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实验动物内耳基因导入研究进展
由于内耳独特的解剖特点和血迷路屏障的存在,要实现内耳治疗靶点精准的基因递送,必须选择适合的手术路径.大量文献表明经圆窗入路及耳蜗开窗(鼓阶/中阶)径路均可将基因成功递送到内耳并表达,转染效率及听力损伤程度各有不同.本文综述内耳基因递送入路并分析各自的优劣,同时关注不同入路对听觉功能的影响.为内耳基因治疗中的听觉功能保护提供新思路.
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Math1基因导入成年大鼠前庭有效途径的探索
目的 探索Math1基因导入大鼠前庭简便有效的方法 和途径,为前庭功能障碍基因治疗的相关研究提供参考.方法 将20只成年Wistar大鼠分为缺失E1、E3基因片段且构建有Math1基因和增强型绿色荧光蛋白报告基因的复制缺陷型腺病毒(adnovirus-Math1-enhanced green fluorescence protein,Ad-Math1-EGFP)鼓阶导入组和前庭阶导入组,Ad-Math1-EGFP导入组大鼠在右耳通过耳蜗底转鼓阶或前庭阶打孔的方法 导入物理滴度为2.1×1011v.p/ml的上述腺病毒5μl.在导入3天、7天后分别将动物处死,进行GFP表达观察.结果 导入Ad-Math1-EGFP 3天后,前庭阶导入组大鼠的前庭终末器官及耳蜗均出现明显的GFP阳性表达:而鼓阶导入组的表达则局限于耳蜗,7天后仍未见前庭终末器官的GFP阳性表达.结论 耳蜗底转前庭阶打孔可以作为Math1基因导入大鼠前庭简便有效的途径.
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自制流动转染体系提高逆转录病毒介导的基因导入效率的研究
逆转录病毒是常用的基因治疗载体,但对人类细胞的基因导入率较低。本研究建立了一个流动转染体系,利用电动流速调节装置控制带有重组逆转录病毒的培养液,以一定速度缓慢流过生物半透膜,迫使病毒与在膜上生长的K562细胞充分接触,从而提高基因导入效率。经半固体培养NeoR基因/G418抗性集落法测定,无须筛选,单次基因导入率达80%,与常规静止转染法相比,差异十分显著(P<0.01)。该装置简便、高效,可广泛地应用于基因治疗的基础和临床。
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美国、欧盟及中国生物制品注册分类探析
(接3月下)
2.1.2基因治疗产品。包括体外基因导入(在体外将基因导入人细胞,然后将该细胞注入人体)和体内基因导入(将基因通过适当的导入系统直接导入人体)。 -
人类基因治疗述评(一)
何谓基因治疗?简言之,用基因治病就叫基因治疗.但必须指出,所谓用基因治病,实际上指的是把功能基因导入病人体内使之表达,并因表达产物--蛋白质发挥了功能以使疾病得以治疗.这就是说,用基因治病,实际上是用导入体内的基因的产物蛋白质来治病.指出这一点之所以是必要的,是因为基因治疗与核苷类药物是两码事,不可混为一谈.后者指的是用核苷类化合物治疗疾病.
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中国p53基因治疗的现状和前景
基因治疗是指以改变人的遗传物质为基础的生物医学治疗.基因治疗的对象主要是那些严重威胁人类健康的疾病.目前针对恶性肿瘤基因治疗的临床试验多,约有1192项,占70%左右.通过腺病毒介导将人正常p53基因导入人体肿瘤细胞去纠正p53基因的缺陷以发挥治疗作用,被称为替代性基因治疗,Adp53临床试验约有60项.
