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池塘养殖水与水产品中孔雀石绿残留的相关性分析
本文进行了含有孔雀石绿的水体对以色列鲤污染情况的模拟实验。由实验可知，有色孔雀石绿进入水体后，23.2%～24.3%保留在水体中并随时间逐步下降，部分被鱼体吸收，其他大部分被沉积物吸收。沉积物中的孔雀石绿也会少量释放到水体中，从而对养殖鱼类产生二次污染。以色列鲤肌肉在实验前15 d中,无色孔雀石绿残留浓度缓慢升高，在15 d以后,无色孔雀石绿浓度逐渐下降,30～42 d基本稳定在1.0μg/kg左右。孔雀石绿在整个实验过程中逐渐下降,15～42 d基本稳定在0.5μg/kg左右。
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免疫分析法检测无色孔雀石绿研究Ⅰ人工抗原的合成
目的 用免疫分析法检测水产品中无色孔雀石绿残留,研究无色孔雀石绿人工抗原的制备及其鉴定.方法 用混酸法对无色孔雀石绿进行衍生化,连接上氨基基团,再经重氮化法与载体蛋白相结合,制备人工抗原.结果 对无色孔雀石绿中间合成产物的液质联用分析结果表明,氨基产物中,无色孔雀石绿占51.83%,单氨基加成的无色孔雀石绿产物占40.48%,二氨基加成的无色孔雀石绿产物占7.69%.采用紫外法和Bradford法测定,人工抗原中无色孔雀石绿与载体蛋白的结合比为18:1～23:1.结论 合成的人工抗原属于高质量的人工抗原.
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水产品中无色孔雀石绿的悬液芯片检测方法研究
目的 建立水产品中无色孔雀石绿(LMG)的悬液芯片检测法.方法 向聚苯乙烯微球中加入14μg/100μl的LMG抗原,利用碳二亚胺法使抗原与微球偶联构成捕获抗原.加入含LMG的样品,使用1∶800倍稀释的LMG单克隆抗体及藻红蛋白标记的二抗,37℃孵育1h后在悬液芯片仪上检测平均荧光强度值并计算样品中LMG的含量.结果 在10～100ng/ml的线性范围内,所得体系的回归方程为△F=2 035.6c+22.4,r=0.999 8.方法的检出限为0.125 ng/ml,加标回收率在88.7％～93.6％之间,RSD为3.2％～7.6％.结论 该方法的灵敏度高,特异性好,可作为一种高通量检测的新技术用于水产品中无色孔雀石绿残留的分析.
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液相色谱法测定鲑鱼中孔雀绿和无色孔雀绿(通过原位氧化作用)残留量
利用液相色谱(LC)法测定鲑鱼中孔雀石绿(MG)和无色孔雀石绿(LMG)残留量.1仪器设备液相色谱仪Agilent 1100系列液相色谱仪,程序二极管阵列检测器(DAD,Agilent Technologies公司,Palo Alto,CA).
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液相色谱串联质谱法测定水产品中的孔雀石绿和无色孔雀石绿
利用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)方法测定水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留.
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无色孔雀石绿人工抗原的制备及免疫原性鉴定
目的 用免疫分析法检测水产品中无色孔雀石绿(LMG)的残留,研究LMG人工抗原及其多克隆抗体的制备和鉴定.方法 通过混酸硝化还原法对LMG进行改造,获得氨基无色孔雀石绿(NH2-LMG),然后采用改良的碳二亚胺法制备LMG完全抗原.用该人工抗原免疫动物,获得多抗血清.采用酶联免疫法测定抗体效价.选择与LMG结构相似的5种药物进行交叉反应,计算交叉反应率.结果 经紫外光谱及电泳法检测,LMG与载体蛋白偶联成功,偶联比为1∶17.利用该抗原免疫小鼠后获得了效价高于104的抗LMG抗体,交叉反应结果表明该抗体有较好的特异性.结论 成功合成了LMG人工抗原,为进一步制备LMG单克隆抗体及研究LMG的新型、快速检测方法奠定了基础.
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水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测
无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式,已被确证具有高毒性、高残留及"三致"等毒副作用,主要污染水产品,世界各国均立法禁止使用并进行强制检测[1-2].
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高效液相色谱法测定鱼类产品中孔雀石绿及无色孔雀石绿的残留
目的:研究鱼类产品中孔雀石绿及其代谢产物无色孔雀石绿残留量的高效液相色谱检测方法.方法:采用In-ertsil ODS-3(4.6mm×250 mm,5 μm)色谱柱、氧化铅柱和二极管阵列检测器,以乙腈+乙酸铵溶液(0.125 mol/L,pH=4.5)=80+20为流动相进行分离分析.结果:孔雀石绿和无色孔雀石绿的回收率分别为83%、85%;相对标准偏差分别为5.93%、4.15%.结论:该方法可用于鱼类产品中孔雀石绿及无色孔雀石绿残留量的检测.
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抗无色孔雀石绿抗体的制备及鉴定
目的:本文利用本实验室合成的人工抗原制备抗无色孔雀石绿抗体,其中包含多克隆抗体和单克隆抗体两种形式,并进行相关鉴定,为建立免疫分析法检测无色孔雀石绿打下基础.方法:以无色孔雀石绿-卵清蛋白偶联物为免疫原免疫新西兰大白兔,经1次基础免疫和4次加强免疫,收集抗血清,采用饱和硫酸铵法进行纯化,获得了抗无色孔雀石绿多克隆抗体.矧时免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,通过细胞融合,杂交瘤筛选,克隆和扩大培养,成功筛选出一株稳定分泌特异性抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果:间接ELISA法检测抗无色孔雀石绿多克隆抗体效价达1:2×10-5.获得的抗无色孔雀石绿单克隆抗体效价为32,0000,亲和常数为3.25×108L/mol,亚类类型为IgG2. 间接竞争ELISA结果显示,抗无色孔雀石绿单克隆抗体的半数抑制浓度IC50为23.9μg/L,低检出限为1.1μg/L.交叉反应结果表明,单克隆抗体的特异性较好,与孔雀石绿的交叉反应率为24.33%,与其他结构类似物基本无交叉.结论:本文制备的抗体可用于建立无色孔雀石绿的免疫分析方法,经过进一步技术开发,可以形成试纸条、酶免试剂盒和生物传感器等产品,具有广阔的应用前景.
