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莲房原花青素对肿瘤细胞及正常细胞毒作用的比较
目的:研究莲房原花青素总提取物LSPC的含量和相对分子质量分布及其对人口腔表皮样癌(hunan nasopharyngeal epidermoidcarcinoma,KB)细胞、大鼠嗜碱粒细胞(rat baso-philic leukemia cell,RBL,-2H3)、小鼠成纤维细胞(mouse fibrosarcoma cell,L929)和人肥大细胞(human mast cell line,HMC-1)的毒作用.方法:用ESI MS分析LSPC;并用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖和流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,研究LSPC对KB、RBL2H3、L929和HMC-1细胞的毒作用.结果:LSPC含量＞98%,LSPC含单体、二聚体、三聚体、四聚体原花青素和原花青素二聚体棓酸单酯和三聚体棓酸单酯,相对分子质量为290～1154.3.当LSPC浓度为100～400μg/Ml时,倒置显微镜下可见KR和RBL-2H3细胞变圆、皱缩、漂浮,而L929和HMC-1细胞变化不明显.MTT法实验表明,LSPC对KB和RBL2H3细胞的生长呈显著的抑制作用,而对L929和HMC-1细胞抑制作用不明显;流式细胞术细胞周期和细胞凋亡分析进一步证明,LSPC可阻止KB和RBL,-2H3细胞增殖并诱导其凋亡.结论:LSPC对肿瘤细胞具有较强的毒作用,而对正常细胞毒性较小.
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近红外漫反射光谱法快速测定莲房原花青素及多酚含量
目的 建立莲房中原花青素和多酚含量快速测定方法.方法 采用近红外漫反射光谱法(NIR),以紫外-可见分光光度法为对照方法,运用偏小二乘法(PLS)建立莲房原花青素及多酚含量与近红外漫反射光谱法光谱之间的多元校正模型,实现对原花青素及多酚含量的快速测定.结果 近红外光谱经过二阶导数和Savitzky-Golay平滑滤波处理,选取7 500～6 900cm1波段建模得到的模型效果佳.原花青素校正集相关系数(r)为0.962 1,校正集标准偏差(SEC)为0.64,预测集标准偏差(SEP)为0.94;多酚校正集相关系数(r)为0.925 4,校正集标准偏差为0.97,预测集标准偏差为1.26.结论 该方法快速简便,可用于莲房中原花青素及多酚含量的快速测定.
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莲房原花青素对黑色素瘤B16细胞的抑制作用
目的 研究莲房原花青素(procyanidins from the seedpod of the lotus,LSPC)对体外培养的黑色素瘤B16细胞活性的影响.方法 以MTT法和细胞平板集落形成实验测定LSPC的抗肿瘤活性;电镜观察LSPC对瘤细胞形态学的影响;流式细胞仪检测LSPC对瘤细胞凋亡和细胞周期的影响;激光扫描共聚焦显微镜检测LSPC对瘤细胞内Ca2+浓度的影响.结果 LSPC对B16细胞生长的抑制作用与作用时间和浓度呈时效和量效关系,并可诱导瘤凋亡效应,大抑制率达84.5%,使瘤细胞阻滞于S期;瘤细胞内Ca2+浓度显著升高;细胞有典型的凋亡形态.结论 LSPC是以诱导凋亡的方式抑制黑色素瘤B16细胞增殖,其凋亡作用可能与细胞被阻断于S期和Ca2+浓度升高有关.
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莲房原花青素对氧自由基和脂质过氧化的作用
目的: 观察莲房原花青素(LSPC)对活性氧自由基O*-2、*OH和肝脂质过氧化损伤的作用. 方法: (1)应用化学发光法检测LSPC对O*-2和*OH的清除作用;(2)体外大鼠红细胞、肝线粒体温育引起肝脂质过氧化物(LPO)含量变化;(3)体外大鼠肝匀浆温育,Fe2+、H2O2诱导引起LPO含量变化;(4)小鼠连续口服不同剂量LSPC 7d后,一次性灌胃5% CCl4油溶液10ml/kg bw,24h后检测肝和血浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性以及脂质过氧化物(LPO)含量. 结果: LSPC能有效地清除活性氧自由基O*-2和*OH,其IC50值分别为169.0mg/L和105.3mg/L;不同剂量LSPC能明显抑制体外大鼠红细胞、肝线粒体、肝组织LPO产生;口服中、低剂量LSPC能显著降低CCl4 中毒小鼠体内LPO含量,提高SOD、GST活性. 结论: 适量LSPC具有抗活性氧自由基和脂质过氧化的作用,可能具有护肝功能.
