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膜联蛋白A3在前列腺癌早期诊断中的价值
目的：研究膜联蛋白A3(Annexin A3)在前列腺癌患者尿液中的表达，探讨其在前列腺癌早期诊断中的价值。方法59例可疑前列腺癌(总前列腺特异性抗原、直肠指诊异常)的住院患者，采集前列腺按摩后的初始尿液标本，使用聚合酶链式反应(PCR)检测尿沉渣中Annexin A3的表达，结合穿刺病理结果分析不同尿Annexin A3浓度诊断早期前列腺癌的敏感性和特异性。结果前列腺穿刺活检病理结果为前列腺癌19例，前列腺增生40例。结论检测尿液Annexin A3对于早期前列腺癌的诊断具有较高价值。
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膜联蛋白A3与恶性肿瘤演进的关系
膜联蛋白A3(ANXA3)属于膜联蛋白超家族且是非常重要的一员.过去的研究已证实,AN XA3参与了包括细胞增殖、分化与凋亡、细胞信号转导和胞吞胞吐等一系列重要生理过程.近年来研究显示,ANXA3异常表达可能与多种恶性肿瘤的演进或侵袭转移有密切关系:ANXA3的高表达可能会促进乳腺癌、肺腺癌和胆囊癌等的浸润转移;而ANXA3的低表达则可能会促进乳头状甲状腺癌和前列腺癌等的转移;另外,ANXA3可能通过促进结肠癌组织内的血管生成促使肿瘤细胞的转移.这些发现显示,抑制或促进ANXA3表达可能会为这几种恶性肿瘤的治疗提供一个新的方向.
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膜联蛋白A3与肿瘤性疾病新研究进展
膜联蛋白A3(ANXA3)是膜联蛋白超家族的一员,已有研究结果表明,ANXA3与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及治疗预后有密切关系.ANXA3在前列腺及肾癌中表达下调,但在乳腺癌、肝癌等多种肿瘤中表达上调,且与肿瘤大小、分期、淋巴转移及预后、耐药具有相关性.沉默ANXA3的表达可抑制结、直肠癌及肝癌细胞的增殖和侵袭,抑制乳腺癌细胞的迁移.ANXA3还可能通过HIF1a/Notch及JNK信号通路参与调节和维持肝细胞癌干细胞.现有研究表明ANXA3可作为潜在的肿瘤诊断、预测化疗敏感性及预后的生物学标记物,并提供肿瘤治疗的新靶点.
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应用 RNA 干扰技术下调 ANXA3表达的 MDA-MB-231乳腺癌细胞株的建立
目的：建立针对膜联蛋白A3（Annexin A3， ANXA3）的shRNA稳定转染的乳腺癌细胞株MDA-MB-231，为后续进一步研究奠定基础。方法荧光定量RT-PCR及western blot方法检测两种乳腺癌细胞株（ MDA-MB-231及MCF-7）中ANXA3 mRNA及蛋白表达水平。构建沉默ANXA3基因的shRNA质粒3个（ ANXA3-sh1-3）及阴性对照质粒，脂质体法转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231；选出ANXA3沉默效果好的干扰质粒做后续实验。嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞；Western blot 方法检测转染后细胞中ANXA3蛋白表达水平。结果 MDA-MB-231细胞中 ANXA3 mRNA及蛋白表达水平显著高于MCF-7中的表达（ P ＜0 k．05）；成功构建3个针对ANXA3基因的shRNA质粒；转染ANXA3-sh1～3及阴性对照质粒后MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平分别为（0．0196±0．0002）、（0．0085±0．0002）、（0．0220±0．0035）、（0．0661±0．0057），未转染的MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0692±0．0050），脂质体组MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0652±0．0118），ANXA3-sh2对MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA沉默效率高，达87．72％，因此后续实验选择ANXA3-sh2；嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞分别命名为MDA-MB-231-Sh及MDA-MB-231-NC细胞。 Western blot检测结果显示，MDA-MB-231-Sh细胞中ANXA3蛋白显著低于MDA-MB-231及MDA-MB-231-NC细胞中的表达（ P ＜0．01）。结论 MDA-MB-231细胞较MCF-7细胞高表达ANXA3，成功的建立了稳定下调ANXA3表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-231，为后续进一步研究ANXA3的表达及特性打下基础。
