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吡硫醇在低氧与常氧环境下大鼠体内的药代动力学研究
目的 研究比较吡硫醇在低氧和常氧状态大鼠体内的药代动力学特征.方法 将SD大鼠采用数字表法随机分为低氧组与常氧组,低氧动物预处理后进行吡硫醇单次灌胃给药的药代动力学研究.采用本课题组建立的快速灵敏的超高效液相质谱联用测定不同时间的血药浓度,用DAS2.0软件计算药动学参数,并用SPSS13.0软件进行统计学分析.结果 吡硫醇在常氧和低氧大鼠体内的主要药动学参数分别为:AUC(0-t)(88.26±9.86)ng·h·mL-1和(80.67±8.95)ng·h·mL-1;MRT(0-t)(4.14±0.32)h和(3.67±0.26)h;t1/2 (3.72±1.82)h和(3.14±1.42)h;tmax(0.58±0.20)h和(0.67±0.26)h;Cmax(30.12±2.36)ng/mL和(20.05±1.31)ng/mL.与常氧状态大鼠的药动学参数相比,低氧状态下吡硫醇在大鼠体内的Cmax和MRT(0-t)有显著性降低,而其他主要药动学参数差异均无统计学意义.结论 低氧影响药物在大鼠体内达峰浓度,进而可影响药物的稳态血药浓度、治疗效果和毒性反应.
关键词： 吡硫醇 药代动力学 低氧 常氧 超高效液相色谱-质谱联用法 -
羟基红花黄色素A对常氧/低氧犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响
目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对常氧/低氧两种条件下体外培养的犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响.方法 采用内膜消化刮取法获取犬胸主动脉内皮细胞;在常氧(21%)/低氧(10%)两种条件下,分别以噻唑蓝(MTT)法观察HSYA对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响,血管内皮生长因子(VEGF)作为阳性对照.结果 常氧条件下HYSA 1、0.1 mmol/L在72、96、120 h时对VEC有明显促增殖作用;低氧条件下HYSA 1、0.1、0.01mmol/L在24、48 h时对VEC有明显促增殖作用,且具有浓度和时间依赖性.HYSA 1 mmol/L与VEGF 2.6×10-7mol/L在同样条件下对VEC的促增殖作用强度相当.结论 在常氧/低氧两种条件下,HSYA均具有明显促VEC增殖作用,且在低氧条件更为明显.
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常氧及低氧条件下胶质源性神经营养因子体外诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化
背景:神经干细胞的定向诱导分化和扩增受细胞自身基因和外来信号的调控.目的:观察中脑源性神经干细胞在常氧、低氧和胶质源性神经营养因子诱导下向多巴胺能神经元的分化情况.方法:无菌条件下分离E12小鼠胚胎腹侧中脑组织,胰酶消化和机械吹打制成单细胞悬液,在无血清培养基中培养扩增;Nestin免疫细胞化学染色方法鉴定神经干细胞.在有血清培养基中对纯化神经干细胞自然分化;神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色方法分别鉴定神经元和星形胶质细胞.建立常氧和低氧环境,设置常氧组、常氧+胶质源性神经营养因子组、低氧组、低氧+胶质源性神经营养因子组,按实验分组在有血清条件下诱导分化.结果与结论:在低氧条件下,中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化均高于常氧组;尤其是低氧环境和胶质源性神经营养因子诱导下向多巴胺能神经元分化比例更高,表型更成熟.说明低氧环境下胶质源性神经营养因子可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元.
