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GADD45A在肿瘤中的研究进展
GADD45A是细胞生长阻滞和DNA损伤修复基因,在基因组稳定性维持、细胞周期阻滞和细胞凋亡中起着重要的作用,与肿瘤的发生有密切的关系,其表达高低与肿瘤预后有关.本文对GADD45A的结构和功能以及其在肿瘤中的作用进行综述.
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Gadd45a基因对小鼠造血干细胞功能的影响
目的 Gadd45a基因对小鼠造血干细胞功能的影响.方法 流式细胞仪分选小鼠骨髓造血干细胞、体外单克隆培养,竞争性骨髓移植,放射线照射观察生存曲线.结果 Gadd45a基因缺失的小鼠造血干细胞克隆形成能力增强,短期造血重建能力无差异,8.5Gy放射线照射后生存情况无差异.结论 Gadd45a基因对小鼠造血干细胞功能起重要作用.
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p53和Gadd45a蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床病理学意义
目的探讨胰腺浸润性导管癌(IDC)组织中p53和Gadd45a蛋白表达及临床病理学意义.方法采用免疫组织化学方法检测59例胰腺IDC标本中p53和Gadd45a蛋白的表达情况,分析其与临床病理学参数之间的关系.结果p53蛋白表达阳性率为67.8%(40/59),Gadd45a蛋白为42.4%(25/59).＜65岁胰腺IDC患者的p53蛋白表达阳性率明显高于≥65岁者(x2=4.711,P=0.030),Gadd45a蛋白表达则与患者年龄无关.不同组织学分化程度和不同TNM分期癌组织中p53蛋白表达差异无显著性;不同TNM分期癌组织中Gadd45a蛋白表达差异无显著性,但不同组织学分化程度癌组织中则差异有显著性(x2=10.052,P=0.007).p53(+)组和Gadd45a(+)组中位生存时间分别短于p53(-)组和Gadd45a(-)组(x2=0.09,P=0.764;x2=0.14,P=0.704).结论p53和Gadd45a在胰腺癌组织中均有较高表达.p53和Gadd45a蛋白的过表达可能与胰腺癌的恶性生物学行为有关.两者单独或联合表达与胰腺癌患者的预后无关.
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Gadd45a在人脑胶质瘤细胞中的表达及其与细胞凋亡及增殖的关系
目的 探讨Gadd45a在人脑胶质瘤细胞中的表达及其与细胞凋亡及增殖的关系.方法 采用RT-PCR方法检测正常人脑组织和胶质瘤细胞系U251中的Gadd45a mRNA的表达水平.流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期.MTT法检测细胞增殖率.结果 正常人脑组织Gadd45a mRNA表达水平明显高于U251细胞(P＜0.05).U251细胞在S期比例明显高于正常人脑神经细胞,G2-M期比率明显降低(P＜0.05).U251细胞凋亡率明显低于正常人脑细胞(P＜0.05),增殖率明显高于正常人脑神经细胞(P＜0.05).结论 Gadd45a基因低表达导致细胞多处于S期,降低细胞凋亡率从而促进人脑胶质瘤的发生发展.
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Gadd45a基因与肿瘤
Gadd45a基因与那些参与细胞周期调控、凋亡,DNA修复,细胞信号转导以及维持基因组稳定的细胞因子存在着密切的联系,而以上机制的障碍均可导致肿瘤的发生.该文阐述了Gadd45a在细胞周期调控、凋亡及DNA修复中的作用,并在此基础上进一步对其在抑制肿瘤发生发展过程中的作用机制作一综述.
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PML/RARα抑制GADD45A的转录表达
目的 研究异常转录因子PML/RARα对GADD45A的转录调控机制,为进一步阐释PML/RARα在急性早幼粒细胞白血病(APL)发病中的作用机制提供线索.方法 运用ChIP-PCR技术研究PML/RARα与GADD45A的结合情况；采用Real-TimePCR技术检测PR9细胞中GADD45A mRNA的表达水平,并分析其与PML/RARα融合蛋白表达的相关性；利用真核细胞表达载体在H1299细胞中过表达PML/RARα和p53蛋白,研究PML/RARα与p53对GADD45A的共调控关系.结果 PML/RARαChIP-qPCR结果显示:PML/RARα特异性抗体能够富集GADD45A基因功能区第3个内含子区的DNA片段,而非特异性IgG不能够富集；在PR9细胞中发现GADD45A mRNA表达水平与PML/RARα蛋白的表达呈负相关,说明在PR9细胞中PML/RARα融合蛋白能够抑制GADD45A的表达；在H1299细胞中单独转染野生型p53表达质粒后,GADD45A在mRNA水平显著上调,而共转染PML/RARα和野生型p53表达质粒后,PML/RARα能够显著抑制p53对GA DD45A在mRNA水平的上调作用(P＜0.01).结论 PML/RARα能够结合在GADD45A第3个内含子区域并抑制其转录表达.GADD45A同时也是p53的靶基因,PML/RARα与p53对GADD45A有共调控关系.PML/RARα能够抑制p53对GADD45A的转录激活效应.
