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肾病综合征合并寻常性鱼鳞病临床特征及相关基因突变研究
目的 研究肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)合并寻常性鱼鳞病(ichthyosis vulgaris,IV)患儿的临床特征,探讨FLG基因及NPHS2基因与疾病之间的关系.方法 分析我院3例NS合并IV患儿的临床、病理资料,并采用聚合酶链反应-单链构象多态性、DNA测序法,分析患儿NPHS2基因及患儿和3个家系中的部分IV患者的FLG基因.结果 ①3例NS合并IV患儿(1号女性,2号、3号为男性)对激素及多种免疫抑制剂治疗反应均差,随访观察1.5～4年未缓解.②1号患儿的兄长死于"尿毒症",其他2个家系中无肾脏疾病患者.③初次肾活检,2例为轻度系膜增生性肾小球肾炎,1例为微小病变;其中2例患儿在第1次肾活检的1年半后,重复肾活检,进展为中度系膜增生性肾小球肾炎.④3例患儿及3个家系中部分IV患者均具有FLG基因常见的突变类型R501X 和(或)2282del4,没有发现NPHS2基因突变.结论 3例NS合并IV患儿对激素及免疫抑制剂均耐药,肾脏病理损害进展较快,提示患儿对激素及免疫抑制剂耐药可能与FLG基因相关联.
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中国南方汉族人家族性激素耐药型肾病综合征家系NPHS2基因突变
目的 分析中国南方汉族人家族性激素耐药型肾病综合征(SRNS)家系NPHS2基因突变及其特点.方法 研究对象为A、B、C 3个南方汉族人SRNS家系先证者及其姐和父母,50例尿检正常的南方汉族成年人作为对照人群.取所有研究对象外周静脉血3 ml,提取基因组DNA,PCR扩增NPHS2全部8个外显子及其周围的部分内含子和启动子全长序列,对PCR产物直接进行DNA序列测定.结果 对3个南方汉族人SRNS家系先证者NPHS2全部8个外显子及其周围的部分内含子进行突变分析,未发现NPHS2突变,仅在外显子8上检测到1个NPHS2基因多态性(954T＞C).在3个家系的先证者及其姐和父母的NPHS2启动子上检测到6个变异:-1715A＞G、-1709G＞A、-1000A＞T、-670C＞T、-116C＞T和-51G＞T.其中5个变异(-1709G＞A、-1000A＞T、-670C＞T、-116C＞T和-51G＞T)在100条正常染色体中也有检出,它们在SRNS患者中的等位基因频率分别与在对照人群中的等位基因频率比较差异均无统计学意义(P＞0.05);另1个变异(-1715A＞G)在家系C的先证者及其母亲(尿检正常)中检出,为杂合变异,而在100条正常染色体中未发现.-1000A＞T为新发现的NPHS2基因多态性,-1715A＞G为新发现的NPHS2变异.结论 NPHS2基因突变不是本研究3个南方汉族人家族性SRNS家系的主要致病原因.
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20例散发性激素耐药型肾病综合征儿童NPHS2和WT1基因突变分析
目的 初步分析散发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)JL童的NPHS2和WT1基因突变及其特点.方法选择20例南方汉族散发性SRNS儿童作为实验组,另选50例尿检正常的南方汉族成年人作为对照组.应用PCR、DNA直接测序法、PCR/限制性片段长度多态性进行NPHS2和WT1基因突变分析.结果 对20例SRNS儿童NPHS2和WT1基因的全部外显子及其周围的部分内含子进行检测,未发现NPHS2和WT1致病突变,但检测到2个已报道的NPHS2基因多态性(102G>A和954T>C)和6个WT1基因变异(5'-UTR-7G>T、126C>T、IVS3+16G>A、WS5-64A>G、903A>G和IVS7-32C>A).其中,IVS5-64A>G为新发现的WT1基因多态性.与对照组比较,实验组的1个NPHS2基因多态性(102G>A)和6个WT1基因多态性的基因型频率和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05).结论 NPHS2和wn基因突变不是本研究散发性SRNS儿童的主要致病原因.
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汉族成人局灶性节段性肾小球肾炎NPHS2突变研究
目的·通过大组测序研究分析汉族成人局灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)患者中NPHS2基因突变致病情况.方法·纳入上海交通大学医学院附属瑞金医院肾脏科的FSGS患者(起病年龄≥14岁),所有FSGS均经肾活检证实,并排除全身性疾病继发FSGS和其他遗传性肾脏病.抽提外周血基因组DNA,采用Sanger测序对NPHS2编码区和内含子交界区进行深度测序或进行高通量测序(包括全外显子组测序和Panel候选基因测序,所获突变Sanger测序验证).在100名健康人中验证所得突变.结果·研究共纳入204例FSGS患者,家族性患者52例(25.5%),散发性患者152例(74.5%),其中散发患者中激素抵抗性FSGS患者占30.3%(46/152).61例患者采用Sanger测序,143例采用高通量测序,共发现2个新的NPHS2保守区突变,其中在散发激素抵抗性FSGS患者中发现1个纯合突变位点,p.N199I;家族性FSGS中发现1个杂合突变,p.L321fx346.对100名健康人进行测序未发现同样突变.SIFT、Polyphen和Mutation Taster评分提示突变可能致病.在本队列中FSGS患者的NPHS2突变检出率为1%.结论·汉族成人FSGS患者中NPHS2基因突变率较低,NPHS2突变并非汉族成人FSGS的主要致病基因.