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莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞损伤的拮抗作用
目的:研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02损伤的拮抗作用.方法:观察5、10、25 mg/L的LSPC与200mmol/L乙醇共同作用于肝细胞L-02 24 h后,对细胞的生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量、凋亡率以及DNA损伤等指标的影响.结果:与乙醇组相比,5 mg/L和10 mg/L LSPC使细胞的生存率由73.14%上升到84.79%和90.52%,提高了细胞SOD、CAT、GSH的含量(P＜0.01),降低MDA的生成;有效降低细胞的凋亡率,降低细胞p53和生长抑制DNA损伤基因(GADD)34、45β、153的表达,但高剂量组(25 mg/L)对乙醇的拮抗作用不明显.结论:适量浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的损伤有拮抗作用.
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莲房原花青素体内抗氧化研究
目的: 探讨莲房原花青素体内抗氧化机制. 方法: 选用4月龄Wistar健康大鼠19只,按性别、体重随机分成对照组和莲房原花青素组.经口灌胃100 mg/kg, 35 d. 结果: 原花青素组大鼠血清和皮肤组织中MDA值显著低于对照组(P＜0.05),而血清和皮肤组织中的SOD活性、GSH-Px活性和羟脯氨酸(Hyp)含量均显著高于对照组. 结论: 莲房原花青素能提高大鼠机体抗氧化能力,抑制脂质过氧化作用的发生,并能增加皮肤中的胶元蛋白含量.
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莲房原花青素对60Co-γ射线致亚急性辐射损伤防护的研究
目的:研究莲房原花青素(LSPC)的抗辐射作用.方法:80只小鼠分4组,实验组分别连续灌胃不同剂量(50、100、200 mg/kg bw)的LSPC 15 d后,接受60 Co-γ射线8.0 Gy照射后,一半动物观察平均存活时间和30 d存活率.另一半动物于照射后不同时间检测外周血白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白含量.结果:小鼠经8.0 Gy 60 Co-γ一次全身辐照后,100、200mg/kg bwLSPC组能使小鼠平均存活时间分别提高49.2%和58.3%,存活率明显高于对照组,且各组小鼠的保护指数均大于1.0;外周血像于照后21 d基本恢复正常,且以200mg/kgbw LSPC组效果佳.结论:LSPC对8.0Gy60Co-γ射线亚急性辐射损伤有一定的保护作用.
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产地及采收期对莲房中原花青素量的影响
目的 通过考察不同产地及采收期莲房中原花青素量的变化,确定莲房适宜的产地及采收期,为莲房的合理利用提供依据.方法 采集12产地6个采收时期及不同成熟度的莲房样品,采用不同的干燥方法进行干燥,紫外分光光度法测定原花青素量,比较质量分数差异.结果 不同成熟度的莲房中的原花青素量具有较大差异,成熟样品质量分数大于幼嫩样品;不同干燥方法对莲房中的原花青素质量分数有较大影响,其中烘干法影响较小,阴干法其次,晒干法影响大;不同产地和采收期莲房中的原花青素质量分数具有一定差异,呈区间波动特征.结论 宜选用与莲子采收保持一致的成熟莲房,采摘后宜采用烘干或阴干法干燥处理,不宜置烈日下暴晒;浙江12产地7～9月份的莲房中的原花青素质量分数大多在6％～8％波动,均可作为莲房资源加以利用.