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卵巢癌相关蛋白表达与铂类耐药的相关性研究
目的 探讨人附睾蛋白(HE4)、膜联蛋白A3(Annexin A3)、间皮素(Mesothelin)在上皮性卵巢癌(EOC)血清与组织中的表达及其对卵巢癌铂类耐药的影响.方法 选取201 1年9月-2014年3月该院妇科收治的78例EOC为研究对象.按铂类药物疗效分为铂类敏感组(62例),及铂类耐药组(16例).ELISA法检测78例EOC患者血清HE4、Annexin A3、Mesothelin及CA125水平,免疫组化法检测组织中HE4、Annexin A3和Mesothelin蛋白的表达,分析HE4、Annexin A3和Me-sothelin与卵巢癌铂类耐药的相关性.结果 78例患者中两组间血清H-E4、Annexin A3、Mesothelin、CA125浓度差异均有统计学意义(p＜0.05);血清HE4、Annexin A3和CA125阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.05),血清中4种蛋白的阳性表达两两比较均呈正相关(P＜0.05),HE4、Annexin A3、Mesothelin在EOC组织中的阳性表达率差异均有统计学意义(P＜0.05),78例组织中HE4、Annexin A3、Mesothelin阳性表达两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);HE4、Annexin A3、Mesothelin在血清和组织中的阳性表达均呈正相关(P＜0.05).结论 HE4、Annexin A3和Mesothelin参与了卵巢癌发生发展,并与铂类耐药密切相关;联合检测其在血清和组织中的表达有助了解卵巢癌铂类耐药的可能机制,预测化疗敏感性,并可为铂类耐药性卵巢癌的治疗提供靶点.
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人膜联蛋白A3的原核表达及纯化
目的 原核表达人膜联蛋白(annexin,ANX)A3(ANX A3),并进行纯化.方法 提取人胎盘样品总RNA,反转录建立cDNA文库,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增anx A3基因编码区全长,连接至克隆载体pEASY-Blunt上,测序鉴定.用primix extaq酶重新扩增anx A3基因,与表达载体pEASY-E1连接,构建重组表达质粒pEASY-anx A3,转化E.coli Transetta DE3,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经6×His纯化介质及Bio-Rad BioLogic DuoFlowChromatography Systems纯化后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 重组表达质粒经菌落PCR鉴定,阳性克隆可扩增出972 bp的目的片段,与NCBI中GenBank上报道的anx A3序列完全一致.纯化的重组蛋白相对分子质量约为36 000,可与鼠Anti 6×His-Tag单克隆抗体特异性结合,浓度为400 μg/ml.结论 成功构建了重组原核表达质粒pEASY-anxA3,并在E.coli Transetta DE3中表达了重组蛋白,为进一步研究ANX A3在哮喘病的起因和形成中的作用及机制奠定了基础.
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ANXA3在结直肠癌细胞株中的表达
目的:探讨膜联蛋白a3(ANXA3)在结直肠癌HT-29细胞株和HT-29奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株中的表达.方法:采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐L-OHP的耐药细胞株HT-29/L-OHP; CCK-8测定L-OHP对HT-29/L-OHP和HT-29细胞株的半数抑制率(IC50);RT-PCR分别检测HT-29细胞和HT-29/L-OHP耐药细胞中ANXA3 RNA的表达水平;蛋白质印迹法检测ANXA3在HT-29细胞和HT-29/L-OHP细胞中的表达差异.结果:(1)成功建立了耐药细胞株HT-29/L-OHP,其耐药指数为3.72;(2) HT-29/L-OHP细胞株的ANXA3 mRNA表达水平(0.897±0.260)高于HT-29细胞株(0.513±0.203)(P＜0.05);(3)耐药细胞株HT-29/L-OHP的ANXA3蛋白表达水平高于亲本细胞株HT-29.结论:ANXA3在耐药细胞株中RNA基因水平和蛋白水平表达显著高于亲本细胞株HT-29.
