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金莲花70%乙醇提取液中黄酮碳苷类成分的研究(Ⅰ)
目的:对金莲花70%乙醇提取物中的黄酮碳苷类成分进行分离和鉴定,为制定金莲花的品质评价标准提供科学数据.方法:用聚酰胺、硅胶、SephadexLH-20色谱柱连续分离和纯化,利用波谱技术对化合物进行结构鉴定.结果:分离得到3个黄酮碳苷类化合物,经鉴定分别为荭草素-2"O-β-L-半乳糖苷(2"O-β-L-Galactopyranosyl orientin)、荭草苷(Orientin)和牡荆苷(Vitexin).结论:首次证明了金莲花中含有荭草素-2"O-β-L-半乳糖苷,并采用聚酰胺-硅胶-SephadexLH-20连续色谱法对该化合物进行了富集.本研究所采用的分离、纯化黄酮碳苷类成分的方法简便、经济、分离效果好.从金莲花中提取黄酮碳苷类成分用70%乙醇为溶剂效果较佳.金莲花中的抗菌、抗病毒成分主要是黄酮碳苷类化合物,所以,本研究对科学阐释金莲花药效物质基础和有效组分具有重要意义.
关键词： 金莲花 荭草素-2"O-β-L-半乳糖苷 黄酮碳苷 -
金莲花的药理活性研究进展
随着科技的不断发展，我国医疗技术也在不断提升和增强。而医药学也是根据传统医学的发展而不断创新，特别是对于一些中药的加工、研制以及运用，也使中医学与西医学的交流更加频繁，对于医疗技术的提升也是十分重要的。即如我国传统的一类中药材，金莲花本身有黄酮类、有机酸、生物碱等，其中黄酮类也是比较重要的有效成分，需要研究其抑菌、抗病毒、抗氧化等方面药理作用。
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药用花卉——金莲花
金莲花,又称旱金莲、旱地莲、金梅草、金芙蓉、金疙瘩等,是毛茛科的一种草本植物,野生于东北、华北地区,生长在海拔1800米以上的高山草甸或森林地带.金莲花用播种或分株繁殖,栽植当年植株高可达30～70cm,基生叶1～4片,具长柄,叶片5角形.夏季开花,花单生或2～3朵组成聚伞花序.萼片黄色,椭圆状倒卵形或倒卵形,8～15片,生长旺盛时可达17～19片.花瓣多数,与萼片近等长,狭条形,顶端渐狭.
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基于TCMGIS-I的金莲花数值区划研究
目的:分析金莲花的适宜产地.方法:以河北省围场县为点县,运用<中药材产地适宜性分析地理信息系统>(TCMGIS-I)分析了金莲花的全国适宜产地.结果:按金莲花生长所需要的气候、土壤条件分析,其主要适宜产区集中分布在河北北部及与其接壤的内蒙古南部地区,华东、华南地区没有适宜区.结论:系统分析结果对合理发展金莲花生产,认识金莲花道地产地形成具有重要意义.
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坝上地区金莲花及其茎叶总黄酮的测定
莲花茎叶的佳采收时间为6月中旬.
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野生道地与人工种植金莲花不同部位无机元素比较研究
目的：测定人工种植金莲花的花、叶和茎不同部位无机元素的种类和含量，并与野生道地金莲花无机元素种类和含量比较，评判人工种植金莲花药用价值。方法：采用火焰原子吸收分光光度法，对野生金莲花和人工种植金莲花的花、叶和茎的不同部位经处理后进行元素种类和含量分析。结果：人工种植金莲花无机元素种类与野生金莲花一致，K、Ca、Mg、Fe、Zn、Mn、Cu等主要元素含量基本相同，人工种植金莲花叶中大部分无机元素种类与花相同，含量丰富。结论：人工种植金莲花与野生金莲花无机元素种类相同，主要元素含量相近，人工种植金莲花满足药用，可进一步开发金莲花中叶的药用价值。
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金莲花种质遗传多样性的AFLP分析
金莲花是我国常用中药材品种,开展种质遗传多样性研究对新品种选育具有重要意义.本文利用AFLP标记技术对8份金莲花种质在基因组水平开展了遗传多样性分析,采用POPGENE和NTSYS软件对统计结果进行遗传和聚类分析.从64对AFLP引物组合中筛选出的8对引物组合,能够区分全部供试金莲花种质;地理位置较近的金莲花种质,遗传相似系数较高;引种可造成金莲花种质的遗传结构发生变异.