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莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞DNA损伤的拮抗作用
[目的]研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝L-02细胞株DNA损伤的拮抗作用.[方法]观察5、10、25 mg/L的LSPC与200mmol/L乙醇共同作用于L-02肝细胞24h后,对细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,DNA损伤修复酶:[切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)、错配修复hMSH2基因、DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)]表达水平等方面的差异进行比较.[结果]与乙醇组相比,5、10 mg/L的LSPC使细胞的生存率分别由73.14%上升到84.79%和90.52%,细胞SOD、CAT、GSH含量增加(P＜0.01),MDA含量减少(P＜0.01);有效降低细胞DNA损伤程度(P＜0.05).5 mg/L的LSPC可显著增加乙醇处理细胞中ERCC1、DNA-PKcs、hMSH2的表达(P＜0.01),但对MGMT的表达无影响(P＞0.05),10、25 mg/L的LSPC与乙醇组比较,所有4种DNA损伤修复酶的表达均无明显改变.[结论]适量的LSPC可拮抗乙醇诱导的L-02肝细胞的DNA损伤作用.
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莲房原花青素对黑色素瘤B16体内抑制作用的研究
原花青素(Proanthocyanidins)是自然界中广泛存在的一大类酚类聚合物的总称.实验证实原花青素对皮肤癌[1,2]、结肠癌[3]、乳腺癌细胞[3,4]、肺癌[5]、胰腺癌[6]都有预防作用.对人口腔鳞癌细胞HSC-2及涎腺癌细胞HSG也有不同程度的毒性等[7].
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莲房中原花青素的药理作用研究进展
莲房是莲科植物莲的成熟花托,在民间作为一种化瘀止血药使用已有悠久的历史,但人们对其化学成分和药理作用仍知之甚少.其中富含的原花青素为一类独特的多酚类成分,以多样的药理作用引起广泛的关注.本文综述近年来对于莲房原花青素相关药理作用研究进展,包括抗氧化、肿瘤抑制、改善记忆、保护心脑血管系统、调节血脂、抗辐射等多方面的作用,以期对莲房原花青素的进一步研究和莲房资源的合理利用提供理论依据.
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莲房原花青素提取纯化工艺研究与抗氧化活性评价
目的 优化莲房原花青素提取纯化工艺并评价抗氧化活性.方法 以正交设计L9(34)优化莲房原花青素提取工艺参数,用大孔吸附树脂进行纯化,而后通过1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)和羟基自由基(·OH)清除率评价其体外抗氧化活性.结果 在佳提取工艺条件下(8倍量50％乙醇回流提取2次,每次3 h),提取率达91.3％,进一步通过大孔树脂AB-8纯化,终提取物中原花青素纯度为80.7％.莲房原花青素抗氧化活性与葡萄籽原花青素无显著性差异,均明显优于维生素C.结论 该提取纯化方法简单、高效,可用于莲房原花青素提取物的制备.莲房原花青素具有较强的抗氧化活性,值得进一步开发利用.
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莲房总黄酮回流提取工艺的优化
目的 优化莲房总黄酮的回流提取工艺. 方法 用正交试验进行回流提取莲房总黄酮,以紫外分光光度法测定莲房总黄酮的吸光度,标准曲线法计算莲房总黄酮的提取率. 结果 回流提取莲房总黄酮的影响因素为:提取次数＞乙醇浓度＞料液比＞提取时间;优提取工艺条件是:提取次数3次,乙醇浓度70％,料液比1∶16,提取时间1.5 h.在此条件下莲房总黄酮的平均提取率为14.33％,RSD为4.03％. 结论 优化后的回流提取工艺提取莲房总黄酮,具有简便、高效、稳定可行的特点.
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莲房不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除作用
目的 比较莲房不同溶剂提取物对DPPH自由基清除能力的大小.方法 采用福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂法和NaNO2-(NO3)-NaOH法测定莲房的水、甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物中多酚、总黄酮的含量;选用DPPH法研究上述不同溶剂提取物清除自由基活性的能力.结果 莲房的5种溶剂提取物中多酚、总黄酮的舍量有所区别,对DPPH自由基均有一定程度的清除作用,但清除作用均有差别,其中以乙醇提取得到的莲房提取物对DPPH自由基的清除效果好.结论 莲房可作为抗氧化物质资源进行开发利用.
