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肝组织 HBsAg、HBcAg 和血清 HBsAg 水平、HBV DNA 载量与肝组织病理学相关性
目的：探讨慢性乙型肝炎肝组织 HBsAg、HBcAg 表达水平和血清 HBsAg 水平、HBV DNA 载量与肝组织病理学分级和分期之间的相关性。方法慢性乙型肝炎患者388例，其中 HBeAg 阳性196例，HBeAg 阴性192例，均经肝活组织检查。采用 Abbott Architect I2000及其配套试剂检测血清 HBsAg 和 HBeAg，实时荧光定量 PCR 检测血清HBV DNA，采用免疫组织化学法检测肝组织 HBsAg、HBcAg。统计分析采用 SPSS 16．0软件。结果 HBeAg 阳性患者血清 HBsAg 水平与病理学分级和分期均呈显著负相关（P ＜0．01），血清 HBV DNA 载量与病理学分级和分期均无显著相关性（P ＞0．05）；HBeAg 阴性患者血清 HBsAg 水平与病理学分级和分期均无显著相关性（P ＞0．05），血清 HBV DNA 载量与病理学分级和分期均呈显著正相关（P ＜0．01）。HBeAg 阳性患者肝组织 HBsAg 表达水平与病理学分级和分期均无显著相关性（P ＞0．05），HBcAg 表达水平与病理学分级和分期均呈显著负相关（P ＜0．05）；HBeAg 阴性患者肝组织HBsAg 表达水平与病理学分级和分期均无显著相关性（P ＞0．05），HBcAg 表达水平与病理学分级呈显著正相关（P ＜0．01），与病理学分期无显著相关性（P ＞0．05）。结论在 HBeAg 阳性阶段，血清 HBsAg 水平和肝组织 HBcAg 水平的逐步下降与肝组织炎症活动度和纤维化程度的进行性加重有关；在 HBeAg 阴性阶段，血清 HBV DNA 载量和肝组织 HBcAg水平的升高与肝组织炎症活动度和纤维化程度的加重有关。
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乙型肝炎肝细胞内HBcAg表达模式与肝组织炎症及血清学指标的关系
目的 探讨乙型肝炎患者肝细胞内乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)表达模式与肝组织炎症分级、血清乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV) DNA含量以及ALT、AST酶活性的关系.方法 收集乙型肝炎肝穿刺石蜡包埋组织标本89例,切片后分别行HE染色及免疫组化PV 6000法染色,并在光镜下观察、判定肝组织炎症分级和肝细胞内HBcAg的表达模式,同期应用荧光定量PCR法和速率法测定各患者的血清HBV DNA含量和ALT、AST酶活性.结果 (1) HBcAg浆型及浆型优势表达组的肝组织炎症程度高于核型及核型优势表达组(H=19.884,P=0.0002);(2)89例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量平均值依次为:肝细胞内HBcAg核型表达组为(16.63 ±3.39) IU/ml、核型优势表达组为(14.92±3.85) IU/ml、浆型优势表达组为(12.14 ±3.20) IU/ml和浆型组为(10.91 ±3.64) IU/ml,其中浆型、浆型优势表达组分别与核型、核型优势表达组相比,差异有统计学意义(F=12.66,P=0.000 1);(3)肝细胞内HBcAg浆型或浆型优势表达组的血清ALT、AST酶活性高于核型或核型优势表达组(ALT:F=8.73,P=0.000 1;AST:F=4.26,P=0.007 4).结论 肝细胞内HBcAg呈浆型或浆型优势表达的乙型肝炎患者,其肝组织炎症分级和血清ALT、AST酶活性均较高,但血清HBV DNA含量较低.