关键词： PML/RARα GADD45A P53 急性早幼粒细胞白血病 -
Gadd45a和p53在乳腺癌中的表达及临床病理意义
目的:探讨Gadd45a和p53在乳腺癌中的表达情况及其与临床病理参数和预后的关系.方法:采用免疫组化法检测78例乳腺癌组织及其癌旁正常组织中Gadd45a和p53的表达.结果:Gadd45a在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.4％,明显低于正常乳腺组织,p53在乳腺癌组织中的阳性表达率为65.4％,明显高于正常乳腺组织,差异均具有统计意义(P＜0.05)；Gadd45a在乳腺癌组织学Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组的阳性表达率依次下降,差异均有统计学意义(P＜0.05)；p53在伴有淋巴结转移组中的阳性表达率高于无淋巴结转移组,差异均有统计意义(P＜0.05)；p53表达与Gadd45a表达呈负相关(P＜0.05)；Gadd45a阳性组的生存期长于阴性组,生存率高于阴性组,存在统计学差异；p53阳性组的生存期短于阴性组,生存率低于阴性组,存在统计学差异(P＜ 0.05);p53(+)Gadd45a(-)组(即阳性组)中位生存时间短于阴性组,生存率低于阴性组.结论:Gadd45a和p53蛋白的检测可作为乳腺癌恶性程度的检测指标；p53的表达与乳腺癌的转移相关,Gadd45a的表达与乳腺癌的分化分级相关；p53高表达及Gadd45a低表达与乳腺癌的不良预后相关；p53(+)Gadd45a(-)表型与乳腺癌的不良预后相关；Gadd45a蛋白有望成为乳腺癌治疗的新的靶点.
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p14ARF、Gadd45a mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义
目的 研究甲状腺乳头状癌组织中p14ARF、Gadd45a mRNA及蛋白的表达.方法 采用RT-PCR及免疫组织化学技术检测56例甲状腺乳头状癌、20例乳头状微小癌和20例正常甲状腺组织中Gadd45a、p14ARF的mRNA及蛋白的表达.结果 Gadd45a mRNA在甲状腺乳头状癌、乳头状微小癌和正常甲状腺组织的阳性表达率分别为66.1％ (37/56)、60.0％ (12/20)和25.0％ (5/20).p14ARF mRNA在甲状腺乳头状癌、乳头状微小癌和正常甲状腺组织中的阳性表达率分别为39.3％(22/56)、60.0％(12/20)和95.0％(19/20).Gadd45a mRNA在甲状腺乳头状癌、乳头状微小癌组织中的阳性表达率明显高于正常甲状腺组织(均P ＜0.05).p14ARF mRNA在甲状腺乳头状癌、乳头状微小癌组织中的阳性表达率明显低于正常甲状腺组织(均P ＜0.05).p14ARF mRNA在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率明显低于乳头状微小癌组织(P＜0.05).免疫组化检测二者蛋白的表达结果与mRNA检测结果相同.在复发的甲状腺乳头状癌组织中Gadd45a mRNA的阳性表达率明显高于未复发的甲状腺乳头状癌(P＜0.05).在有淋巴结转移的甲状腺乳头状癌组织中p14ARF mRNA的阳性表达率明显低于无淋巴结转移者(P＜0.05).Gadd45a与p14ARF mRNA表达无相关性(P＞0.05).结论 p14ARF、Gadd45a可能与甲状腺乳头状癌的发生及进展有一定相关性,联合检测二者的表达可为甲状腺乳头状癌的早期诊断提供依据,并有助于判断预后.