关键词： 局灶性节段性肾小球肾炎 NPHS2 致病突变筛查 -
蛋白尿发生的分子遗传学机制
蛋白尿是儿科肾脏疾病常见症状,当尿蛋白水平＞50mg/(kg·d),同时伴低清蛋白血症、水肿及高脂血症时诊断为肾病综合征,其中大量蛋白尿是其关键的表现.蛋白尿发生主要与肾小球滤过屏障有关,长期以来人们围绕肾小球滤过屏障的电荷屏障及有关分子进行较多的研究,但蛋白尿发生的分子机制一直不明确.近5年来,国外通过研究先天性及遗传性肾病新认识,许多与蛋白尿发生、发展相关的基因及其编码的蛋白,为研究蛋白尿发生机制开辟新的途径.本文通过复习各种与遗传有关、以蛋白尿为主要表现的疾病介绍其相关的致病分子,有助于理解蛋白尿发生的分子遗传学机制.
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激素依赖型肾病综合征患儿NPHS2基因突变
目的 分析中国激素依赖型肾病综合征(SDNS)汉族儿童NPHS2基因突变及其特点.方法 分别取1例SDNS患儿及其父母、弟弟(汉族)及50例尿检正常成年人外周静脉血各3 mL,枸橼酸钠抗凝,提取基因组DNA.应用PCR方法扩增NPHS2基因的全部8个外显子及其启动子全长,对PCR扩增产物直接进行DNA测序.结果 在SDNS患儿NPHS2基因外显子5上检测到1个杂合错义突变-596AT;在NPHS2基因外显子8上检测到1个杂合同义突变 -954TC.在该患儿NPHS2基因启动子区检测到-116CT纯合变异,其母亲和弟弟NPHS2基因上也检测到596AT的杂合错义突变和954TC杂合同义突变.在其父亲和弟弟NPHS2基因启动子区检测到-116CT杂合变异.但患儿的父母和弟弟尿检均正常.596AT为新发现的突变,导致NPHS2基因的编码蛋白podocin的第199位的天冬氨酸(位于stomatin蛋白家族的高度保守区)变为异亮氨酸,即N199I.分析对照人群100条染色体,未发现NPHS2基因596AT突变;但检测到954TC同义突变和-116CT变异.结论 汉族肾病综合征患儿对激素依赖可能与NPHS2基因突变有关.
关键词： 激素依赖型肾病综合征 NPHS2 启动子 突变 中国人 -
散发性激素耐药型肾病综合征患儿30例足细胞基因突变分析
目的 分析散发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)儿童足细胞基因突变及其特点.方法 研究对象为30例散发性SRNS患儿和50例尿检正常的健康志愿者.采用PCR扩增NPHS1、NPHS2和CD2AP基因全部外显子及其周围的部分内含子,WT1 基因外显子8和9及其周围的部分内含子；应用DNA序列直接测定法对其PCR产物进行测序.结果 在10例应用激素和免疫抑制剂治疗肾病无缓解的SRNS患儿中,发现1例携带WT1基因杂合突变—1180C＞ T(R394W),1例携带NPHS1基因复合杂合突变—2677A＞ G( T893A)和*142T＞C,1例携带CD2AP基因杂合突变IVS13-137G＞A.在20例应用激素或免疫抑制剂治疗肾病缓解的SRNS患儿中,发现4例患儿携带NPHS1基因单杂合突变——928G＞A、IVS8+ 30C＞T、IVS21+ 14G＞A和IVS25-23C＞T,1例患儿携带CD2AP基因单杂合突变(IVS7-135G＞ A).结论 对激素和免疫抑制剂均耐药的SRNS患儿需进行足细胞基因突变分析.
关键词： 激素耐药型肾病综合征 NPHS1 NPHS2 CI2AP WT1 -
NPHS2及其基因产物Podocin与激素抵抗的肾病综合征
2000年在激素抵抗的肾病综合征中新克隆的NPHS2是一种结构基因,含有8个外显子,其编码蛋白podocin特异地表达于肾脏足突细胞,是裂孔隔膜相关的一种重要膜蛋白,属于stamatin蛋白家族,含有383个氨基酸残基,由于NPHS2突变造成裂孔隔膜功能异常,引起大量蛋白尿,不仅是家族性激素抵抗的肾病综合征、而且是散发性激素抵抗的肾病综合征的常见病因,该基因的发现不仅有助于阐明肾小球滤过屏障的结构和功能,而且有助于激素抵抗的肾病综合征预后的判断和治疗方案的选择.
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迟发性家族性局灶节段肾小球硬化的足细胞分子基因突变研究
目的 了解迟发性家族性局灶节段肾小球硬化(FSGS)的足细胞分子基因致病突变特点.方法 研究对象为上海瑞金医院肾脏科1997年9月至2007年10月收集的31个迟发性家族性FSGS家系.诊断标准:(1)成员年龄大于12岁;(2)1个家系中有2例或2例以上患者经肾活检证实为FSGS,或家系成员中有1例肾活检证实为FSGS,另有1例成员有蛋白尿或肾功能不全.100 例健康人为对照组.外周血基因组DNA经PCR扩增后直接对NPHS2、ACTN4、TRPC6基因行测序分析.结果 发现ACTN4基因新错义突变L316P,该家系患病成员起病年龄平均(38.7±7.4)岁,肾功能损害进展相对缓慢,家系3例患病成员均为突变杂合子.发现TRPC6基因新杂合错义突变Q889K,该家系患者起病年龄平均(38.0±4.2)岁.肾功能损害进展也较缓慢,家系中临床表现存在个体差异,家系中3例患病成员均为突变杂合子.发现TRPC6静止突变G467G.所有家系中未发现NPHS2致病突变.健康对照组200条染色体亦未发现以上突变.结论 在31例迟发性FSGS家系中发现2个家系携带致病相关突变:ACTN4新突变L316P和TRPC6新突变Q889K.在中国人群家族性迟发性FSGS中,ACTN4及TRPC6基因突变是致病原因之一,尚未发现NPHS2相关致病突变.