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Tat47-57-HBcAg融合基因表达载体的构建及融合蛋白的表达鉴定
目的:探讨融合蛋白Tat47-57-HBcAg原核表达的可行性,并分析其表达形式,为研究其功能提供理论基础.方法:合成Tat47-57编码序列,PCR技术扩增HBcAg基因,通过重叠延伸PCR片段拼接法,将Tat47-57编码序列和HBcAg基因拼接,将融合基因克隆到pET28原核表达载体中.挑选测序正确的构建质粒转化大肠埃希菌Rosetta-gamiTM2(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,表达产物超声破壁,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的表达形式,Western印迹鉴定.结果:Tat47-57-HBcAg融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性形式过度表达,Western印迹分析表明Tat47-57-HBcAg融合蛋白可与HBcAg单克隆抗体反应.结论:融合蛋白Tat47-57-HBcAg以可溶性形式在原核表达系统中高效表达,并能特异性的被HBcAg单克隆抗体所识别.
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乙型肝炎四项指标消长分析及其相互关系研究
目的探讨HBV DNA与乙型肝炎聚合人血清白蛋白受体(PHSA-Re)、核心抗原(HBcAg)、e抗原(HBeAg)的相互关系.方法采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,对其中浓度不同阳性102例和阴性36例进一步检测PHSA-Re,HBcAg和HBeAg.结果102例HBV DNA阳性中PHSA-Re、HBcAg、HBeAg的阳性率分别占86.27%、82.35%、72.55%.36例HBV DNA阴性中PHSA-Re、HBcAg、HBeAg的阳性率分别占38.89%、80.56%、11.11%.PHSA-Re浓度与HBV DNA含量呈正相关递增.结论HBV DNA阴性患者HBV复制和感染仍有并存,四项指标联合检测更能客观反映HBV复制与感染程度.
关键词： 乙型肝炎 乙肝病毒DNA 聚合人血清白蛋白受体 乙型肝炎核心抗原 乙型肝炎E抗原 -
HBV 基因组 C 基因分子生物学的研究进展
乙型肝炎病毒（HBV）C 基因包含前 C 区基因和 C 区基因，分别编码乙型肝炎 e 抗原（HBeAg）和乙型肝炎核心抗原（HBcAg）。HBeAg 参与免疫调节，并且是乙型肝炎传染性的标志之一。HBcAg 是核衣壳的组成蛋白，在病毒颗粒的组装、成熟、诱导免疫反应以及致肝病、肝癌的分子机制中起着重要的作用。文章就 HBV 基因组 C基因分子生物学的研究进展作一综述。
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妊娠各期乙型肝炎病毒携带的产妇胎盘感染的相关研究
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)携带的妇女妊娠早、中、晚期胎盘各层细胞的乙型肝炎病毒(HBV)感染状况.方法收集本院妇产科乙肝病毒者携带的产妇胎盘19例(其中早期钳刮的胎盘组织3例,中期引产胎盘9例,足月分娩10例),用免疫组织化学ABC染色法检测胎盘蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞和绒毛毛细血管内皮细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎核心抗原(HBcAg).结果 (1)早期钳刮的胎盘组织无感染乙型乙肝病毒;(2)中期引产胎盘有1例发生乙型肝炎病毒感染;(3)足月分娩胎盘蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞和绒毛毛细血管内皮细胞均感染乙型肝炎病毒.结论乙型肝炎病毒可感染足月分娩胎盘各型细胞,造成胎儿宫内感染发生.
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HBcAg和HBeAg对人树突状细胞成熟和功能的影响
目的 观察乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)和乙型肝炎e抗原(hepatits B e antigen,HBeAg)对人树突状细胞的影响.方法 分离20例健康者外周抗凝血淋巴细胞,将贴壁细胞加重组人白细胞介素4和重组人粒巨噬细胞集落刺激因子培养至第7天,将树突状细胞分为HBcAg组、HBeAg组和树突状细胞对照组,分别加入HBcAg、HBeAg对树突状细胞刺激培养至第10天,检测刺激培养后细胞表型与分泌的细胞因子及其对树突状细胞体外诱导的淋巴细胞增殖效应和淋巴细胞毒活性的影响.结果 HBcAg组、HBeAg组树突状细胞表面分子(CD83,CD86,HLA- ABC)水平和分泌干扰素-γ、白细胞介素-12p70水平、体外诱导淋巴细胞增殖效应及淋巴细胞毒活性与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)；HBcAg组增强树突状细胞的分子表达、分泌白细胞介素-12p70及体外诱导淋巴细胞毒活性与HBeAg组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HBcAg和HBeAg可增加人树突状细胞表达成熟活化的分子、分泌细胞因子,增强树突状细胞体外诱导淋巴细胞增殖效应及淋巴细胞毒活性.
