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慢性脑缺血对大鼠皮质神经细胞PGC-1和mtTFA mRNA表达的影响
慢性脑缺血对能量代谢未产生明显影响[1],可能与脑组织内部存在能量代偿机制有关.研究表明,能量需求变化时细胞内与能量代谢有关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1 (PGC-1) 和线粒体转录因子A(mtTFA)等调节因子可作用于线粒体以维持能量平衡.为此,我们制备大鼠双侧颈总动脉结扎(2-VO) 的慢性脑缺血模型,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究脑组织中PGC-1和mtTFA基因表达变化,探讨慢性脑缺血能量代谢调控的分子作用机制.
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益气活血中药对氧化低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞增殖中线粒体的影响
目的:探讨益气活血中药抑制血管平滑肌细胞(VSM)增殖的分子机制.方法:血管平滑肌细胞被培养在四种培养基中:常规培养基作为对照组,氧化型低密度脂蛋白组,以及在氧化型低密度脂蛋白组基础上的高浓度和低浓度两种兔载药血清培养基组.完成培养及干预后,检测PGC-1、NRF-1(核呼吸因子)和mtTFA(线粒体转录因子)蛋白表达,线粒体功能改变(COX酶活性)及细胞活性.结果:与对照组相比,氧化型低密度脂蛋白组PGC-1、NRF-1、mtTFA蛋白表达、线粒体COX(细胞色素C氧化酶)酶活性及细胞增殖活性均增加(P<0.05).与氧化型低密度脂蛋白组相比,载药血清组PGC-1、NRF、mtTFA蛋白表达及COX酶活性降低(P<0.05);细胞增殖受到抑制(P<0.05),这种抑制效率呈现药物浓度依赖性.结论:益气活血汤药在人血管平滑肌细胞增生过程中通过改变线粒体功能影响细胞的生长状态.
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人血管平滑肌细胞PGC-1/NRF-1/mtTFA的表达
背景:血管平滑肌细胞由收缩型向合成型的转变过程中线粒体可能参与了这个复杂的过程.目的:拟观察线粒体功能相关的PGC-1/NRF-1/mtTFA通路在人血管平滑肌细胞增殖中的作用.设计、时间及地点:分组设计,对比观察,于2007-01在中国医科大学附属一院中心实验室完成.材料:氧化型低密度脂蛋自由中科院协和研究所提供;叠氮钠由国药集团化学试剂有限公司沈阳分公司提供;人脐动脉平滑肌细胞由中美科技有限公司提供.方法:实验分为4组,对照组予以正常培养基;氧化型低密度脂蛋白组常规培养基中加入氧化型低密度脂蛋白使其终浓度达到10 mg/L作用24 h;PGC-1反义组在氧化型低密度脂蛋白组干预措施的基础上,将细胞以1×108L-1的密度接种于6孔板上,并将配置好的反义PGC-1寡核苷酸脂质体复合物70 μ L加入各孔,6 h后补充小牛血清和培养基;叠氮钠组在氧化型低密度脂蛋白组干预措施的基础上,培养基中加入叠氮钠使其终浓度达到32 mmol/L作用24 h.主要观察指标:蛋白免疫印迹检测各组干预后培养细胞中PGC-1、NRF-1和mtTFA蛋白表达.观察各组干预完成后线粒体功能改变.四甲基偶氮唑盐比色法检测各组细胞活性.结果:与对照组相比,氧化型低密度脂蛋白组PGC-1、NRF、mtTFA蛋白表达、线粒体细胞色素C氧化酶酶活性及细胞增殖活性均增加(P<0.05).与氧化型低密度脂蛋白组相比,PGC-1反义组PGC-1、NRF-1和mtTFA的蛋白表达减少、线粒体细胞色素C氧化酶酶活性及细胞增殖活性均下降(P<0.05);叠氮钠组PGC-1、NRF、mtTFA蛋白表达及细胞色素C氧化酶酶活性降低(P<0.05);细胞增殖受到抑制(P<0.05).结论:PGC-1/NRF/mtTFA信号传导途径在人血管平滑肌细胞增生过程中通过改变线粒体功能影响细胞的生长状态.
