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软骨细胞培养及其活性测定的实验研究
各种原因造成的关节软骨缺损一直是研究的热点.检测术后移植物软骨细胞的活性是判定手术成功与否的重要标志.检测的方法很多,作者认为同位素3H-Tdr(3H-胸腺嘧啶核苷)掺入法比较可靠.
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肝癌化疗药敏试验与应用研究
目的 探讨临床肝癌组织细胞体外药敏试验的可行性,为临床制定合理的肿瘤"个体化"治疗方案提供依据.方法 采用MTS比色法和3H-TdR掺入法测定肝癌SMMC-7721及胃癌NKM45细胞株对临床常用9种抗癌药物[羟基喜树碱(HCPT)、盖诺(NVB)、阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、平阳霉素(PYM)、丝裂霉素(MMC)、足叶乙甙(VP-16)、甲氨蝶呤(MTX)]的敏感性,并用MTS比色法对53例临床肿瘤标本(其中肝癌32例、结直肠癌13例、胃癌8例)进行药敏试验.结果 药物对肿瘤细胞的抑制率,MTS比色法与3H-TdR掺入法之间差异无统计学意义(P＞0.05).9种抗癌药物对临床32例肝癌患者的总有效率差异较大,高为HCPT(90.63%),其次为NVB(78.10%);临床肝癌、胃癌及结直肠癌对药物的敏感性不同或不全同.结论 MTS比色法和3H-TdR掺入法均是肿瘤药敏试验的可靠稳定方法.肿瘤患者化疗前应进行药敏试验,无条件时肝癌患者可优先考虑HCPT、NVB作为化疗药物.
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氯化镉的体外毒性及锌的拮抗作用
目的观察镉与锌体外对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)增殖的影响,初步探讨镉毒性机制.方法采用MTT法及3H-TdR掺入法,研究不同浓度氯化镉(CdCl2)单独或与生理浓度氯化锌(ZnCl2,10 μmol/L)同时染毒对V79细胞增殖的影响,并采用等离子体光谱仪测定细胞内Cd2+、Zn2+含量.结果 CdCl2对于V79细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性.采用MTT法和3H-TdR掺入法所得CdCl2染毒24 h后50%抑制浓度(IC50)分别为13.73 μmol/L和13.60 μmol/L.随着CdCl2染毒浓度的增加,细胞内Cd2+含量也增加.而同时给予锌则对镉的增殖抑制效应在一定程度上具有明显的拮抗作用,锌可使细胞内Cd2+含量降低.结论在本实验条件下,CdCl2对V79细胞增殖具有抑制作用,锌对镉的毒性有拮抗作用.
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流式细胞术法与3H-TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究
目的:研究3H-TdR掺入法和流式细胞术法研究指标的相关性,探讨用流式细胞术法来替代3H-TdR掺入法的数据依据.方法:用3H-TdR掺入法和流式细胞术法对细胞DNA合成和有丝分裂进行检测.结果:流式细胞仪指标与3H-TdR掺入实验指标呈高度的正相关关系,相关系数分别为:PI与cpm相关系数为r=0.964;SPF与3H-TdR,掺入的相关悉数r=0.876,且经检验有统计学意义(P＜0.01).结论:主动脉平滑肌细胞增殖指数、S期细胞分数与3H-TdR掺入值密切相关.
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两种鹿茸多肽生物学活性检测方法的比较
目的采用两种方法检测鹿茸多肽生物活性,并进行两种方法优劣比较.方法分别采用MTT比色法及3H-TdR掺入法检测多肽对NIH 3T3细胞增殖的影响.结果这两种方法均能检出多肽促进NH3T3细胞增殖的作用,且具有相关性,与对照组相比,差异有显著意义.结论 MTT比色法简便、迅速,重复性较差.3H-TdR掺入法灵敏度高,但有放射性污染.
