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腺相关病毒载体研究进展
腺相关病毒作为基因治疗的载体,具有感染范围广,可长效稳定地表达外源基因,可定点整合至宿主基因组等诸多优点而备受青睐.近年来,有关腺相关病毒及重组腺相关病毒的生物学特点有不少研究进展,本文就此做一综述.
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外源基因转染细胞技术的研究进展
随着基因与蛋白功能研究的深入,目前已建立了许多细胞稳定转染的方法,将外源基因导入细胞内已作为一种专业技术在农业、医学和生物制药等领域展现出巨大的应用前景,在基因治疗层面上,为很多疾病的基础研究和临床治疗提供了有力的保障.细胞转染技术是将外源基因导入真核细胞的技术.根据转染载体的不同,转染类型可分为病毒载体和非病毒载体转染,病毒载体转染主要包括逆转录病毒、腺病毒相关病毒载体转染,非病毒载体转染常见的有脂质体转染、纳米材料为载体的转染等.
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乙型肝炎病毒基因治疗研究现状
近年来,干扰素(INF)-α和核苷类似物拉米呋啶的应用,虽然在慢性乙型肝炎的抗病毒治疗上取得较大进展,但总体疗效并不理想.IFN-α的长期有效率仅为30%~40%,抗病毒新药核苷类似物拉米呋啶(lamivudine)和华米可维(famiclovir),也存在着抗病毒作用短暂、易于诱发DNA多聚酶突变而形成耐药以及停药后易复发等缺点.抗乙型肝炎病毒的基因治疗目前技术虽不成熟,但却为抗乙型肝炎病毒治疗开辟了一个新的广阔的空间,并已成为当前国内外抗病毒治疗研究的一个热点.本文就反义核苷酸技术和外源基因的转导表达技术在抗乙型肝炎病毒治疗中的研究现状加以综述.
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转基因技术与转基因食品
转基因技术(Transgenic technology)是利用分子生物学技术,将外源基因或经修饰的基因转移到其他物种中,改变生物的遗传物质,进而产生具有优良遗传性状的转基因生物.以转基因生物(Genetically Modified Organism,GMO)为直接食品或为原料加工生产的食品称为"转基因食品",这类转基因生物可以在产量、营养品质、消费品质等方面向人们所需要的目标进行改善.
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多重基因表达遗传分析系统在转基因食品检测中的应用
目前,国内外对转基因食品检测技术种类较多[1-2],常用的PCR大多是针对单个基因的,费时且成本较高.笔者基于多重基因表达(gene expression profiler,GEXP)遗传分析系统,建立了一种新型多重PCR技术,可同时检测转基因食品中常见的6种外源基因(nos、Camv35s、epsps、pat、Fmv35s、bar).
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转基因食品(transgenic food)
从狭义上说,通过基因工程手段将一种或几种外源性基因转移到某种特定生物体(动、植物)中,并使其有效地表达相应的产物(多肽或蛋白质),这样的生物体直接作为食品或以其为原料加工生产的食品,叫做转基因食品。这里所指“外源性基因”,通常指受者生物体中原来不存在的,在某些情况下也可指受者生物体中存在这种基因但不表达。因此,转移了外源基因的生物体会因产生原来不具备的多肽或蛋白质而出现新的生物学性质(表型)。一种生物体新表型的产生,除可采用转基因技术外,也可对生物体本身的基因进行修饰而获得,在效果上等同于转基因,这便是广义上的转基因食品。 自1993年以来,转基因食品已广泛地进入市场和百姓生活中。由于涉及基因工程操作,转基因食品也引发出一些伦理和安全性评估的争议。
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外源基因在转基因蚊虫中表达的研究进展
利用转基因技术对蚊虫进行遗传修饰使其密度下降或降低其传播疾病的能力是控制蚊媒传染病的腋鲂虏呗?其核心问题是外源基因在转基因蚊虫体内的表达.本文从转基因蚊虫的表达载体、外源基因表达特性及效应、转基因蚊虫研究存在的问题及发展前景等方面对该领域的研究进展进行了综述.
