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小儿心血管疾病诊治进展
1 心力衰竭心力衰竭(简称心衰)是一组由不同病因引发的临床症候群.分子生物学研究表明心衰的本质是心肌组织细胞中某些相关基因表达与调控异常,引起了超负荷的心肌病,因此从某种角度说,心衰是一种基因病[1].通过基因导入以延缓和纠正心肌组织某些基因的突变,有可能使心衰的治疗获得较大进展.
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免疫学与儿科临床 第十二讲 基因治疗在小儿免疫临床中的应用
基因治疗是20世纪医学领域的伟大发现,近20年的研究取得了巨大进展,但至今仍存在一些问题。如何看待基因治疗的发展及其在儿科临床免疫领域的应用前景?本文结合几类小儿免疫性疾病基因治疗的研究进展加以分析。1 原发性免疫缺陷病的基因治疗 原发性免疫缺陷病(PID)为一类罕见疾病,多由某单一基因的缺陷引起免疫系统一个或几个分支功能缺陷所致,除单纯原发抗体缺陷可用静脉免疫球蛋白有效治疗外,许多PID目前缺乏有效治疗方法。基因治疗在理论上可将缺陷的基因导入体内并长期表达,纠正免疫功能状态,因而一直被认为是PID为理想的治疗手段。
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转基因技术常用的检测方法
将外源基因通过一定载体转入靶细胞内的技术称为转基因技术(Gene transfer or Gene transform).近十余年来,人们广泛利用分子生物学技术对原核细胞和真核细胞进行转基因工作,旨在进一步解释人类疾病的发病机制,探讨疾病诊断和治疗的新途径.转基因技术一般包括①目的基因获得;②将目的基因导入靶细胞内;③检测目的基因在靶细胞内表达水平三个重要环节[1].因此,如何判断外源基因是否导入靶细胞内,靶细胞的表达产物是否具有生物效应是转基因技术的重要一环.本文仅就目前常用的有关转基因技术的检测方法进行综述.
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129.植物疫苗
植物疫苗是利用重组技术将外来的疫苗基因导入植物,从而使植物体内产生疫苗抗原.从八十年代中期开始,这项技术以美国为中心进行研究,现在,在日本植物疫苗被称为植物产生的功能性蛋白质,并正作为分子农业的一部分进行着研究开发.
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肝硬化的基因导入疗法
一、利用自身再生能力的疗法近年成为新热点课题的是使胚胎干细胞(embryome stem cell:ES细胞)、造血干细胞和骨髓细胞等多功能性干细胞作形形色色的分化诱导,以进行各种脏器再建、脏器再生的尝试,现已取得了惊人的进步,且其未来发展更是大可期待的.作者等开展的肝硬化基因疗法即属于目前的这种基本医疗,即维持自身潜在组织再生能力以促使脏器再生这一思路的延伸方法之一.
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癌症的生物化学预防
一、类胡萝卜素类胡萝卜素(carotenoid)的防癌作用早已备受瞩目,并推测通过基因导入于动物细胞内亦能进行生物合成,故属先应用者.其生物合成系利用动植物共有的甲羟戊酸合成途径,植物类胡萝卜素合成是由牦牛儿焦磷酸(GGPP)依次合成为复杂的物质.但在动物,GGPP则合成为胆固醇.植物烯(phytene)为简单的类胡萝卜素或称类胡萝卜素前体,系无色物质,在植物烯合成酶作用下由GGPP一步合成.因此,将植物烯合成酶导入动物细胞便可由其中的GGPP合成.
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肝脏疾病的基因治疗进展
基因治疗是指将治疗性基因导入发生病变的细胞内,以替补或封闭突变、缺失、缺陷基因表达的治疗方法.基因治疗在肝脏疾病,尤其在肝脏遗传性疾病、肿瘤和病毒性肝炎等方面有广阔的应用前景.本文就近年来该领域的研究进展进行综述.
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基因导向的药物前体治疗在胰腺癌中的应用
基因导向的酶解药物前体治疗(gene directed enzymeprodrug therapy,GDEPT)亦称自杀基因治疗,即将非哺乳类的基因导入肿瘤细胞,该基因表达时可将全身给药的非毒性药物前体转变成毒性代谢产物,在肿瘤局部产生高浓度毒性作用以杀伤肿瘤细胞而全身反应较轻.胰腺癌的GDEPT治疗落后于肺癌、脑肿瘤、大肠癌及乳腺癌等疾病,目前尚处于体外和少部分小动物的体内实验研究阶段.本文就这一方面的研究现状作一综述.一、单纯疱疹病毒(HSV)-胸苷激酶(TK)基因 HSV Ⅰ型或Ⅱ型TK基因编码的TK能特异性地将核苷类似物,如羟甲基无环鸟苷(GCV)磷酸化,其产物在胞内进一步代谢成三磷酸GCV,后者可抑制细胞DNA聚合酶并作为DNA合成的终结者.
