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荧光素酶光成像实时监测诱导凋亡配体基因治疗裸鼠肺癌A549细胞移植瘤的实验研究

曹宏伟；崔建岭；赵纳；郭志远

关键词：发光蛋白质类肿瘤坏死因子类荧光素类基因

摘要： 目的应用人肿瘤坏死因子相关的诱导凋亡配体( hTRAIL)基因和萤火虫荧光素酶(luc)基因的腺病毒双表达载体(ad-hTRAIL-luc),以luc为报告基因,活体内监测hTRAIL基因的表达及作用.方法皮下接种法建立肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,瘤内多点注射腺病毒载体ad-luc-hTRAIL、ad-hTRAIL、ad-luc.对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS).于注射后4、7、10、14、21、28 d动态测量各组肿瘤大小,并利用高敏感、超低温(CCD)照相机进行活体生物发光成像检测luc活性,然后处死动物,免疫组织化学(简称免疫组化)法检测各组hTRAIL蛋白表达情况,并进行免疫组化评分(IHS)；TUNEL法检测各组肿瘤细胞凋亡情况,并计算凋亡率.统计分析组间比较采用方差分析,两样本比较采用配对t检验.对ad-luc-hTRAIL组的发光光子数、免疫组化评分、凋亡率3种结果进行线性相关分析.结果 ad-luc-hTRAIL与ad-hTRAIL组肿瘤生长速度明显较PBS组缓慢(t=2.71、2.72,P＜0.05),28 d后各组肿瘤体积分别为(208.4 ±42.3)、(181.5 ±23.9)、(427.0±59.3)mm3,ad-luc组与PBS组肿瘤生长差异无统计学意义(t=2.07,P＞0.05).ad-luc-hTRAIL组luc活性于治疗后第7天达高峰(1.37±1.04)后快速下降.ad-luc-hTRAIL与ad-hTRAIL 2组在注射载体后第7天hTRAIL表达及肿瘤细胞凋亡率达高峰,IHS峰值分别为6.25 ±2.06和6.5 ±2.89,肿瘤细胞凋亡率峰值分别为(60.75±8.06)％和(61.50±8.47)％.ad-luc-hTRAIL组luc表达量(绝对光子数)与IHS、肿瘤细胞凋亡率三者间均呈线性正相关(r光子数/IHs=0.942,r光子数/凋亡率=0.842,rIHs/凋亡率=0.887,P值均＜0.05).结论目的基因可以有效地通过ad-luc-hTRAIL转导入裸鼠肺癌A549细胞移植瘤内并高水平表达,发挥生长抑制和促凋亡作用,体外CCD照相机观察luc的表达可实时监测hTRAIL基因的表达,反映hTRAIL基因治疗肿瘤的疗效.

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