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金莲花药渣发酵提取物拮抗白色念珠菌的体内外实验研究＊
目的：观察金莲花药渣发酵提取物（Extraction of Globeflower Residue Fermentation，EGRF）体外对白色念珠菌抑杀效果及体内对小鼠念珠菌性阴道炎的治疗效果。方法：通过试管法配合平皿法检测EGRF对白色念珠菌的小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）和小杀菌浓度（Minimum Bactericidal Concentration，MBC）；构建小鼠白念珠菌性阴道炎模型，将造模成功小鼠随机分为正常对照组，模型组，EGRF低、中、高剂量组（EGRF给药浓度分别为：40、80、160 mg?kg-1），氟康唑组（20 mg?kg-1），共6组。各药均阴道内给药，每天1次，连续给药7天，观察小鼠外阴炎症反应程度、阴道念珠菌转阴率、阴道灌洗液载菌量和阴道粘膜的病理改变。结果：EGRF对白色念珠菌的MIC为0.31 mg?mL-1，对白色念珠菌的MBC为1.25 mg?mL-1，EGRF和氟康唑的效价单位比MIC为2?1，MBC为1?1。与模型组相比，EGRF及氟康唑治疗组的小鼠外阴炎症反应程度减轻及分泌物中念珠菌数量随着给药时间增加而显著减少；小鼠阴道灌洗液白色念珠菌转阴率增加，载菌量明显减少；小鼠阴道组织病理改变有不同程度的减轻，有明显剂量依赖性，高剂量组与氟康唑组相近。结论：EGRF于体外对白色念珠菌抑杀作用显著，对小鼠白色念珠菌性阴道炎疗效较好。
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中药金莲花的质量标准及其总黄酮成分的提取工艺研究
目的 探讨中药金莲花的质量标准及其总黄酮类成分的佳提取工艺.方法 采用性状描述及有效成分定量定性分析方法对中药金莲花进行质量控制,采用正交试验法,以乙醇浓度、回流时间、回流次数、液料比为因素,以出膏率及总黄酮得率为指标,对金莲花中总黄酮类成分进行提取.结果 金莲花粉末性状特征性明显,采用高效液相包谱法(HPLC)进行定量分析,测定荭草苷的加样回收率为99.45％(n=5,RSD=0.91％).以总黄酮类作为参照物,金莲花的佳提取工艺为50％乙醇溶液,回流时间为2 h,回流次数为3次,液料比为8∶1时所得到的出膏率及总黄酮得率高,其中高出膏率为46.21％,总黄酮高含量15.73％.结论 此提取工艺操作简单,简便易行,稳定性好,准确率高,可以有效控制金莲花药材的质量及大限度提取总黄酮类成分.
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金莲花总黄酮抗菌作用的实验研究
目的:观察金莲花总黄酮(FTLR)体内外的抗菌活性.方法:体外抗菌实验,采用营养肉汤对金黄色葡萄球菌等14个菌株进行试管连续稀释法和营养琼脂扩散法测定FTLR的低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC).体内实验采用金黄色葡萄球菌26002-6标准株感染昆明种小鼠作为模型,模型小鼠被随机分为FTLR 440,220,110 mg·kg-1剂量组,金莲花片2 400 mg· kg-1对照组(金莲花片2 400 mg·kg-1与FTLR 440 mg·kg-1的生药剂量相等)及模型对照组,以感染后24,48 h小鼠的死亡率为指标,观察对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性.结果:在体外抑菌实验中,FTLR对13个细菌标准菌株和10个临床株均有抑制作用,其MIC和MBC均低于双黄连口服液；在体内抑菌实验中,FTLR各剂量组金黄色葡萄球菌感染小鼠48 h死亡率均明显低于模型对照组,440 mg·kg-1组死亡率低于金莲花片2 400 mg·kg-1组.结论:对多种细菌有明显的抑制作用.相等生药量的总黄酮对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用强于金莲花片.