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p53与Gadd45a蛋白在胃癌组织中的表达及临床病理学意义
目的 近年来研究表明,p53与Gadd45a蛋白在胃癌的发生、发展过程中发挥重要作用.文中将探讨胃癌组织中p53与Gadd45a蛋白表达及临床病理学意义. 方法 采用免疫组织化学方法检测101例胃癌及其癌旁组织中p53与Gadd45a蛋白的表达情况,分析其与临床病理学参数之间的关系. 结果 胃癌及癌旁组织中p53蛋白表达的阳性率分别为67.33％、12.97％,Gadd45a蛋白表达的阳性率分别为33.79％、79.18％.与癌旁组织中的表达相比,p53蛋白在癌组织中的表达增强,而Gadd45a蛋白的表达却减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).不同组织学分化程度、淋巴结转移转移情况及不同TNM分期癌组织中p53与Gadd45a蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 p53与Gadd45a蛋白表达的变化在胃癌的发生发展中起到重要作用.两者的过表达可能与胃癌的恶性生物学行为有关.
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双氢青蒿素对MRL/lpr SLE小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响研究
目的探讨双氢青蒿素对MRL/lpr系统性红斑狼疮(SLE)小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响.方法从MRL/lpr SLE小鼠脾脏获取CD4+ T细胞,进行体外细胞双氢青蒿素干预培养.通过CCK-8实验检测双氢青蒿素的细胞毒性, 高效液相色谱技术检测CD4+ T细胞基因组DNA甲基化水平,RT-PCR和Western blot检测CD4+ T细胞DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、生长阻滞和DNA损伤基因a(Gadd45a)mRNA和蛋白表达水平.结果双氢青蒿素对SLE小鼠CD4+ T的半抑制浓度(IC50)为62μmol/L.双氢青蒿素可抑制CD4+ T细胞增殖,且随着浓度的增加,对CD4+ T细胞增殖的抑制作用增强.双氢青蒿素干预后,CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平显著升高;且双氢青蒿素浓度越高,基因组DNA甲基化水平越高.双氢青蒿素干预培养后,SLE小鼠CD4+ T细胞DNMT1 mRNA和蛋白水平均明显上调,而Gadd45a mRNA和蛋白水平均明显下调,其作用与浓度有关.结论双氢青蒿素可能通过DNA甲基化调控机制发挥治疗SLE的作用.
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解毒化瘀颗粒调控急性肝衰竭大鼠肝细胞Cadd45a表达的实验研究
目的 探索解毒化瘀颗粒是否对急性肝衰竭大鼠肝细胞Cadd45a表达具有调控作用.方法 以LPS联合D氨基半乳糖构建急性肝衰竭大鼠模型,解毒化瘀颗粒干预治疗,成模后24h处死各组大鼠,分离肝细胞,Western Bolt和实时荧光定量PCR检测肝细胞Gadd45a蛋白和mRNA表达.结果 急性肝衰竭大鼠肝细胞Gadd45a蛋白和mRNA表达明显增高(与空白组比较,P＜0.05),而解毒化瘀颗粒可下调Gadd45a蛋白和mRNA表达(与模型对照组比较,P＜0.05).结论 高表达的Gadd45a参与急性肝衰竭病理进程,解毒化瘀颗粒可下调Gadd45a表达,影响Gadd45a下游生物学效应,可能包括抑制肝细胞凋亡.
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Gadd45a的表达调控与功能
哺乳动物细胞对于遗传毒性的刺激会产生一系列应答,如细胞周期阻滞,DNA修复和细胞凋亡等.Gadd45a在DNA损伤诱导的细胞应答中发挥重要作用.细胞内外环境的多种因素在转录水平、转录后水平、翻译后水平等多个层次对Gadd45a进行精确调节.Gadd45a通过与Cdc2相互作用调控细胞周期G2-M检测点,直接抑制Aurora-A激酶参与中心体稳定性的调节,通过G1-S期调控参与维持基因组的稳定性.Gadd45a参与p38/JNK、MAPK、线粒体介导的凋亡途径和NF-κB介导的生存通路调控.
