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T淋巴细胞活性对有氧运动的免疫应答与适应特征
通过PHA淋巴细胞转化试验,选取刺激指数(SI)反映T淋巴细胞功能,观察有氧运动和训练过程中T淋巴细胞功能的应答与适应特点.16名未经体育专业训练的普通女大学生进行8周有氧训练,每天30分钟.结果显示:(1)作为对一次运动的应答,运动后即刻SI值均出现明显下降,但在训练的前两周,运动后1小时后未见恢复且继续下降,从第6周末起,运动后1小时SI值已基本恢复,表现为一条"V"形曲线.(2)作为对长期有氧运动的适应,随时间推移,第1周至第4周末SI值均显著低于训练前水平(P < 0.05),至第6周末基本恢复到训练前水平,上述结果可能与神经系统的免疫调节作用、应激激素的免疫抑制作用、免疫系统的自身调节以及免疫系统对神经系统、内分泌系统的反调节作用有关.
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铜绿假单胞菌注射液生物活性体外分析方法的应用
目的 本实验旨在建立一种检定铜绿假单胞菌注射液生物活性的体外实验方法和检定标准,用以替代目前具有局限性的动物抑瘤实验.方法 研究中利用铜绿假单胞菌注射液有效成分PA-MSHA菌株的抗原性和促有丝分裂原性,将PA-MSHA在体外直接作用于BALB/c小鼠的脾细胞,通过MTT比色法检测其刺激小鼠脾细胞增殖的能力,以刺激指数(SI)作为指标,评价铜绿假单胞菌注射液的生物活性.通过对各项实验条件的摸索,建立了一套完整的实验体系,并对十批铜绿假单胞菌注射液成品进行了3次重复检测.结果 检测结果显示,铜绿假单胞菌注射液稀释度为1∶200时,所有SI均大于2.0,且批间变异系数为0.039 ～0.052.结论 该方法稳定性好,精密度高,而且具有操作简便,节约成本和时间等优点.通过对检测数据的统计分析,终确定了铜绿假单胞菌注射液成品的检定合格标准.
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输液贴、创口贴类医疗器械产品技术审查关注点探讨
(接4月下)2.2.6.8生物学要求 ①细胞毒性应不大于2级.②皮肤刺激反应原发性刺激指数不大于0.4(皮肤刺激);或产品试验样品与溶剂对照平均记分之差应不大于1.0(皮内反应);③应无迟发型超敏反应.
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巴戟天醇提物对D-半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响
目的 探讨巴戟天醇提物对D-半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响.方法 50只健康雄性Wistar大鼠随机均分为空白对照组、模型对照组、维生素E组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组,每组各10只.利用D-半乳糖制作衰老大鼠模型,并用维生素E及两种不同剂量的巴戟天醇提物进行灌胃.给药结束后,检测大鼠的胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞转化指数、B淋巴细胞转化指数、白介素-2(IL-2)水平以及CD28阳性淋巴细胞数.结果 与模型对照组比较,维生素E组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞转化指数、B淋巴细胞转化指数、IL-2水平以及CD28阳性淋巴细胞数明显升高,差异均有统计学意义(均P < 0.05).结论 巴戟天醇提物能够增强D-半乳糖致衰老大鼠的免疫功能,可能具有延缓衰老的作用.
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输注分子嵌合小鼠前体T细胞抑制异源小鼠T细胞增殖反应的研究
目的 研究分子嵌合前体T细胞(pre-T细胞)对异基因T淋巴细胞增殖能力的影响,旨在为研究同种异体器官移植诱导免疫耐受提供新策略.方法 RT-PCR获取C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ等位基因H-2Kb和H-2Db基因,并与pIRES质粒连接,构建重组质粒并转染体外培养BALB/c小鼠pre-T细胞构建分子嵌合细胞,并设立未转染及转染空质粒对照组.各组细胞回输BALB/c小鼠,7d后提取各组小鼠脾脏T细胞,将其与C57BL/6小鼠T淋巴细胞混合培养,观察刺激指数(SI).结果 构建质粒测序表明,插入序列的结果包含GenBank检索的C57BL/6小鼠H-2Kb和H-2Db序列,流式细胞仪检测质粒pIRES-H-2Kb和pIRES-H-2Db转染后,pre-T细胞表面H-2Kb及H-2Db蛋白的表达增高,与未转染组及转染空质粒组相比,其差异均具有统计学意义(P＜0.05).单向混合淋巴细胞培养结果显示:2质粒共注射pre-T细胞组的SI值(0.764±0.074)较空质粒组(0.983±0.081)和未转染组(0.994±0.142)明显下降,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 分子嵌合细胞可降低受体T细胞对异基因T淋巴细胞刺激的增殖反应,有望应用于体内诱导免疫耐受.