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Annexin3 A3与锌指蛋白217在卵巢癌组织表达与铂类药物耐药的关系
目的 探讨膜联蛋白A3(Annexin A3)、锌指蛋白217(ZNF217)与卵巢癌铂类化疗耐药的关系.方法 选择2013年5月至2015年9月我院收集的卵巢癌患者的新鲜手术标本64例,选择同期30例卵巢良性肿瘤和32例正常卵巢组织作为对照.测定卵巢癌组织铂类敏感性,并采用免疫组织化学方法检测标本中Annexin A3和ZNF217蛋白.比较不同组织、不同铂类药物敏感性组织中Annexin A3和ZNF217蛋白的表达情况.结果 64例卵巢癌组织标本中,高度敏感21例、部分敏感28例、耐药15例.卵巢癌组织中Annexin A3和ZNF217蛋白与卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织中ZNF217蛋白表达情况相比,低表达和高表达病例数均显著增加(P<0.05).耐药卵巢癌组织Annexin A3蛋白高表达比例显著高于部分敏感和高度敏感的卵巢癌组织(P<0.05),耐药卵巢癌组织ZNF217蛋白高表达比例显著高于高度敏感的卵巢癌组织(P<0.05),与部分敏感卵巢癌组织差异不显著(P>0.05).结论 Annexin A3和ZNF217基因的上调表达与卵巢癌细胞铂类耐药性增强有关,对于铂类药物治疗卵巢癌有临床指导意义.
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膜联蛋白A3在骨肉瘤细胞株HOS中的表达及意义
目的 探讨膜联蛋白A3(ANXA3)在骨肉瘤细胞株HOS中的表达及意义.方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测ANXA3在成骨细胞及骨肉瘤细胞株HOS和U2OS细胞中的表达水平,通过脂质体介导的方法将小干扰RNA(siRNA)转染到HOS中下调HOS中ANXA3表达,流式细胞术检测转染前后细胞的凋亡.结果 与成骨细胞对照组比较,ANXA3在细胞株HOS及U2OS中RNA和蛋白表达水平均显著升高;其中在RNA水平上,分别升高2.99倍和1.25倍;在蛋白水平上,分别升高3.25倍和2.33倍.siRNA下调ANXA3表达48 h后Western blot检测转染效率,与对照组比较si-651组下调为0.26倍,si-732组下调为0.31倍,si-1094组下调为0.31倍,阳性对照组下调为0.37倍,阴性对照组下调为0.87倍.对照组凋亡率为8.1％,si-651组凋亡率为21.5％,比较对照组增加15.2％;si-732组凋亡率为13.3％,比较对照组增加7.5％;si-1094组凋亡率为13.4％,比较对照组增加6.7％.结论 ANXA3在骨肉瘤细胞株中的表达提高,下调HOS细胞中ANXA3的表达可使其凋亡能力增加.
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胆囊良恶性组织中蛋白质组差异表达及膜联蛋白A3的功能
目的 分离并鉴定胆囊癌和胆囊良性组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断胆囊癌的肿瘤标志物.观察RNA干扰沉默膜联蛋白A3(AnnexinA3)基因对胆囊癌细胞增殖及周期的影响.方法 提取人胆囊癌和胆囊良性组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱和生物学分析.miRNA干扰胆囊癌细胞株中AnnexinA3的表达后,通过噻唑蓝(MTT)实验及流式细胞仪观察癌细胞增殖能力及细胞周期的变化.结果 筛选出在胆囊癌组织中明显差异表达的46个蛋白点,共有17个蛋白质被成功鉴定,其中在胆囊癌组织中高表达的为9个,低表达的为8个,包括AnnexinA3、TTR蛋白等.RNA干扰胆囊癌细胞株AnnexinA3蛋白的表达后,MTT显示干扰后细胞增殖明显下降效率为44.14%(P<0.05).流式细胞仪观察显示干扰后G1期增加(P<0.05),S期减少(P<0.05).结论 胆囊癌组织相对于胆囊良性组织蛋白存在明显差异.干扰AnnexinA3蛋白的表达可以改善胆囊癌细胞的某些恶性生物学行为.
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膜联蛋白A3与肿瘤相关性研究进展
膜联蛋白A3(annexin A3,Anxa3)在肿瘤的发生、发展、转移及抗药性等过程中发挥着重要的作用.近年来研究表明,Anxa3的异常表达与卵巢癌、肺腺癌、前列腺癌、肝癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌有密切关系；Anxa3 异常表达有望成为肿瘤的发生、浸润、转移及病人预后的重要标志物.