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生长抑制和DNA损伤基因45 a在人不同组织类型涎腺肿瘤中的表达
目的：探讨生长抑制和DNA损伤基因45a (Gadd45a) mRNA在涎腺正常组织及其良、恶性肿瘤组织中的表达情况及其临床病理意义。方法应用逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)和实时荧光定量PCR (real-time PCR)方法检测30例正常涎腺组织和涎腺良、恶性肿瘤中Gadd45a mRNA的表达量。结果与瘤旁正常腮腺组织相比， Gadd45a mRNA在恶性肿瘤中的表达量降低； Gadd45a mRNA在多形性腺瘤中的表达量，在基底细胞腺瘤中的表达量亦降低， Gadd45a mRNA在腺淋巴瘤中的表达量未见明显变化。 Gadd45a mRNA在恶性肿瘤中表达较良性肿瘤(多形性腺瘤和基底细胞腺瘤)降低( P <0．05)。结论提示Gadd45a基因可能在涎腺肿瘤的发生发展中具有重要作用， Gadd45a mRNA在恶性涎腺肿瘤中低表达可能诱导了肿瘤细胞的恶性增殖。
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Gadd45a表达质粒的构建及在人类T细胞中的表达
目的:构建Gadd45a表达质粒,并诱导该质粒在人类T细胞中的表达.方法:采用反转录PCR法从人胚胎干细胞中扩增Gadd45a的蛋白质编码框,将之克隆至pcDNA3.1载体后,利用电穿孔方法将构建好的表达质粒pcDNA3.1-Gadd45a和空白质粒pcDNA3.1分别转染至Jurkat细胞或正常人CD4+T细胞,分别用荧光定量RT-PCR和Western blot的方法检测转染后细胞Gadd45a mRNA和蛋白的表达.结果:成功构建Gadd45a表达质粒pcDNA3.1-Gadd45a,转染该质粒的Jurkat和正常人CD4+T细胞均显示Gadd45a过表达.结论:Gadd45a表达质粒的构建及诱导其在人T细胞中的过表达为进一步研究Gadd45a在表观遗传学机制中的作用提供了研究基础.
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野生型p53对白血病K562细胞中心体过度复制的抑制作用
背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;近研究发现慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为严重的中心体异常.本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株,以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响.方法:用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞:未接受感染的细胞作为空白对照.流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达.间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化.Western blot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a(growth arrest and DNA damage)、BubR1(Bub 1 related)、Aurora A的表达.结果:成功建立携野生型p53基因的K562细胞株,腺病毒载体感染效率达60%以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达.感染72 h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常(n>2)的细胞比例降至(0.38+0.02)%.与空白对照组(0.72±0.14)%比较其差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubR1表达分别上调93%、88%.而Aurora A的表达下降56%(P值均<0.05).结论:重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达:野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活一非依赖途径使Aurora A的表达下降.从而抑制K562细胞中心体的过度复制.
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Gadd45a基因在寻常型银屑病皮损中的表达及意义
目的:检测寻常型银屑病皮损中生长阻滞和DNA损伤基因(Gadd45a)mRNA的表达水平及Gadd45a蛋白在皮损中的表达部位,探讨其在寻常型银屑病角质形成细胞异常增殖中的作用.方法:收集20例寻常型银屑病患者的皮损及20例健康对照皮肤组织,RT-PCR法检测Gadd45a mRNA的表达水平,采用免疫组化法检测Gadd45a蛋白的表达部位,并进行比较.结果:RT-PCR结果显示,与健康对照皮肤比较,寻常型银屑病皮损中Gadd45a mRNA的相对表达量为4畅51±1畅57,差异有统计学意义(P<0畅05);免疫组化结果显示Gadd45a蛋白主要表达于表皮角质形成细胞的胞浆中,在寻常型银屑病病皮损的角质形成细胞中为棕黄色颗粒,在健康对照皮肤角质形成细胞中为阴性或者偶见.结论:Gadd45a的高表达可能在寻常型银屑病皮损角质形成细胞的良性异常增殖中发挥了重要作用.
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热刺激对大鼠下丘脑神经损伤相关因子作用研究
目的 观察热刺激后,下丘脑瞬时电位感受器阳离子通道V1子类(TRPV1)、α-CGRP、β-CGRP、生长阻滞和DNA损伤基因(Gadd45a)及生长相关蛋白43(Gap43)的mRNA含量,探讨外周热刺激状况下,神经中枢的应答状况.方法 20只Wistar大鼠随机分为正常组与热刺激组,热刺激组用热的辣椒乙醇溶液灌胃及热烘饲养法饲养2周,观察大鼠活动、饮食及大小便状况,体视显微镜及HE染色法观察大鼠胃黏膜病理改变.同时用RT-PCR法检测两组下丘脑的TRPV1、α-CGRP、β-CGRP、Gadd45a及GAP43的mRNA表达情况.结果 热刺激组大鼠兴奋度增高,饮食及大小便都增加,但体质量增长减缓,体视显微镜及病理切片观察显示胃黏膜充血水肿,5种mRNA含量均明显升高(P＜0.05).结论 外周热刺激不但引发末梢感受器的组织损伤,也引发了下丘脑的神经细胞损伤,同时中枢产生活跃的组织修复活动,并增加神经递质的分泌,加强对温度调控信号的传递.