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低氧时脂肪间充质干细胞如何向跟腱细胞分化
背景：脂肪间充质干细胞在跟腱组织工程再生领域越来越受到重视，研究其诱导分化的有利环境(氧体积分数)尤为必要。
目的：将脂肪间充质干细胞与跟腱细胞在不同氧体积分数条件下间接共培养，比较氧体积分数对脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化能力的影响。
方法：无菌条件下获取SD大鼠跟腱细胞。SD大鼠脂肪间充质干细胞直接购买，经培养传至第1代后，与跟腱细胞一起在常氧(体积分数20%)和低氧(体积分数2%)条件下经Transwel 间接共培养体系共培养。在培养7，14和21 d ，实时荧光定量 PCR 检测跟腱细胞的特异指标胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ， Tenomodulin ， Thrombospondin-4，Scleraxis 基因相对表达量，免疫荧光染色法检测胶原蛋白Ⅰ和Thrombospondin-4蛋白表达量。
结果与结论：脂肪间充质干细胞与跟腱细胞经间接共培养后，低氧组检测到的跟腱细胞的相关特异指标在基因和蛋白水平上表达水平均高于常氧组。提示氧体积分数可显著影响脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的潜能，低氧是脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的有利条件之一。 -
膜修饰脂质体的制备及对心肌细胞的靶向作用
目的制备3-{4-[2-羟基-(1-甲基乙胺基)丙氧基]辛基}丙酸十六醇酯(PAC)膜修饰脂质体,并对其体外心肌细胞靶向性进行研究.方法合成β1-受体配体亲脂性化合物(PAC)并制备PAC膜修饰的脂质体(PAC-L);将荧光标记的脂质体加入体外培养的心肌细胞中,分别在常氧及缺氧条件下共同培养一定时间后,用荧光分光光度计测定心肌细胞摄取荧光脂质体的量.结果体外心肌靶向性研究表明PAC-L与心肌细胞有较强的亲和力,在常氧状态下心肌细胞对PAC-L的摄取较Plain-L高约3.2倍,而在缺氧状态下心肌细胞对PAC-L的摄取较Plain-L高达5.1倍.结论可初步判断PAC膜修饰脂质体具有较强的缺血心肌靶向性.
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低氧与常氧状态下罗红霉素在大鼠体内的药代动力学比较
目的：研究比较在低氧和常氧条件下，常用抗生素罗红霉素在大鼠体内的药代动力学特征。方法建立快速高效的超高效液相质谱联用法，测定大鼠血浆中罗红霉素的浓度。 SD大鼠灌胃给予罗红霉素(10 mg·kg-1)，测定不同时间点的大鼠血浆药物浓度，分别计算低氧与常氧大鼠的主要药代动力学参数，并进行统计分析。结果在1~1000μg ·L-1浓度间，罗红霉素在血浆中有良好的线性关系，定量下限为1μg·L-1。罗红霉素在常氧和低氧大鼠体内主要药动学参数分别为：AUC(0-t)7576μg·h· L-1和3761μg· h·L-1；MRT(0-t)5．6 h和7．7 h；T1/23．4 h和3．9 h；tmax 3．1 h和3．4 h； Cmax 1116μg·L-1和372μg·L-1；CL 1．5和3．0 L·h-1·kg-2。与常氧大鼠药动学参数比较，低氧状态下罗红霉素在大鼠体内的药动学参数Cmax和AUC均有明显降低。结论低氧条件下，罗红霉素在大鼠体内的体内暴露量明显降低，结果为罗红霉素在低氧状态下的给药方案优化和调整提供了重要的实验依据。
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常氧下高低浓度葡萄糖培养对不同密度肝癌HepG2细胞HIF-1α、HIF-2α表达的影响
目的 观察常氧下高低浓度葡萄糖对不同浓度肝癌HepG2细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1a)、HIF-2α表达的影响.方法 将HepG2细胞分成高中低三个细胞密度组,常氧下分别在高糖和低糖DMEM中培养16 h,采用免疫细胞化学法检测各组HepG2细胞中的HIF-1α和HIF-2α.结果 常氧下高糖培养,高、中、低密度组HepG2细胞中HIF-1α的光密度值分别为0.270±0.014、0.318±0.015、0.052±0.012,常氧下低糖培养分别为0.300±0.012、0.242±0.015、0.205 +0.018.三组间比较,P均＜0.05.常氧下高糖培养,高、中、低密度组HepG2细胞中HIF-2α的光密度值分别为0.076±0.013、0.175±0.011、0.310±0.014,常氧下低糖培养分别为0.120±0.017、0.187±0.014、0.347±0.015.三组间比较,P均＜0.05.结论 常氧下低糖培养能诱导HepG2细胞中的HIF-1α、HIF-2α高表达；HIF-1α在适中的细胞密度下表达强,HIF-2α的表达随着细胞密度的增加而降低.