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慢性乙型肝炎肝细胞HBsAg HBcAg表达与肝组织病理学分析
目的 探讨慢性乙型病毒性肝炎肝细胞内HBsAg、HBcAg的表达与肝组织病理学的关系.方法 对146例慢性乙型病毒性肝炎肝细胞内HBsAg、HBcAg的表达和肝组织病理学进行回顾性分析.结果 146例慢性乙型病毒性肝炎肝细胞内HBsAg、HBcAg的表达率分别为89.0％和80.8％,肝细胞HBcAg胞桨阳性、胞桨+胞核阳性、胞核阳性的慢性乙型病毒性肝炎患者中,中度和重度炎症活动度的比例分别为75.0％ 、23.1％和8.3％;纤维化S0-S2、S3-S4的比例分别为50.0％、50.0％,73.1％、26.9％,86.1％、13.9％.结论 慢性乙型病毒性肝炎肝细胞内HBsAg的表达是慢性HBV感染的一个标志,肝细胞内HBcAg的表达方式与肝组织炎症分级和纤维化分期相关,HBcAg胞桨阳性的慢性乙型病毒性肝炎患者组炎症活动度和纤维化程度,均显著高于HBcAg胞核阳性和胞核+胞桨阳性的慢性乙型病毒性肝炎患者组.
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利用大肠埃希菌分泌表达乙型肝炎病毒核心抗原
目的:研究乙型肝炎病毒核心(C)基因在大肠埃希菌(E.coli)中的表达,以期获得分泌表达的具有良好免疫反应性和特异性的HBcAg.方法:构建重组质粒pET-3c-cAg、pET-30a-cAg、pGEX-4T-1-cAg,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HBcAg.SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行分析.结果:限制性内切酶酶切和DNA序列分析证实HBV C基因正确克隆到E.coli各表达载体中.ELISA和Western blot分析表明,以pET-3c和pET-30a为表达载体能在E.coli分泌表达HBcAg,而以pGEX-4T-1为载体只能胞内表达,其中以pET-3c为载体的分泌表达量高,培养上清中其效价为1:128;用分泌表达的HBcAg作为诊断抗原检测抗-HBc阴阳性血清及国家参考品,符合率为100%.结论:成功获得HBcAg在E.coli的分泌表达,且其具有较高的特异性和免疫反应性.
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慢性乙型肝炎肝组织内HBsAg、HBcAg的表达及临床研究进展
一直以来临床将血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙肝病毒DNA(HBV DNA)阳性作为乙肝病毒复制的标志,随着肝穿活检及抗病毒治疗的研究进展,肝活检组织中乙肝表面抗原(HBsAg)和乙肝核心抗原(HBcAg)的表达模式与血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量、肝组织炎症活动度分级及纤维化分期之间关系的临床研究日益增多,本文就HBsAg和HBcAg在肝组织的表达模式及临床研究进展综述如下.