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人类心房利钠肽基因对幼龄自发性高血压大鼠的降压作用
目的 研究肌肉注射重组的人心房利钠肽(hANP)基因对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用.方法 将4周龄的自发性高血压大鼠随机分为2组,分别在股四头股注入200μg的pcDNA3.1-hANP和pcDNA3.1空质粒,每周测治疗组及对照组SHR的血压、尿量、尿钠量、心率及血浆hANP水平.观察3个月后处死,用RT-PCR、Western杂交测定hANP在大鼠体内的表达.结果 一次肌肉注射重组的人心房利钠肽(hANP)基因可明显延缓幼龄自发性高血压大鼠的血压升高,并且其血浆中的hANP水平及尿量也有明显升高,局部注射部位的肌肉组织中h ANP表达阳性.结论 肌肉注射重组的人心房利钠肽(hANP)基因可明显延缓幼龄自发性高血压大鼠的血压升高,显示了人心房利钠肽(hANP)基因对高血压病人降压治疗的可能性.
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永生化髁突软骨细胞软骨表型的特征
体外培养的髁突软骨细胞(mandibular condylarchondrocyte,MCC)常表现出不同分化状态的软骨细胞并存,其表型特征也随培养时间而变化,这些不稳定的因素为研究MCC的生物学特性带来了一定的困难.作者通过基因转染的方法将SV40大T抗原基因导入原代培养的兔髁突软骨细胞,建立了能在体外1年半的时间内稳定传代100次以上的永生化髁突软骨细胞系[1](immortalized mandibular condylarchondrocyte,IMCC).一些实验表明,永生化的软骨细胞失去了软骨细胞的表型特征,本实验将通过免疫组化方法,观察IMCC有无Ⅱ型胶原和软骨特异的蛋白多糖(proteoglycan,PG)的表达.
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心力衰竭基因治疗的研究进展
基因工程技术的飞速发展为心力衰竭提供了新的治疗手段.与传统药物治疗不同,心衰的基因治疗通过目的基因导入靶细胞,纠正或补偿失去正常功能的蛋白质,抑制不利基因的表达,以达到治疗心衰的目的.
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自杀基因治疗肿瘤研究进展
基因治疗的策略主要有:(1)基因替换和基因补充,转换突变的癌基因或补充肿瘤细胞中缺失的抑癌基因;(2)基因导入以增强免疫效应细胞的抗癌效能;如:导入细胞因子基因和(或)免疫共刺激分子基因以增强免疫效应细胞的杀癌能力;(3)基因导入以增强肿瘤细胞的免疫原性,如:导入MHCI类抗原基因;(4)肿瘤药物敏感基因治疗--自杀基因的应用;(5)肿瘤药物耐受基因(MDR)治疗--造血功能的保护;(6)反意治疗技术:根据碱基互补原理,人工合成特定互补DNA或RNA片段(或其他化学修饰产物)抑制或封闭癌基因表达;(7)诱导分化治疗:在分化诱导剂的作有用下促进肿瘤细胞分化以达到治疗癌症的目的.目前,药物敏感基因--自杀基因治疗日益受国内外肿瘤研究者的关注,本文将这一疗法作一综述.
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16型人乳头瘤病毒E6、E7基因延长人黑素细胞生命期的初步研究
16型人乳头瘤病毒(HPV16)E6/E7基因能有效地使人上皮细胞、角质形成细胞永生化,为探讨HPV16E6/E7对黑素细胞的影响,本研究用Lipofectamine转染法将HPV16E6/E7基因导入正常人黑素细胞,观察其对黑素细胞生命期的影响,并就其意义进行了初步探讨.
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逆病毒载体介导尿激酶受体基因在乳腺癌细胞表达的研究
大量的临床研究证实尿激酶(uPA)及其受体(uPAR,CD87)表达与肿瘤细胞的侵袭与转移能力相关[1].uPAR是一种由糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜的糖蛋白,通过将uPA活性定位于细胞表面(即胞周)而调节蛋白水解过程[1,2].本研究我们利用逆病毒载体将uPAR基因导入低侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,为客观评价uPAR基因过表达与乳腺癌细胞侵袭及转移的关系提供了实验模型.