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黄芪多糖对衰老模型大鼠肝细胞色素C氧化酶Ⅰ、Ⅳ表达的影响
目的 研究黄芪多糖对衰老模型大鼠肝细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)、COⅣ表达的影响及其作用机制.方法 测定各组大鼠肝线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、CO活性及丙二醛(MDA)含量,采用RT-PCR法检测COⅠ、COⅣ、核呼吸因子1(NRF-1)和线粒体转录因子(mtTFA)mRNA的表达水平.结果 黄芪多糖可提高模型大鼠肝Mn-SOD、CO活性(P<0.01,P<0.05),降低MDA含量(P<0.01,P<0.05)和COⅠ、COⅣ、mtTFA 和NRF-1 mRNA的表达(P<0.01).NRF-1和COⅣ表达,mtTFA和COⅠ表达,NRF-1和mtTFA表达,分别呈显著正相关.结论 黄芪多糖可下调mtTFA 和 NRF-1 的表达,且对COⅠ、COⅣmRNA表达的影响与mtTFA和NRF-1有密切相关.
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粟米草三帖皂甙对抑制血管平滑肌细胞迁移和线粒体转录因子1 mRNA表达的影响
目的 观察粟米草三帖皂甙(MPTS)对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMCs)迁移和线粒体转录因子1表达的影响.方法 采用细胞刮片法观察RASMCs的迁移,比色法观察羟脯氨酸含量及RT-PCR观察线粒体转录因子1(mtTF1) mRNA的表达.结果 MPTS以浓度依赖方式抑制RASMCs迁移和基质合成,同时能降低mtTF1mRNA的表达.结论 MPTS具有抗RASMCs迁移和基质合成的作用,其抗增殖作用与抑制mtTF1 mRNA表达有关.
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核呼吸因子-1在神经系统中的研究进展
核呼吸因子-1(NRF-1)是核基因编码的一个关键的转录因子,在协调细胞核和线粒体功能、DNA的合成/修复、蛋白质的转录/翻译和细胞增殖等方面有重要意义.本文就NRF-1的结构、分布、调节、功能作简要介绍,并着重阐述近年来它在神经元及神经系统疾病中的研究进展.
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CTRP3经AMPK/PGC-1α通路促进心肌细胞线粒体生物生成
目的:C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-3(CTRP3)是一种脂肪细胞因子,它与多种代谢性及心血管疾病密切相关,但CTRP3对线粒体生物生成的影响尚不清楚。本研究主要探讨CTRP3对心肌细胞线粒体生物生成的影响及相关机制。方法:原代培养乳大鼠心肌细胞并给予CTRP3处理。使用PCR、Western blot和免疫共沉淀等方法分别检测线粒体生物生成相关蛋白、线粒体DNA拷贝数、ATP含量和sirtuin 1( SIRT1)活性的变化。结果:CTRP3显著增加过氧化物酶体增殖激活受体共激活因子1α( PGC-1α)、核呼吸因子1( NRF-1)、线粒体转录因子A( TFAM)、线粒体氧化磷酸化复合物III和V的表达。 CTRP3显著升高心肌线粒体DNA拷贝数和ATP含量,而在心肌细胞中敲低PGC-1α可使上述效应减弱。预孵育腺苷酸活化蛋白激酶( AMPK)的抑制剂AraA可以逆转由CTRP3引起的NRF-1、TFAM和复合物III、V的表达升高。 CTRP3可上调SIRT1的表达和活性,SIRT1抑制剂EX-527可阻断CTRP3对PGC-1α的去乙酰化调节作用。此外,CTRP3对SIRT1表达和活性的促进作用也可被AraA所阻断。结论:CTRP3通过AMPK/PGC-1α通路促进心肌细胞线粒体生物生成。
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人参环氧炔醇对VSMCs迁移和线粒体转录因子1 mRAN表达的影响
目的:观察人参环氧炔醇(panaxydol,PND)对10%胎牛血清(FBS)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMCs)迁移和线粒体转录因子1 mRAN表达的影响.方法:采用细胞刮片法观察RASMCs的迁移,MTT法观察RASMCs的增殖,比色法观察羟脯氨酸含量,RT-PCR观察线粒体转录因子1(mitochondrial transcription factor 1,mtTFl,mtTFA)mRNA的表达.结果:PND以浓度依赖方式抑制10%FBS诱导的RASMCs迁移、增殖和基质合成,同时能降低10%FBS引起的mtTF1 mRNA表达上调.结论:PND具有抗RASMCs迁移、增殖和基质合成的作用,该作用与抑制mtTF1 mRNA表达有关.