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导管介导基因转导心脏的对比研究
目的探讨经自制针型导管心肌内注射(简称心肌注射法)、经冠状动脉灌注(简称冠脉灌注法)及经心房穿刺心包(简称心包注射法)等三种方法导基因入心脏的可行性及利与弊.方法选成年杂交犬15只,将含有同等剂量(1×109/ml pfu)携带有细菌LacZ基因的重组腺病毒载体(Adex1SRLacZ),经上述三种方法导基因入心脏.术后5天处死动物,细织化学法分析Lac Z基因在心包及心肌中的表达.结果 (1)冠脉灌注法导基因入心脏后,LacZ基因在心肌中呈点或小片状表达;心肌注射法导基因入心脏后,LacZ基因沿注射轨迹成块或片状表达;心包注射法导基因入心包后,犬心包脏层、壁层及脏层下心肌均可见散在的LacZ基因表达,而使用同样方法注射对照腺病毒Adex lw 入犬心肌及心包均未见LacZ基因表达.(2)心肌注射法导基因入心脏的同时,心肌中可见明显的炎性细胞浸润,而冠脉灌注法及心包注射法导基因入心脏后则未见炎性细胞浸润.(3) 冠脉灌注法导基因入心脏的同时,肝脏细织中检测有散在的LacZ基因表达,而心肌注射法及心包注射法则不然.结论心肌注射法、冠脉灌注法及心包注射法是导基因入心脏的可行性方法,各有利弊,应用时可根据研究目的合理选用.
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恶性淋巴瘤基因治疗的新进展
目前,恶性淋巴瘤的主要治疗方法是联合化学药物治疗和放射治疗.对于难治性病例,骨髓移植也可能取得一定疗效.但是,上述方法对于大多数复发及高龄患者来说,进一步提高其生存率已十分有限.近年来,恶性淋巴瘤的基因治疗研究,作为一种新的治疗手段,已越来越引起人们的关注.此外,为了增强肿瘤免疫以达到杀伤全部肿瘤细胞的目的,转基因的抗肿瘤疫苗的研究也引起人们的极大重视.本文拟就恶性淋巴瘤基因治疗的主要策略、现状及其新进展,做一简要介绍.1 恶性淋巴瘤的基因治疗方法恶性淋巴瘤的基因治疗方法主要包括:直接杀伤肿瘤细胞的肿瘤靶向基因治疗;增强肿瘤免疫机能的基因免疫治疗;将耐药基因导入骨髓细胞使之获得耐药表型,从而增加骨髓对化疗药物的耐受性等方法.恶性淋巴瘤基因治疗的主要方法有:①直接杀伤肿瘤细胞的肿瘤靶向基因治疗,包括反义肿瘤基因治疗(Bcl-2,c-myc,NPM-ALK);肿瘤抑制基因治疗(p53,Rb);酶/前体药物系统基因治疗(HSV-tk/GCV,Cytosine deaminase/5-FC).②间接抑制肿瘤增殖的基因免疫治疗,包括肿瘤特异性免疫增强剂(B细胞淋巴细胞特异性抗原);肿瘤非特异性免疫增强剂(细胞因子IL-2,IL-12,GM-CSF,IL-1α);免疫增强因子(IP10,MCP3);免疫辅助因子(B7-1,B7-2,CD40ligand);生长调控基因(CpG岛,ISS).③提高肿瘤化学药物治疗耐受性的基因治疗,为耐药基因导入骨髓细胞(MDR1,MGMT).肿瘤靶向基因治疗是指目的基因能靶向导入特定组织细胞或能在其中靶向表达,从而高效率杀伤肿瘤细胞,减少正常细胞的伤害.Bcl-2、c-myc基因,以及在未分化大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lyonphoma)中经常出现的未分化大细胞淋巴瘤核苷酸激酶(nucleophosmin anaplastic lymphoma kinase,NPM-ALK)融合基因可用作反义基因治疗的靶基因[1].反义基因治疗就是应用反义核酸在转录和翻译水平阻断某些异常基因的表达,以期阻断
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地中海贫血治疗研究方向和药物治疗研究进展
地中海贫血(珠蛋白生成障碍性贫血)是由于珠蛋白肽链合成量之间不平衡所致,所以纠正珠蛋白肽链失衡成为地中海贫血治疗研究的关键.骨髓移植治疗重症地中海贫血成功的病例报告不断增加,预示基因治疗有望从根本上解决问题.目前基因治疗概念已从正常基因导入扩展至基因改造、RNA治疗、基因功能调整等方面,而使用药物调控基因表达来治疗β地中海贫血获得了低成本、低风险、疗效较明显的结果,利于临床推广应用.一些中成药、中药方剂辨证施治治疗地中海贫血疗效满意,显现祖国传统医药的应用优势和前景.我们重点综述这些药物对地中海贫血的治疗机制和用药方案,以供临床参考.