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激发型CD28单抗直接激发的T细胞及其表型
1.用羊抗鼠IgG(20 μg/ml)包被96孔细胞培养板,再加入游离的激发型GD28单抗(终浓度为5 μg/ml);2.用激发型CD28单抗(10μg/ml)直接包被96孔细胞培养板,然后分别加入105个/孔经E-花结实验获取的人外周血T细胞(PBTC),其中CD3+T＞95%.逐日观察细胞的生长状态并绘制生长曲线,用3H-TdR掺入法分析PBTC的增殖效应,用FITC标记的单抗经流式细胞仪(FCM)分析细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的表达.逐日细胞计数的结果表明,经羊抗鼠IgG包被后加入游离激发型CD28单抗或直接用激发型CD28单抗包被,均能引发PBTC的活化与增殖效应,激发3 d时的刺激指数(SI)大于9,细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的阳性表达率(x±s,%)分别为98.6±0.2、74.4±3.1、22.5±2.0、2.1±0.4、18.4±2.2、35.2±3.5.与XGB7(作为APC)刺激的T细胞相比,经CD28单抗直接激发的T细胞,CD4+/CD8+T细胞的比值及OX40+T细胞的百分率升高(P＜0.01),但不表达负性调节分子CTLA-4.
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硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响
目的:研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC-3生长和增殖的影响.方法:用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3进行药物处理,然后用MTT法测定细胞的活力,用3H-TdR掺入法测定细胞的增殖情况.结果:24小时作用时,硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组,高剂量组A值与对照组有极显著差异.48小时作用时,硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组,中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异;48小时的硒酸钠处理抑制PC-3细胞的增殖,中剂量组与对照组相比有显著差异,高剂量组与对照组有极显著差异.结论:硒酸钠可抑制PC-3细胞的活力,抑制细胞增殖,并且这两种作用都呈剂量依赖效应.
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促肝细胞生长因子活性检测方法比较
目的比较3种可用于促肝细胞生长因子(HGF)活性检测方法的优劣,以确定HGF活性的常规检测方法.方法以人肝癌细胞HepG2为材料,分别用3H-TdR掺入法、四甲基偶氮唑蓝比色法和XTT-PMS法检测HGF的生物活性,比较线性相关系数(r)和大刺激指数(SI)及3种方法操作的简便性.结果 MTT法的灵敏度(SI=3.65)与准确度(r=0.91)均较差;XTT-PMS法虽然灵敏度(SI=7.72)不如3H-TdR掺入法(SI=23.19),但准确度(r=0.98)佳,操作为简便.结论 3种方法中,XTT-PMS法如以标准品校正,可作为HGF活性常规检测的首选方法.
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应用3H-TdR掺入法对SMMC-7721细胞株药敏试验条件的探讨与应用
目的探讨3H-TdR掺入法在进行SMMC-7721系细胞肿瘤药敏试验实验时的佳实验条件.方法确定出3H-TdR掺入法药敏实验时的适细胞浓度、适实验药物浓度、3H-TdR掺入适时间;在适条件下采用3H-TdR掺入法测定肝癌SMMC-7721细胞株对临床常用的9种抗癌药物的敏感性.结果应用3H-TdR掺入法检测肝癌SMMC-7721细胞株药敏试验的适实验细胞浓度为1×104个/孔,适试验药物浓度为1×PPC,3H-TdR适掺入时间为收集细胞前8 h;肝癌SMMC-7721细胞株对DDP、ADM、5-FU、CPT高度敏感,对MTX、VP-16、MMC、NVB低度敏感,对PYM不敏感.结论 3H-TdR掺入法可用于肿瘤药物敏感性测定并确定出它的适实验条件.
关键词： 3H-Tdr掺入法 SMMC-7721细胞株 药敏试验 -
庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞损伤作用的研究
目的探索庆大霉素(GM)对体外培养的肾小管上皮细胞的损伤情况.方法采用MTT比色法和3H-TdR掺入法,观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞增殖的影响.结果一定浓度下(0.4 mmol·L-1)的庆大霉素能够使体外培养的肾小管上皮细胞MTT值下降(P＜0.05),而3H-TdR掺入率升高(P＜0.05);当庆大霉素浓度为1.0 mmol·L-1时,能够使体外培养的肾小管上皮细胞MTT值下降(P＜0.05),3H-TdR掺入率也下降(P＜0.05).结论一定浓度下(0.4 mmol·L-1)的庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞就有损伤作用,只有当GM浓度达到1.0 mmol·L-1时3H-TdR掺入率才有减少,肾小管上皮细胞的增殖作用才会减少.
关键词： 庆大霉素 细胞培养 肾小管上皮细胞:MTT比色法 3H-Tdr掺入法 -
人外周血IL-2活性检测两种方法的对比研究
本文采用MTT比色分析法及3H-TdR掺入法检测IL-2活性,结果显示:MTT比色法与3H-TdR掺入法测定结果一致,但是 MTT比色分析法检测IL-2活性更简便、快速、经济、实用.