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IL-2基因转移对CD3AK细胞生物学功能的影响研究
白细胞介素-2(IL-2)是T细胞活化分泌,能与T细胞上IL-2R结合后,增强T细胞增殖的一种重要的细胞因子.CD3AK细胞是利用抗CD3单克隆抗体与TCR/CD3复合体的结合,同时提供少量外源IL-2,激活产生的具有细胞毒效应的杀伤细胞,常用于过继免疫治疗.临床资料表明体内使用外源性IL-2常导致毒副作用.能否利用基因转移技术将IL-2基因导入CD3AK细胞,使其表达并维持CD3AK的活化状态呢?抗CD3McAb活化的T细胞作为逆转录病毒载体的受体细胞,已有应用于IL-1β基因转移研究的报道.本实验利用逆转录病毒载体将IL-2基因导入CD3AK细胞中,探讨基因转移对CD3AK细胞生物学功能的影响.
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人基因治疗研究概况
基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础的医学治疗.在二十世纪六十年代末,人们就尝试将含精氨酸酶(arginase)基因的病毒注射入精氨酸酶缺陷的病人[1].第一例经批准的人基因治疗临床试验于1990年9月14日在美国国立卫生研究院(NIH)临床中心进行,即W.French Anderson等得到NIH重组DNA咨询委员会的许可后,通过基因治疗技术将正常的腺苷脱氨酶(ADA)基因导入因先天性腺苷脱氨酶缺陷而患重度联合免疫缺陷综合症(SCID)的、年仅4岁的Ashanti DeSilva女孩体内,结果证明了由病毒介导的外源基因确实可以能够在患者体内表达正常的、具有生物活性的蛋白,这一开创性试验虽然未能在临床意义上取得成功[2,3],但它却受到了众多的关注.
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肿瘤基因靶向研究进展
肿瘤的基因靶向研究基于肿瘤的分子表达,通过基因介导以达到治疗目的.在研究过程当中多种靶向治疗方案已经取得很大进展,包括靶向基因直接注射、靶向基因导入、靶向基因转录.目前已成为当前肿瘤靶向研究的热点问题,现就此研究进展进行综述.
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携带人Kif4和EGFP基因慢病毒表达载体构建
自日本和美国研究小组先后用四种基因将小鼠[1]和人[2,3]的体细胞在体外重编程为诱导型多潜能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs)以来, 在短短4年多时间内,iPSCs的研究和关注度呈爆炸式增长.科学家将Octamer-4(Oct4)、Sox2、Kif4和c-Myc等基因导入动物和人类体细胞后,在体外重编程为iPSCs,并成功建立了一系列不同个体、不同疾病的特异性iPSCs系[4].作者在前期工作中证实由其它实验室惠赠的低拷贝载体pLenti-EF1a-Kif4-IRES- EGFP无法满足实验需要,而慢病毒载体pFUGW 包装生产的病毒能高效感染目标细胞.因此,为了更好地研究肿瘤细胞重编程,本文将Kif4-IRES-EGFP克隆于pFUGW,以期由所构建的慢病毒载体生产的病毒能高效感染肿瘤细胞,为下一步开展肿瘤细胞重编程研究奠定基础.
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载脂蛋白A5基因多态性与甘油三酯代谢及冠心病关系的研究进展
近年通过比较小鼠和人的基因组序列发现的载脂蛋白A5(Apolioprotein A5,ApoA5)是第一个过度表达引起血浆甘油三酯(TG)下降的载脂蛋白.除LDL颗粒外, CM、VLDL和HDL颗粒均含有ApoA5.ApoA5在血浆中含量甚微,其浓度仅为ApoA1的0.1%.小鼠基因敲除和基因导入实验表明ApoA5在调节血浆TG代谢方面起至关重要的作用,二者之间呈负相关[1,2].现对其分子结构、生物学功能、基因表达及调控作简要介绍,并着重讨论其基因多态性与血脂代谢和冠心病之间的关系.
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稳定表达乙型肝炎病毒X基因正常肝细胞株的建立
我们通过脂质体介导转染将乙型肝炎病毒X(HBVx)基因导入正常肝细胞系中,建立稳定表达乙型肝炎病毒X基因正常肝细胞株,为研究HBVx基因的生物学行为提供细胞模型.