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莲房原花青素对乙醇诱导的人胚肝细胞株L－02氧化损伤的保护作用
目的：研究莲房原花青素（LSPC）对乙醇诱导的人胚肝细胞株L－02氧化损伤的保护作用。方法观察200mmol? L －1乙醇，5、10、25mg? L －1的LSPC，5、10、25mg? L －1的LSPC与200mmol? L －1乙醇共同作用于肝细胞 L－0224h 后，运用单细胞凝胶电泳（ SCGE）实验和微核实验（MNT）观察DNA和染色体损伤情况，用流式细胞术（FCM）分析凋亡率的变化以及活性氧探针（2，7－二氯荧光素）探测细胞内活性氧（ROS）水平的变化。结果 LSPC组与正常对照组比较，差异无显著性意义（ P＞0．05）。纯乙醇组与正常对照组比较，差异有显著性意义，与乙醇组相比，5mg? L －1和10mg? L －1 LSPC能显著降低olive尾矩（OTM）、微核率（MNF）、凋亡率和ROS的水平（均P＜0．05），但高剂量组（25mg? L －1）对乙醇引起的肝细胞损伤保护作用不明显。结论适量浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞 L－02的氧化损伤有保护作用。其机制可能与LSPC的抗氧化活性有关。
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莲房多酚的超声提取工艺研究
目的 优化莲房多酚类物质的超声提取工艺.方法 采用L9(34)正交试验法,对莲房多酚物质超声提取的影响因素乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数进行工艺研究.结果 莲房多酚物质的佳提取工艺为:乙醇浓度50%,料液比1:70,超声提取2次,每次提取25min,莲房多酚的提取率为15.01%.结论 用超声提取法提取莲房多酚物质,具有简便、快速、高效、节能的特点.
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HPLC法测定莲房中槲皮素的含量
目的 采用高效液相色谱法测定莲房中槲皮素的含量.方法 色谱柱:Phenomenex-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸溶液(50:50);检测波长:360 nm;流速:1 mL·min-1;柱温:30 ℃.结果 槲皮素在0.204～2.040 μg之间,线性关系良好,加样回收率99.44%,RSD=0.82%(n=6).结论 该方法 操作简便、准确,具有很好的重现性和稳定性,可以用于莲房的质量控制.
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HPLC法测定荷叶与莲房中荷叶碱的含量
目的 建立高效液相色谱法测定荷叶与莲房中荷叶碱含量的方法.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27∶70.6∶1.6∶0.8)为流动相;流速∶1.0 mL·min-1;柱温:25℃;检测波长:270 nm.结果 荷叶碱在3.01 ～48.16 μg·mL-1范围内线性良好(r=0.999 0),平均回收率为96.97％,RSD=0.99％ (n=6).结论 该方法准确、简便、灵敏度高、重现性好,可用于荷叶与莲房中荷叶碱含量的测定.
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分光光度法测定莲房中总黄酮的含量
目的:探索莲房黄酮的含量测定方法.方法:采用分光光度法,以芦丁为对照品,以5%三氯化铝甲醇溶液为显色剂,在波长413 nm处对样品中的总黄酮进行含量测定.结果:总黄酮在3～30 μg/mL之间,线性关系良好,加样回收率98.954%,RSD(%)=O.90(n=60).结论:该方法操作简便、准确,具有很好的重现性和稳定性,适用于莲房中总黄酮的含量测定.
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大孔树脂纯化莲房总黄酮的工艺研究
目的:研究莲房总黄酮的大孔树脂纯化工艺.方法:以莲房总黄酮的吸附率和解析率为指标,通过静态吸附-解吸试验筛选出优大孔树脂型号;以总黄酮吸附率等为指标,采用单因素试验考察上样液总黄酮质量浓度、吸附时间、吸附流速、上样量、水洗脱用量、洗脱剂体积分数及其用量等因素对莲房总黄酮纯化工艺的影响,并进行验证试验.结果:10种树脂型号中,以HPD-400型大孔树脂对莲房总黄酮的吸附和解吸效果优;优选的分离纯化条件为上样液总黄酮质量浓度7.00 mg/ml,吸附时间3 h,吸附流速3倍柱体积(BV)/h,上样量8 BV,水洗脱用量6 BV,50%乙醇洗脱用量4 BV;验证试验显示,纯化后莲房总黄酮的质量分数分别为63.88%、62.50%和63.44%(RSD=1.11%,n=3).结论:HPD-400型大孔树脂可用于纯化莲房中的总黄酮,且建立的分离纯化工艺稳定、可行.