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乙型肝炎病毒复制及其抗原表达水平与慢性乙型肝炎肝组织病理状态的相关性
目的 探讨慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者病毒复制及其抗原表达水平预测肝组织病理状态的价值.方法 进行肝活检的CHB患者695例,血清HBsAg和HBeAg采用Abbott Architect I2000检测,血清HBV DNA采用实时定量PCR检测,肝组织HBsAg和HBcAg采用免疫组织化学法检测.结果 HBeAg阳性患者,血清HBsAg、HBeAg水平和HBV DNA载量与病理学分级和分期均呈显著负相关(P＜0.01);肝组织HBsAg表达水平与病理学分级和分期均无显著相关性(P＞0.05),HBcAg表达水平与病理学分级和分期均呈显著负相关(P＜0.01).HBeAg阴性患者,血清HBsAg水平与病理学分级和分期均无显著相关性(P＞0.05),HBV DNA载量与病理学分级和分期均呈显著正相关(P＜0.01);肝组织HBsAg表达水平与病理学分级和分期均无显著相关性(P＞0.05),HBcAg表达水平与病理学分级和分期分别呈显著正相关(P＜0.05)和无显著相关性(P＞0.05).有序Logistic回归分析显示,HBeAg阳性患者血清HBsAg、HBeAg水平和HBV DNA载量、肝组织HBcAg表达水平预测病理学分级和分期的回归系数均有统计学意义(P＜0.05);HBeAg阴性患者,只有血清HBV DNA载量预测病理学分级的回归系数有统计学意义(P＜0.01).结论 HBeAg阳性患者,血清HBsAg、HBeAg水平和HBV DNA载量、肝组织HBcAg表达水平均有预测肝组织病理学分级和分期的意义;HBeAg阴性患者,只有血清HBV DNA载量有预测肝组织病理学分级的意义.
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恩替卡韦联合苦参素治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效观察
[目的]观察恩替卡韦(ETV)联合苦参素治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)的疗效.[方法]92例HBeAg阳性CHB患者随机分为2组,治疗组48例,每天服用ETV 0.5 mg,苦参素片0.6 g;对照组44例,每天服用ETV 0.5 mg.分别观察服药12、24、48周时的治疗效果.[结果]对照组和治疗组在12、24、48周的HBV DNA阴转率分别为29.55%、40.91%、63.64%和43.75%、58.33%、83.33%,2组比较在12、24周时差异无统计学意义(P＞0.05),而在48周时差异有统计学意义(P＜0.05).对照组和治疗组的HBeAg转阴率,在12、24周时分别为36.37%、43.75%和50.00%、64.59%,2组比较P＞0.05,而在48周时分别为59.09%和81.25%(P＜0.05).对照组和治疗组的HBeAg/HBeAb血清转换率,12、24周时分别为29.55%、37.50%和40.91%、52.09%,2组比较P＞0.05,而在48周时分别为47.73%和68.75%,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]ETV联合苦参素治疗CHB可明显提高抗病毒治疗效果.
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慢性乙型肝炎患者病理舌苔与血清HBV DNA含量、肝脏HBcAg蛋白表达的关系
目的:通过对慢性乙型肝炎(CHB)患者病理舌苔与血清HBV DNA含量、肝脏HBcAg表达的研究,揭示CHB患者病理舌苔与病毒复制的关系,为临床宏观望舌诊病,以外揣内提供理论指导.方法:B超引导下肝脏穿刺,免疫组化法检测CHB患者肝脏HBcAg蛋白表达;荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测CHB患者血清HBV DNA含量.结果:①黄腻苔和白厚苔组CHB患者血清HBV DNA含量高,与薄白苔组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).薄白苔组HBV DNA病毒复制以少量(＜105 copies/ml)为主(P＜0.01).②黄腻苔和白厚苔组CHB患者肝组织HBcAg阳性细胞率明显高于薄黄苔和薄白苔组(P＜0.01),其肝细胞HBcAg分布形态以浆膜型和混合型为主(P＜0.05);薄白苔组以单纯核型为主(P＜0.01).结论:CHB患者其舌苔厚薄与病毒载量有一定关系,血清HBV DNA含量高者,肝脏HBcAg阳性细胞率亦较高.