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外周血与肿瘤组织膜联蛋白A3表达对卵巢上皮癌铂类耐药的预测价值
目的 比较外周血与肿瘤组织膜联蛋白A3( Annexin A3)表达对卵巢上皮癌铂类耐药的预测价值.方法 选择2010年2月至2012年2月该院术后行以铂类为基础化疗,且完成随访的72例初治卵巢上皮癌患者,按照铂类耐药评价标准分为铂类化疗敏感组54例和铂类化疗耐药组18例,采用化学发光免疫分析法检测外周血Annexin A3水平;采用免疫组织化学染色检测肿瘤组织Annexin A3水平;通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血与肿瘤组织Annexin A3对铂类耐药的预测价值.结果铂类敏感组外周血Annexin A3水平显著低于铂类耐药组,差异有统计学意义(P<0.05),铂类敏感组肿瘤组织An nexin A3表达阳性率显著低于铂类耐药组(P<0.05).外周血Annexin A3低浓度组中位生存期(31.2个月)显著高于高浓度组(23.1个月),差异有统计学意义(P<0.05);组织Annexin A3低表达组中位生存期(35.2个月)显著高于高表达组(20.4个月),差异有统计学意义(P<0.05).多因素分析显示,血清与肿瘤组织Annexin A3表达水平是影响铂类耐药的独立危险因素(均P<0.05).外周血Annexin A3预测铂类耐药的ROC曲线下面积(AUC)为0.821;组织Annexin A3预测铂类耐药的AUC为0.763;外周血Annexin A3预测铂类耐药的AUC显著高于组织Annexin A3.结论 铂类耐药的卵巢上皮癌患者外周血与肿瘤组织Annexin A3表达水平均显著升高,外周血Annexin A3对铂类耐药的预测价值优于组织Annexin A3.
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ANXA3 mRNA 和Livin mRNA 在胆囊癌和胆囊息肉中的表达及意义
目的：探讨膜联蛋白A3（ANXA3）mRNA和Livin mRNA 在胆囊癌和胆囊息肉组织中的表达及意义。方法：收集35例胆囊癌患者（胆囊癌组）和34例胆囊息肉患者（息肉组）的临床资料，采用RT‐PCR技术检测组织ANXA3和Livin的表达，观察两标志物的变化与胆囊癌和胆囊息肉疾病之间的关系。结果：胆囊癌组ANXA3 mRNA和Livin mRNA表达与息肉组比较显著增高（P＜0．01）。胆囊癌组ANXA3 mRNA和Livin mRNA表达呈正相关（r＝0．617，P＜0．01）。胆囊癌组中ANXA3 mRNA和Livin mRNA的表达量分别和血清CEA、CA19‐9及CA50具有相关性[（ r＝0．627，0．593，0．607，P＜0．01），（ r＝0．643，0．610，0．623，P＜0．01）]。结论：检测组织ANXA3和Livin的表达有助于胆囊癌和胆囊息肉疾病的早期鉴别诊断，
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苦参碱通过调控膜联蛋白A3表达抑制乳腺癌4T1细胞增殖
目的 观察苦参碱对体外培养的乳腺癌4T1细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养乳腺癌4T1细胞,通过不同剂量的苦参碱(0.1 mM、0.2 mM、0.4mM)进行干预后,用CCK-8法、流式细胞术检测其对乳腺癌4T1细胞抑制率和凋亡率的影响;实时荧光定量PCR检测其对4T1细胞膜联蛋白A3mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法检测其对4T1细胞膜联蛋白A3蛋白表达的影响.结果 苦参碱处理4T1细胞后,各组细胞的OD值均显著降低(P＜0.05),细胞的凋亡率显著升高(P＜0.05);膜联蛋白A3(Annexin A3,ANXA3) mRNA表达明显降低,膜联蛋白A3蛋白表达明显降低,ANXA3 mRNA及蛋白表达趋势相一致(P＜0.05).结论 苦参碱可通过抑制ANXA3的表达,抑制4T1细胞的增殖和促进其凋亡.