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转基因食品定性定量的检测分析方法
转基因食品(genetically modified foods,GMF)是指由细胞DNA中经非生殖方法插入了特定外源基因或基因片段,并获得某种良好性状的动物、植物或微生物制成的食品.自1993年转基因作物Flavr Savr延熟番茄实现商品化以来,转基因食品的安全性问题一直为公众所注目,且至今尚无统一定论.
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细菌耐药的基因机理研究进展
细菌可通过不同机制产生遗传变异,对抗生素产生耐药性.根据遗传特性,将细菌耐药性分为两类:一类是自身基因突变;另一类是获得外源基因.本文对细菌耐药基因机理的研究进展作一综述.
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优化反向PCR法对hTF转基因小鼠整合位点旁侧序列分析
自1982年世界上首次通过转基因动物技术获得"巨鼠"[1]以来,转基因动物的研究发展迅速.随着多种转基因动物的成功获得,研究者设想利用动物表达外源基因,以动物个体作为一个反应器来生产有价值的蛋白质.
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表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒伴随病毒的产生
来源于维多利亚水母(Aequorea victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是近年来发现的一种新的报告基因,由于其具有产生荧光不需任何底物或辅助因子、可以活体观察等特点,因此在目前的基因转移、基因治疗研究中得到了广泛的应用[1].重组腺病毒伴随病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)具有安全性好、可介导外源基因长期稳定表达等特点,是目前比较理想的基因治疗载体.构建表达GFP的rAAV载体(rAAV-GFP)对于应用rAAV进行基因转移和基因治疗研究非常必要,如评估rAAV生产系统的生产效率、估计rAAV的转导效率、研究rAAV进入体内后的分布及表达情况等.
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以lacZ作为报告基因研究霍乱弧菌irgA基因表达的铁调控性
细菌蛋白分泌表达基因水平的调控与许多环境信号密切相关,铁浓度作为环境信号影响许多基因的表达。irgA为霍乱弧菌中铁抑制外膜蛋白,在乳鼠模型中检测irgA突变株毒力下降100倍。鉴于irgA的可诱导表达,其启动子在可调控高效表达外源基因方面可能会发挥较好的作用。本研究用启动子探测质粒、以lacZ作为报告基因对irgA在大肠杆菌工程菌中的铁浓度调控表达方面进行了初步的定量研究。
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携带外源基因的HBV在HepG2细胞中的表达与复制
我们以体外能够表达野生HBV的质粒pHBV3091为研究对象,用GFP基因替代HBV的S读码框构建携带外源基因的重组HBV载体pHBV-S-GFP.为了保证重组载体中外源基因能够有效表达及整个HBV基因读码框的顺利通读,在改造HBV时保留了S基因的前9个核苷酸使GFP与之融合,从而保证S基因起始密码子附近的DNA结构尽可能与野生HBV一致,保持HBV自身基因表达调控元件的特性.
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改良型痘苗病毒安卡拉株(MVA)作为递送载体在抗感染治疗中的应用
改良型痘苗病毒安卡拉株( modified vaccinia virus Ankara,MVA)是人类在寻求痘苗病毒作为天花疫苗的过程中获得的高度减毒的痘苗毒株. MVA来源于一个土耳其的痘病毒毒株(chorioallantois vaccinia virus Ankara,CVA),CVA在鸡成纤维细胞中传代570代后得到MVA[1]. 对MVA全基因序列测序后发现, MVA基因组全长178 kb,与CVA相比MVA在传代的过程中丢失了大约15%(30 kb)的病毒基因,这些基因大多与病毒的毒力和宿主选择范围密切相关[2].MVA在允许细胞(permissive cell),如BHK-21、CEF等细胞内,可以完成完整的生活周期. 而在非允许细胞( non-permis-sive cell) ,如大部分哺乳动物和人类细胞内,MVA病毒的早期和晚期蛋白都进行了表达,但是病毒不能包装成完整的粒子[3]. 与其他痘病毒一致,MVA在感染细胞后,基因组不进入细胞核,而是在细胞质中依赖自身的启动子与转录系统来完成基因的复制与表达. 传代过程中MVA丢失了6个主要的基因片段,这些部位可以用来插入25 kb以上的外源基因,并且在外源基因插入后并不影响病毒本身的感染能力和表达能力[4].