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常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞VEGF表达的影响
目的探讨常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 将肝癌Hep1细胞用不同浓度的姜黄素(终浓度分别为0,5,10,15,20 μmol/L)处理,置于常氧环境中培养24h.RT - PCR检测Hep1细胞中VEGF mRNA表达水平的变化,Western - blot检测Hep1细胞VEGF蛋白表达的变化.结果 姜黄素10,15,20 μmol/L组VEGF mRNA的表达与空白对照组相比均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,且呈浓度依赖性.姜黄素0,5μmol/L组VEGFmRNA的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05)；姜黄素5,10,15,20 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组相比均明显升高(P＜0.01),且呈浓度依赖性.姜黄素0 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性方式上调肝癌Hep1细胞VEGF的表达.
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常氧下低氧诱导因子1α在传代培养LoVo细胞中的表达
[目的]探讨常氧下低氧诱导因子1α(HIF-1α)在传代培养LoVo细胞中的表达.[方法]在常氧下传代培养LoVo细胞.MTT法检测细胞增殖,绘制生长曲线,Western blot检测传代后不同时间点HIF-1α蛋白表达.[结果]细胞生长曲线示LoVo细胞在传代后24 h逐渐增加,72 h后迅速增加.Western blot示HIF-1α蛋白表达在传代后24 h高,随时间延长,表达量逐渐降低.[结论]常氧下HIF-1α在LoVo细胞中可低水平表达,传代可引起HIF-1α表达增高,HIF-1α在促进细胞损伤的修复和细胞增殖中起重要作用.
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外源性PGC-1α对人视网膜血管内皮细胞VEGF表达的影响
目的：：探讨外源性过氧化物酶增殖激活受体-y共激活子-1α( peroxisome-proliferator-activated receptor-y coactivator-1α, PGC-1α)对人视网膜血管内皮细胞( human retinal vascular endothelial cell, HRVEC )中血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法：HRVEC加入重组PGC-1α蛋白,未加入重组蛋白的细胞作为对照组。加入重组蛋白24 h后,将两组细胞分别置于常氧(20% O2)和低氧(1% O2)环境下继续培养16h,采用real-time PCR、酶联免疫吸附试验( ELISA)及免疫荧光细胞化学法分别检测VEGF mRNA和蛋白的表达变化。结果：real-time PCR,ELISA和免疫荧光细胞化学法检测发现,常氧和低氧环境下HRVEC加入重组PGC-1α蛋白后,VEGF mRNA和蛋白的表达均较对照组上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论：PGC-1α在常氧和低氧环境中均能上调HRVEC中VEGF的表达。
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常氧及缺氧培养对成骨细胞hFOB1.19增殖的影响
目的 了解不同氧条件培养对成骨细胞增殖、凋亡的影响.方法 将成骨细胞hfob1.19分别置于常氧条件(培养箱内含20％O2),缺氧条件(培养箱内含1％O2)培养120 h,并分别在24、48、72、96、120 h通过MTT检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,检测细胞内ROS.结果 常氧培养72 h之前成骨细胞活性遂渐增加,增殖明显,72 h之后细胞增长趋于平缓.缺氧初期细胞活性有所降低,但降低趋势较平缓,72 h之后细胞活性急剧下降;常氧条件下成骨细胞凋亡不明显,缺氧条件下,随培养时间延长,凋亡细胞多,凋亡比例快速增加;常氧条件下细胞内活性氧水平较低,各个时间段活性氧水平差异不大(P<0.05).缺氧条件下细胞内活性氧水平高,随着缺氧时间增长,活性氧水平快速升高(P<0.05).结论 实验表明长时间的缺氧导致成骨生长活性降低,细胞凋亡增加,伴随着大量的ROS产生,氧化应激在细胞凋亡过程中起了重要作用.
