且在心脏特异性过表达转基因小鼠中表现为促进心肌肥厚的作用。 TGFBR3与β-arrestin2在心肌细胞中存在复合物,并且通过共同调节下游信号通路中CaMKII的磷酸化促心肌肥厚的发生。结论:TGFBR3在体内外心肌肥厚模型中表达升高,并且TGFBR3高表达可促进心肌肥厚的发生。其机制是通过与β-arrestin2存在复合物,共同调节下游CaMKII的磷酸化引起的。
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八肽胆囊收缩素对内毒素血症大鼠CD14表达的抑制作用
目的:CD14是宿主识别细菌脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)的关键受体,以膜结合型(me mbrane-associated CD14,mCD14)和可溶性(soluble CD14,sCD14)两种形式存在.CD14结合LPS的脂质A介导信号传递,诱生大量炎症介质.而LPS又可直接或间接上调CD14的表达, 促进炎症反应,终引起多器官衰竭.应用CD14抗体可明显减轻细胞对LPS的反应,提高内毒素血症家兔的生存率.目前CD14已成为治疗内毒素休克的新靶子.我们以往的研究表明八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)具有明显的抗内毒素休克(endotoxic shock,ES)作用,可减轻ES大鼠肺、肝、肾组织炎症反应,降低肺动脉压,提高平均动脉压,改善生存率,但其作用机制尚未完全阐明.为深入探讨CCK-8抗ES作用的机制,本研究观察了CCK-8对内毒素血症大鼠肺组织及血清中CD14蛋白表达的影响.方法:静脉注入LPS(5 mg/kg dw)6 h复制大鼠内毒素血症模型,用Western blot技术检测血清中sCD14蛋白的表达, 用免疫组织化学技术检测肺组织中CD14的表达及分布.静脉预注入CCK-8(40 μg/kg dw)和/或CCK受体拮抗剂丙谷胺(1 mg/kg dw)10 min后注入LPS 6 h,观察上述指标.结果:(1)大鼠血清中sCD14蛋白存在两种分子形式:sCD14α(49kD)及sCD14β(55kD),注入LPS后6 h二者表达均明显增加,静脉预注入CCK-8则可显著抑制其表达,且该作用可被丙谷胺拮抗;(2)对照组大鼠肺组织CD14只表达在巨噬细胞,而在内毒素血症大鼠肺组织中,不仅巨噬细胞上的CD 14阳性信号增强,表达CD14的巨噬细胞增多,而且在支气管上皮细胞表面也检测到CD14阳性信号;静脉预注入CCK-8则明显减少了CD14的表达,丙谷胺可拮抗CCK-8的作用.结论:CCK- 8对内毒素血症大鼠肺组织CD14及血清sCD14的表达具有抑制作用,降低大鼠对LPS的敏感性 ,可能是CCK-8抗ES作用的重要机制之一.
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内源性过氧亚硝基阴离子参与介导内毒素致肺动脉内皮细胞的损伤作用
目的: 在培养的小牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)水平,观察LPS对BPAEC诱生ONOO-能力及内皮源性ONOO-在LPS致BPAEC损伤中的作用,以探讨LPS引起肺动脉内皮细胞损伤的新机制.方法:用流式细胞分析技术检测ONOO-生成标志物NT的荧光强度(任意单位,代表内源性ONOO-的生成量)和NT阳性细胞数,计算NT阳性细胞百分率.