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间充质干细胞在肺组织损伤及修复中的研究进展
干细胞(stem cells)是一类具有无限自我更新和分化能力的特殊细胞,能够控制并维持细胞再生,在受损组织进行局部再生修复.当组织损伤较为严重时,远处的干细胞也可通过横向分化(tmnsdifferentiation)、甚至跨胚层分化的方式募集到受损部位,进行转化与修复.间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)来源于胚胎发育早期中胚层,具有分化为成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和上皮细胞等多种细胞的潜能,并有向损伤组织趋化的特性,易于体外分离、培养和扩增,易于转染并能长期表达外源基因.MSCs于骨中含量多,称为骨髓间充质干细胞,是除造血干细胞外存在于骨髓中的另一种干细胞.
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细胞因子作为DNA疫苗基因佐剂的研究进展和探索
20世纪90年代以来,伴随着基因治疗技术的发展,产生了一种新型疫苗--DNA疫苗,又称核酸疫苗.DNA疫苗就是运用克隆技术把编码某种特异抗原的外源基因连接到真核表达载体上,利用重组的质粒DNA免疫机体,使外源基因在活体内表达.
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基因治疗中非病毒转移技术的研究进展
基因治疗是指将具有治疗作用的外源基因通过一定方式导入靶细胞,以纠正或替代发生功能缺陷的基因,从而达到治疗目的.随着对基因转移技术分子细胞生物学机制的深入探究,基因治疗正在各种疾病的治疗研究中发挥着越来越重要的作用[1].但目前,基因治疗领域还存在许多问题,其中缺乏安全、有效及可控的基因转染系统仍然是制约其发展的瓶颈[2].本文将就基因治疗中的非病毒转移技术综述如下.
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凋亡素在人体消化道肿瘤中的作用
细胞凋亡是细胞在其基因的调控下有序的死亡方式,是生物细胞的一种生理性死亡过程,对于维持整个机体的正常生理过程、保证个体正常发育起着重要作用.一旦细胞的增生和/或凋亡异常,均可导致细胞的恶性转化.凋亡素(VP3)来源于鸡贫血病毒,由366 bp组成,编码121个氨基酸序列的小分子物质,能够特异性诱导肿瘤细胞的凋亡,不依赖于p53,同时Bcl-2不仅不能抑制其活性,而且具有加速VP3诱导凋亡的作用,令人兴奋的是VP3对正常的人和鼠的二倍体细胞无任何毒副作用,其原因在于VP3特异性的核定位及其磷酸化所致.多种载体(细菌或质粒)具有独特的安全性能和/或免疫佐剂作用,经过分子生物学改造以后,能够表达外源基因并具有生物学活性,可以作为VP3释放系统,利用VP3在正常细胞和肿瘤细胞以及转化细胞中定位的不同以及VP3激酶在肿瘤细胞和正常细胞中表达的差异,对癌前病变或易于癌变的细胞进行检测,对预测肿瘤发生的倾向性和肿瘤的治疗具有重要的意义.因此VP3在抗肿瘤方面具有巨大的潜在优势和广阔的应用前景,对VP3进行深入细致的研究可能为恶性肿瘤的治疗开辟一条新的、有效的、安全的途径.
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自杀基因治疗恶性肿瘤的载体效率及基因表达
如何利用基因载体选择性转移治疗基因,并促使治疗基因在靶细胞中充分表达是自杀基因治疗恶性肿瘤的关键所在.随着研究的深入发展,各种基因载体的多方面特性逐渐展现在人们面前,其携带外源基因进入靶细胞,并在靶细胞中表达的过程也逐步被更清楚了解.这些新认识指导科学者们在选择及改造载体,调整各种影响因素等方面作了大量尝试,取得诸多新认识,大大加强了自杀基因针对肿瘤细胞的靶向性、高效性表达.
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基因疗法能治愈糖尿病吗?
糖尿病是世界上严重的慢性非传染性疾病之一.长期的血糖异常可导致眼睛、心脏、肾脏、神经、血管等多器官组织的进行性损害,导致很高的伤残率和死亡率.什么是基因治疗?基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗目的.也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中,使外源基因制造的产物能治疗某种疾病.从广义说,基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术.