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HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并原发性肝细胞癌患者HBcAg、HBV-DNA与AFP的关系
目的 探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并原发性肝细胞癌(HCC)患者HBcAg、HBV-DNA与甲胎蛋白(AFP)的关系.方法 采用免疫组化方法检测50例HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并HCC患者癌旁肝组织中HBcAg的表达;分别采用荧光定量PCR法、电化学发光方法检测血清HBV-DNA含量和AFP含量.分析肝组织HBcAg表达模式及血清HBV-DNA含量与AFP含量的关系.结果 50例患者中,癌旁肝组织HBcAg阳性30例,阴性20例,两者血清AFP含量比较,差异无统计学意义(P＞0.05);血清HBV-DNA阳性组32例和阴性组18例的血清AFP含量无显著差异(P＞0.05).结论 HBeAg阴性慢乙肝合并HCC患者HBcAg、HBV-DNA的水平与AFP水平无明显关系.
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阿糖腺苷治疗慢性乙型肝炎患者肝组织中乙型肝炎表面抗原与乙型肝炎核心抗原表达情况
旨在研究阿糖腺苷是否可以有效促使慢性乙型肝炎患者肝组织中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)阴转,现报道如下.
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HBsAg、HBcAg在慢性乙型肝炎肝细胞内的表达及临床意义
目的探讨HBsAg、HBcAg在慢性乙型肝炎(CHB)患者肝细胞内的表达,及其与血浆HBVDNA定量、肝组织病理和临床间的关系.方法采用PCR检测351例CHB患者血浆HBV DNA定量,肝穿刺活检,采用免疫组织化学技术观察肝细胞内HBsAg、HBcAg的表达.结果在CHB患者肝细胞内HBsAg和HBcAg阳性表达率分别为92.3%和76.9%.HBcAg浆膜型(75.6%)和胞核型(24.4%)分别见于肝组织炎症较活跃和较静止期CHB.HBsAg表达强度与血浆HBV DNA定量呈较低正向关联(rp=0.24,P=0.0129)、与肝组织炎症和纤维化呈较低负向关联(rp=-0.22,P=0.0279和rp=-0.23,P=0.0186).HBcAg的表达强度随着血浆HBV DNA定量的增加而增加,呈较强正向关联(rp=0.5 2,P＜0.0001),随着肝组织炎症和纤维化程度的加重而减弱,呈较强的负向关联(rp=-0.33,P＜0.0001和rp=-0.34,P＜0.0001).结论在CHB肝组织免疫损伤的免疫应答中,HBcAg是靶抗原,HBsAg不一定是靶抗原.HBsAg是筛查HBV感染的较敏感指标,HBcAg是评价HBV复制程度的较可靠指标.
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β-淀粉样肽与乙型肝炎核心抗原融合基因Aβ-HBcAg表达载体的构建
目的构建β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)与乙肝核心抗原(HBcAg)融合基因Aβ-HBcAg的原核表达载体pBV220/Aβ-HBcAg,为阿尔茨海默病基因工程疫苗的研究和制备奠定基础.方法采用非对称互补引物/模板法,制备两端含有酶切位点的Aβ1-42肽的cDNA,将其连接到删除了Pre-C区的HBcAg亚型ayw基因的N端组成融合基因Aβ-HBcAg,再将该融合基因亚克隆于载体pBV220,构建为原核表达载体pBV220/Aβ-HBcAg.结果经DNA测序,限制性内切酶酶切等方法证实已成功地将Aβ1-42cDNA重组到HBV core的N端,并将融合基因亚克隆于pBV220内.结论成功构建了原核表达载体pBV220/Aβ-HBcAg.