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胡桃楸对电离辐射损伤小鼠免疫功能的影响
目的:探讨胡桃楸乙醇提取物(AEBJ)对电离辐射所致小鼠免疫功能损伤的影响.方法:60只小鼠随机分为假照射组、照射对照组、AEBJ低剂量(300 mg·kg-1)照射给药组、AEBJ高剂量(600 mg·kg-1)照射给药组、AEBJ低剂量单纯给药组和AEBJ高剂量单纯给药组6个实验组,检测小鼠外周血白细胞数、淋巴细胞百分数、淋巴细胞绝对值、脏器指数和Con A刺激小鼠脾淋巴细胞增殖能力.结果:照射对照组小鼠外周血白细胞数、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分数、脏器指数和Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应能力均低于假照射组(P＜0.05);AEBJ高、低剂量照射给药组小鼠外周血白细胞数、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分数、脏器指数和Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应能力均高于照射对照组(P＜0.05);AEBJ高、低剂量单纯给药组的淋巴细胞百分数和Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应能力均高于假照射组(P＜0.05).结论:AEBJ对电离辐射所致的小鼠免疫功能损伤有保护和修复作用.
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激发型CD28单抗直接激发的T细胞及其表型
1.用羊抗鼠IgG(20 μg/ml)包被96孔细胞培养板,再加入游离的激发型GD28单抗(终浓度为5 μg/ml);2.用激发型CD28单抗(10μg/ml)直接包被96孔细胞培养板,然后分别加入105个/孔经E-花结实验获取的人外周血T细胞(PBTC),其中CD3+T＞95%.逐日观察细胞的生长状态并绘制生长曲线,用3H-TdR掺入法分析PBTC的增殖效应,用FITC标记的单抗经流式细胞仪(FCM)分析细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的表达.逐日细胞计数的结果表明,经羊抗鼠IgG包被后加入游离激发型CD28单抗或直接用激发型CD28单抗包被,均能引发PBTC的活化与增殖效应,激发3 d时的刺激指数(SI)大于9,细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的阳性表达率(x±s,%)分别为98.6±0.2、74.4±3.1、22.5±2.0、2.1±0.4、18.4±2.2、35.2±3.5.与XGB7(作为APC)刺激的T细胞相比,经CD28单抗直接激发的T细胞,CD4+/CD8+T细胞的比值及OX40+T细胞的百分率升高(P＜0.01),但不表达负性调节分子CTLA-4.
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以乙型肝炎病毒核心区为载体的"a"决定簇基因免疫效果评价
目的 评价以乙型肝炎病毒核心区为载体的HBsAg"a"决定簇编码基因的基因免疫效果.方法 分别使用将编码截短型乙肝病毒核心抗原的主要免疫显性区替换为表面抗原"a"决定簇嵌合基因的真核表达质粒;编码表面抗原"a"决定簇部分的质粒和空载体为免疫原,免疫4～6周龄的BALB/c小鼠,定期采血检测体液免疫应答情况并取免疫后小鼠脾细胞进行淋巴细胞增殖试验.结果 嵌合质粒免疫组针对HBsAg的体液应答水平低于非嵌合质粒免疫组,且未引起较强的HBcAb体液免疫应答,但获得了较强的HBcAg和HBsAg特异性的细胞应答.结论 该嵌合质粒作为基因疫苗可以引起较强的HBcAg和HBsAg特异性的细胞应答并诱导小鼠产生HBsAb.HBcAg在一定程度上可以增强对插入抗原的免疫应答,是一种有效的病毒样颗粒载体;该嵌合基因有望成为一种新的慢性HBV感染的治疗性基因疫苗.
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大豆异黄酮对YAC-1细胞和小鼠ESC艾氏肉瘤生长的抑制作用
目的:大豆异黄酮(isoflavones,ISO)主要包括金雀异黄素(genisten,gen)和大豆甙元( daiddzein,daid)及二者的糖苷形式(在胃酸和细菌作用下转化为gen和daid)、黄豆黄素(gly citein).本研究主要观察ISO对YAC-1细胞、正常小鼠免疫功能及小鼠ESC艾氏肉瘤生长的抑制作用及免疫功能的影响.方法:用MTT法测定大豆异黄酮对YAC-1细胞生长的抑制率和小鼠淋巴细胞转化刺激指数;L DH短程释放法测定小鼠NK细胞活性;称重观察大豆异黄酮对正常小鼠和荷瘤小鼠脾指数和胸腺指数及荷瘤小鼠肿瘤生长情况.结果:gen和daid(0.01～100μM)剂量依赖性抑制YAC-1细胞生长,并随时间延长作用增强 .ISO 50、100、400mg/kg灌胃给药均明显升高雌性小鼠脾指数和淋巴细胞转化的刺激指数 ,对雄性小鼠则无明显作用.ISO 100、400mg/kg明显抑制小鼠ESC艾氏肉瘤生长,同时50、 100、400mg/kg均降低异常增高的脾指数,增加NK细胞活性.结论:大豆异黄酮明显抑制YAC-1细胞和小鼠ESC艾氏肉瘤的生长,同时增强非特异性免疫功能,并可增强正常雌性小鼠免疫功能.
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大豆肽的电荷及相对分子质量对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
目的:研究大豆肽的电荷及相对分子质量(Mr)对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.方法:分别采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、肽酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶6种商品酶,单独使用或将它们组合水解为大豆蛋白,测定其正电荷肽的含量和Mr的大小,并用MTT比色法检测大豆肽对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.结果:水解大豆肽的Mr平均小于1 000,其单独作用及与ConA协同作用,均对小鼠脾淋巴细胞的增殖具有促进作用.结论:脾淋巴细胞增殖的刺激指数与正电荷肽含量的相关性较好;而其Mr的变化对刺激指数的影响不大.