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三种反义c-myc RNA对HL-60细胞分化的影响
HL-60是一种c-myc高表达的恶性肿瘤细胞。大量研究显示,当HL-60细胞被多种化学诱导剂诱导产生分化、凋亡及生长抑制时几乎都有c-myc表达的明显下降,甚至在自发产生分化的HL-60细胞中也有c-myc基因扩增消失的现象,提示c-myc表达与HL-60细胞分化之间有密切关系。我们将构建成功的三种反义c-myc逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3(分别载有c-myc的第1,2和3外显子反义片段)导入HL-60细胞,并观察基因导入对靶细胞分化的影响。
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共转染抑癌基因p16、p53对白血病细胞株HL-60及K562的抑制作用
人类髓系白血病细胞株HL-60、K562同时有p16、p53抑癌基因的缺失[1,2].已有研究将正常的p53或p16基因单独导入这两种细胞,可以不同程度地抑制肿瘤细胞的生长[1,2].如果同时将缺失的p16、p53两种基因导入HL-60及K562细胞中,可能有更好的抑制作用.
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核酶对白血病耐药细胞株K562/A02耐药性逆转的研究
肿瘤耐药及其逆转是当今肿瘤治疗研究的热点.耐药的发生与多药耐药基因(mdr1)及其编码的P糖蛋白(P-gp)过度表达关系密切.我们采用电击基因导入法将特异切割mdr1 mRNA的锤头状核酶基因导入白血病耐药细胞株K562/A02,研究该核酶抑制mdr1基因及P-gp表达,逆转肿瘤细胞耐药性的作用.材料和方法1 细胞株 K562细胞株系人红白血病细胞株[1],由上海血液学研究所提供.K562/A02细胞株为阿霉素诱导K562细胞建立的多药耐药细胞株,由中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所提供.2 质粒真核表达载体pHβApr-1 neo/mdr-Rb含有新霉素G418抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、T7RNA聚合酶启动子和特异切割mdr1 mRNA 880位密码子的核酶基因(TAATACCACTCACTATAGTGCTTGTCCACTGATGAGTCCGTCAGGACGAAA-CAACATTT),由美国Berlex实验室 Scanlon教授提供.
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基因治疗1例下肢闭塞性动脉粥样硬化护理
基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞,纠正由于基因缺陷和基因异常而引起的疾病.从20世纪80年代后,由于分子生物学技术的快速发展,基因克隆、测序、基因表达及改变基因表达等方法日臻成熟,为转基因技术的产生奠定了基础,也为疼痛的转基因治疗开启了新时代.我科于2009年9月收治1例下肢闭塞性动脉粥样硬化患者,应用基因治疗患者半月,疼痛减轻,侧枝循环形成良好.两年随访效果满意,现报道如下.
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心血管疾病基因治疗研究中基因转移载体的生物安全性探讨
多种心血管疾病包括缺血性心肌病、动脉粥样硬化、高血压、心力衰竭等,可以采用基因治疗获得较好疗效。然而,心血管病基因治疗与其他疾病的基因治疗一样,在世界范围内还处在试验阶段。对心血管疾病进行基因治疗,需高效的基因转移载体和转移体系将目的基因导入心血管,并安全可靠地表达。基因治疗载体的选择是决定基因治疗是否有效的重要因素之一。理想的基因转导载体应该无致病性、可以有效转导靶细胞,转基因可以整合到宿主基因组,长时间稳定表达并可调控,同时只有小程度的副作用[1]。在用基因治疗纠正疾病缺陷时,其安全性研究及评价也就成为人类迫切需要解决的问题,生物安全性一直以来都是人们在构建基因治疗载体时所关注的重要问题。目前,应用于基因治疗的载体主要可分为病毒载体和非病毒载体。
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医学新革命--基因疗法
基因是携带生物遗传信息的基本功能单位,是位于染色体上的一段特定序列.将外源的基因导入生物细胞内必须借助一定的技术方法或载体,腺病毒载体是目前基因治疗为常用的病毒载体之一.基因治疗的靶细胞主要分为两大类:体细胞和生殖细胞,目前开展的基因治疗只限于体细胞.基因治疗目前主要是治疗那些对人类健康威胁严重的疾病,包括遗传病(如血友病、囊性纤维病等)、恶性肿瘤、心血管疾病、感染性疾病(如艾滋病、类风湿等).