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清热养胃合剂的质量标准
目的:建立清热养胃合剂质量控制方法.方法:采用薄层色谱法对制剂中牛至、金莲花进行鉴别,其中牛至的薄层色谱鉴别采用咖啡酸为对照品,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶7.5∶1)为展开剂;金莲花的薄层色谱鉴别采用芦丁为对照品和金莲花对照药材,以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶0.8)为展开剂.采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,高效液相色谱法测定芦丁的含量.结果:清热养胃合剂中的牛至、金莲花的薄层色谱具有鉴别特征、斑点清晰,与相应对照品均呈相同的鉴别反应;总黄酮含量测定中芦丁在0.134～0.670 mg线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率98.42％,RSD 1.2％.含量测定中芦丁在0.400 ～4.000μg有良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为98.91％,RSD 1.2％.结论:鉴别方法专属性强、灵敏度高;定量方法简便快速、结果准确且重复性好,可用于控制清热养胃合剂的质量.
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HPLC测定金莲花中金莲花苷的含量
目的:建立金莲花中金莲花苷的含量测定方法,并测定其在市售金莲花药材中的含量.方法:高效液相色谱法,Kromasil C18ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱温为室温；流动相A为乙腈,B为0.5％醋酸溶液；洗脱程序(0 ～30min,2％～100％A),流速1.0 mL· min-1,检测波长258 nm.结果:金莲花苷在0.1158～1.0422 μg线性关系良好,9批金莲花药材中的金莲花苷的含量为0 ～0.058％.结论:本方法精密度、准确度和重复性良好,适用于测定金莲花中金莲花苷的含量.
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金莲花不同花部对总黄酮的贡献度研究
目的:测定金莲花不同花部总黄酮的含量及质量分数,确定各花部对金莲花总黄酮的贡献度.方法:比色法测定金莲花不同花部中总黄酮的含量；质量分析法测定不同花部的质量分数；采用数学方法计算各花部对金莲花总黄酮的贡献度.结果:金莲花各花部的总黄酮含量为:花萼(6.18％)、花柄(2.84％)、花冠(2.22％)、子房(1.52％)、花蕊群(1.07％).金莲花各花部的质量分数为:花萼(41.90％)、花蕊群(22.40％)、子房(15.29％)、花冠(10.24％)、花柄(10.17％).结论:金莲花5个花部对总黄酮的贡献度依次为:花萼(72.00％)、花柄(8.19％)、花蕊群(6.85％)、子房(6.54％)、花冠(6.42％),花萼对总黄酮的贡献度大.
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金莲花总黄酮分散片处方工艺优选
目的:优选金莲花总黄酮分散片的处方工艺.方法:采用单因素试验考察润滑剂、填充剂、黏合剂及崩解剂；以崩解时限为指标,通过正交试验考察微晶纤维素,内加交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPPXL-10),外加交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPPXL)及聚乙二醇6000(PEG 6000)质量对金莲花总黄酮分散片的处方工艺的影响.结果:金莲花总黄酮分散片的佳处方工艺为选择微晶纤维素为填充剂,PEG 6000为润滑剂,95％乙醇为黏合剂,PVPPXL-10和PVPPXL为崩解剂；金莲花总黄酮干膏粉200 g(50％),微晶纤维素148.48 g(37.12％),PVPPXL-10 34.09 g(8.52％),PVPPXL 11.36 g(2.84％),PEG 60006.06 g(1.52％),制成1 000片.制得的药片崩解时限均＜3 min,片重0.4g,药片在3 min内崩解物能通过2号筛,均匀性符合规定.结论:优选的处方工艺稳定可行,具有很好的可追溯性,为制定金莲花总黄酮分散片的质量标准提供实验依据.
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紫外分光光度法测定金莲花中总黄酮的含量
目的:建立金莲花总黄酮的含量测定方法.方法:分光光度法于波长(272±2)nm处测定总黄酮的含量.结果:平均加样回收率为98.6%,RSD=1.3%.结论:该方法操作简单,准确性和重复性好,可用于金莲花中总黄酮含量的测定及质量控制.