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SP法检测死胎肾脏组织中HBcAg表达的初步探讨
目的:观察乙型肝炎病毒通过产妇传播在胎儿肾脏组织中表达的情况.方法:采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取肾脏组织,SP法检测HBcAg;回访婴母产前静脉血HBV的检测结果;取百分率行u检验.结果:HBcAg阳性颗粒在死胎的肾实质细胞(近、远曲小管上皮细胞和肾血管球毛细血管内皮细胞,球内、外系膜细胞,球旁细胞,足细胞)浆,肾脏血管中呈点、灶状分布,肾实质细胞核不着色.HBVM呈单项阳性、(HBsAg+,HBeAb+,HBcAb+)、(HBsAg+,HBeAg+,HBcAb+)的婴母分娩的死胎肾脏组织中HBcAg阳性率比较,差异不显著(P＞0.05).结论:死胎肾脏组织中HBcAg阳性率与孕妇静脉中HBV标志无关;肾脏组织中可能存在HBV复制.
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248例慢性乙型肝炎病毒感染者免疫清除期演变规律的研究
目的 阐明慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染自然病程中免疫清除期不同阶段血清学及肝脏病理的演变规律.方法 将处于免疫清除期的慢性乙型肝炎(CHB)患者,按照其肝组织纤维化分期由轻到重(S0、S1、S2、S3～S4)将免疫清除期划分为初、早、中、后4个阶段,统计不同阶段患者年龄、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV DNA定量、肝组织炎症分级及肝组织乙型肝炎核心抗原(HBcAg)分布的关系.结果 符合免疫清除期纳入标准患者248例,男性187例,女性61例,平均年龄(31.7±7.5)岁.处于初、早、中、后4个阶段的患者分别为15例、141例、54例、38例,相应年龄分别为(27.40±4.87)岁、(30.74±6.12)岁、(32.85±9.40)岁、(35.45±8.38)岁,ALT分别为(64.73±38.81) U/L、(103.06±82.54) U/L、(165.83±263.73) U/L、(146.34±168.23) U/L,血清HBV DNA载量分别为(7.36±1.30)lg IU/ml、(7.26±0.92) lg IU/ml、(6.92±1.08) lg IU/ml、(6.47±1.10) lg IU/ml.不同阶段患者年龄、ALT、HBV DNA载量、肝组织炎症分级及HBcAg分布差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 免疫清除期是肝组织炎症逐渐活跃,HBV DNA载量持续下降的演变过程.随着不同阶段的进展,肝组织HBcAg分布进展到以浆型为主.
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91例非活动性HBsAg携带者肝组织病理特点的研究
目的 探讨《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》[《指南(2010年版)》]非活动性HBsAg携带者的肝组织病理特点.方法 以《指南(2010年版)》描述的非活动性HBsAg携带者的血清学特征作为纳入标准,回顾性研究2000年1月～2010年11月广东医学院附属深圳市第三人民医院91例患者的临床病理资料,统计和分析非活动性HBsAg携带者肝组织炎症、纤维化程度及免疫组化HBcAg特点.结果 91例患者中,男性79例(86.8％),女性12例(13.2％).年龄(36.0±8.7)岁(21～63岁),≤30岁29例(31.9％),30～40岁36例(39.5％),≥40岁26例(28.6％).肝组织炎症G0者18例(19.8％),G1 70例(76.9％),G2 3例(3.3％),G3～4的0例.肝组织纤维化程度S0者5例(5.5％),S1 30例(33.0％),S2 25例(27.5％),S3 19例(20.9％),S4 12例(13.1％).肝组织免疫组化HBcAg阳性者7例(7.7％),其中混合型1例(1.1％),浆型6例(6.6％)；HBcAg阴性者84例(92.3％).不同性别、年龄组间肝组织炎症、纤维化程度及HBcAg表达差异无统计学意义.结论 《指南(2010年版)》血清学诊断为非活动性HBsAg携带者的患者,大部分肝组织炎症较轻微(96.7％的患者＜G2),而肝纤维化较明显(61.5％的患者≥S2),个别患者仍存在活跃的组织炎症(3.3％的患者≥G2)及HBcAg阳性表达(7.7％).本研究提示,肝脏活检对于了解非活动性HBsAg携带者是必需和重要的手段.
关键词： 非活动性HBsAg携带者 肝脏病理 乙型肝炎核心抗原