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关节软骨损伤基因治疗的研究进展
关节软骨损伤是临床上常见的问题,其自愈能力有限,传统的治疗方法难以取得满意的效果,是医学界的一大难题.近些年研究表明,基因治疗可能成为解决这一难题的有效手段.基因治疗是指将核酸分子导入细胞乃至体内,使其在体内表达,从而改变疾病进程.基因治疗的内容主要包括:目的基因和靶细胞的选择,基因导入的方法和载体的选择.本文从基因治疗的内容出发,阐述其对关节软骨损伤治疗的重要性和可行性,并提出基因治疗在关节软骨损伤中存在的问题和展望.
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慢性创面基因治疗研究进展
糖尿病足溃疡、皮肤慢性缺血性溃疡、放射性溃疡、藏毛窦等慢性创面,局部组织损伤严重、细胞生存环境变化大;虽然外科医生战战兢兢的手术刀治愈了一些患者,但手术创伤大、失败率高、致残率高.如何简单有效地治疗这类疾病,是创伤修复领域面临的严峻挑战.
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转基因植物可食用疫苗研究进展
在第三世界国家,传染病仍旧是威胁儿童和青少年生命健康的主要因素,每年引起1300万人死亡[1].全世界每年有1.2×10\+8个新生儿需要接种水痘、乙型脑炎、脊髓灰质炎等16种疫苗,因而对疫苗的需求量巨大.预防接种的理想疫苗应该是安全、简易、廉价、耐高温、便于运输和发放,传统的疫苗通常不能达到这些要求.因此,现在许多研究人员都在努力探索利用转基因植物系统生产疫苗.转基因植物可食用疫苗就是运用植物转基因技术将抗原基因导入植物细胞,从而得到带有特异抗原基因的植物,人类或动物食用这些植物就可以达到免疫效果,不仅使人们免受针刺的痛苦,更为那些无法承受针剂疫苗的储藏、运送等所需昂贵费用的国家带来新的希望[1,2].本文对该类疫苗的生产原理与技术、作用机制、研究进展和应用前景作一综述.
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帕金森病基因治疗的临床前和临床研究
帕金森病灵长类动物模型的两种临床前基因治疗策略主要是,向脑黑质纹状体系统导入多巴胺合成酶基因或神经营养因子基因,以增加纹状体多巴胺水平或增强黑质残存神经元的存活能力.临床实验研究是将腺相关病毒介导的谷氨酸脱羧酶基因导入丘脑底核,使兴奋性神经递质谷氨酸变为抑制性神经递质GABA,从而抑制丘脑底核的靶核团苍白球内侧核和黑质网状部活性过高状态,使丘脑皮层通路的过度抑制被解除而达到治疗帕金森病的目的.
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构建糖尿病大鼠模型:Klotho基因导入对冠状动脉的保护作用
背景:Klotho基因是一种与机体衰老、代谢以及疾病有重要关联的基因,并已在小鼠动物实验中证实可减缓和抑制动脉粥样硬化,其机制与参与脂类代谢有关.目的:构建糖尿病大鼠模型,观察Klotho基因导入是否对糖尿病大鼠冠状动脉具有保护作用.方法:由正常SD大鼠肾组织提取Klotho基因,对目的基因进行PCR扩增,以腺病毒作为载体.随机将SD大鼠分为模型组、对照组和治疗组,进行糖尿病造模;将Klotho基因导入治疗组,对照组导入普通腺病毒,模型组不作任何处理.造模成功后12周时处死模型动物,检测血清低密度脂蛋白、高密度脂蛋白浓度及冠状动脉内膜、中膜厚度比.结果与结论:高密度脂蛋白浓度,治疗组高于模型组及对照组,治疗组与模型组、治疗组与对照组差异均有显著性意义(P<0.05),模型组与对照组间差异无显著性意义(P>0.05).低密度脂蛋白浓度,各模型组均有明显升高,但差异无显著性意义(P>0.05).计算各组内膜厚度,治疗组显著小于模型组及对照组,差异均有显著性意义(P< 0.01),而模型组与对照组差异无显著性意义(P>0.05).各组间中膜厚度差异无显著性意义(P>0.05).内膜、中膜厚度比,治疗组分别与模型组及对照组相比,差异均有显著性意义(P<0.01);治疗组与正常组差异无显著性意义(P>0.05),表明KL基因导入后内膜、中膜厚度比基本接近于正常水平,低于模型组及对照组,内膜增厚程度减小.提示Klotho基因导入糖尿病大鼠后对冠状动脉具有保护作用.