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藜芦酸在大鼠体内的药代动力学
目的:考察藜芦酸在大鼠体内的药代动力学.方法:大鼠口服灌胃给予藜芦酸,在不同时间点采集血样,选择3,4-二羟基苯甲酸甲酯为内标,采用HPLC测定血药浓度,流动相乙腈(A)-1％乙酸(B)梯度洗脱(0～11 min,5％～57％A;11～13 min,57％ ～ 5％ A),检测波长256 nm,绘制血药浓度-时间曲线,通过Kinetica 4.4软件计算药代动力学参数.结果:灌胃给药后藜芦酸在大鼠体内的达峰时间分别为(45.00±10.00),(31.00±8.22) min,存在二次达峰现象;高、低剂量组的C一分别为(176.85±28.89),(68.14±12.58)mg·L-1,t1/2分别为(87.74±20.74),(227.18±93.78) min,AUC0-∞分别为(50 363.50±11 667.7),(18 830.32±4 354.35) min·mg·L-1,M RT0-∞分别为(201.39±16.72),(227.40±21.37) min.结论:藜芦酸口服吸收较快,消除较慢,体内作用时间较长.
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山西产金莲花总黄酮及3种黄酮苷含量的测定
目的:测定山西产金莲花总黄酮及3种黄酮苷的含量.方法:紫外分光光度法测定金莲花总黄酮的含量,检测波长500nim.高效液相色谱法测定金莲花3种黄酮苷的含量,色谱柱为AlltimaTM C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温为室温;检测波长360ntm.结果:金莲花总黄酮在8.44-42.20μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率为99.86％,RSD为1.42％;荭草苷、牡荆苷、槲皮素的进样量分别在0.40-4.00μg、0.036-0.360μg、0.032-0.320μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.65％、99.80％、99.13％,RSD分别为0.78％、1.20％、1.49％.结论:本方法简单准确,重复性好,适用于金莲花总黄酮及3种黄酮苷的含量测定.
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金莲花药渣提取物对小鼠体重的影响分析
目的 探讨金莲花药渣的水提取物对小鼠体重的影响.方法 将金莲花药渣提取液与荞麦面粉按照高(100ml/500g)、中(50ml/500g)、低(25ml/500g)3 种比例混合均匀,制备高、中、低3 种不同剂量组小鼠的饲料,晾干.取48 只健康小鼠,雌雄各半,随机分为4 组:空白对照(C)组、高剂量(H)组、中剂量(M)组和低剂量(L)组,并分别喂以不含金莲花药渣提取物的饲料、高、中和低剂量饲料,连续喂养12d.每天观察小鼠生长状况,并每6d 称取小鼠体重.结果 H 组小鼠体重明显低于C 组(P＜0.01),同时也低于M 组,且差异具有统计学意义(P＜0.05);M 组也低于C 组,但差异并不显著(P＞0.05);L 组饲养失败,体重降低,差异无统计学意义.结论 金莲花提取物能够抑制小鼠体重的增长.
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基于分子对接技术的金莲花主要成分抗病毒和抗炎机制预测
目的 利用分子对接技术预测金莲花中牡荆素、荭草素、牡荆素-2"-O-β-L-半乳糖苷、荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、藜芦酸、金莲花碱的抗病毒和抗炎机制.方法 运用Discovery Studio 2.5软件和药物化学数据库,将金莲花的6个活性成分与Toll样受体蛋白(TLRs)及神经氨酸酶(NA)靶点进行分子对接,通过模拟运算,分析对接结果及其功能区域的相互作用关系.结果 牡荆素、荭草素、牡荆素-2"-O-β-L-半乳糖苷、藜芦酸、金莲花碱均作用于1种或多种TLR,而荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷与3种TLR均无相互作用;黄酮类化合物,即牡荆素、荭草素、牡荆素-2"-O-β-L-半乳糖苷、荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷均可与NA结合,而藜芦酸和金莲花碱与NA无相互作用.结论 金莲花的6个活性成分中,5个成分可影响TLRs介导的信号通路,TLR3、4、7是其抗病毒抗炎作用的潜在靶点;4个黄酮类化合物可通过作用于NA而影响流感病毒活性.本研究可为探讨金莲花的抗病毒和抗炎有效成分及其进一步开发利用提供依据.
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HPLC测定金莲花中金莲花碱的含量
目的:建立金莲花中金莲花碱的含量测定方法,并测定市售金莲花药材中金莲花碱的含量.方法:采用高效液相色谱法,Agilent C18 ODS色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.5％醋酸溶液(0～30min,2:98～100:0),流速为1.0mL·min-1,检测波长为258 nm.结果:金莲花碱在0.1380～1.2410μg呈良好的线性关系,购自全国各地的9批金莲花药材中的金莲花碱为0.05％～0.11％.结论:本方法精密、准确、重现性好,可用于测定金莲花中金莲花碱的含量.
