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X-性连锁鱼鳞病两家系基因检测及产前诊断
目的 对2个X-性连锁鱼鳞病(X-linked ichthyosis,XLI)家系进行基因检测及胎儿产前诊断. 方法 应用染色体核型分析、细菌人工染色体标记-磁珠鉴别/分离技术(bacterial artificial chromosomes on-BeadsTM,BoBs)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术和微阵列单核苷酸多态性芯片(single nucleotide polymorphism array,SNP-array)技术,对未知鱼鳞病家族史的家系1和已知鱼鳞病家族史的家系2的羊水及外周血标本进行基因检测及胎儿产前分子诊断,并收集相关临床资料. 结果 (1)家系1:产前BoBs方法检测到家系1胎儿(Ⅳ-12)XC1探针为0.36～0.50,提示存在微缺失.孕妇(Ⅲ13) SNP-array检测结果显示Xp22.31区域存在1.68 Mb拷贝数缺失,丢失4个在线人类孟德尔遗传数据库(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)基因(分别为HDHD1、STS、VCX和PNPLA4).胎儿SNP-array结果为arr[hg 19]Xp22.31(6 455 151-8 135 644)×0,提示缺失遗传自母亲.FISH分析的结果证实胎儿STS基因缺失,核型结果为46,XY.孕妇表妹(Ⅲ-21)及表外甥(Ⅳ-14)同样存在STS基因缺失,缺失大小与孕妇及胎儿一致.结果 Ⅳ-12足月剖宫产出生,出生时皮肤未见异常,生后1周腹部出现白色鳞屑广泛附着,天气干燥时症状加重.对该例婴儿随访至8月龄,未发现其他临床症状.(2)家系2:SNParray结果显示,孕妇(Ⅲ-21)、先证者(Ⅳ-16)及胎儿(Ⅳ-17)在Xp22.31区域存在1.2 Mb拷贝数缺失,丢失4个OMIM基因(分别为HDHD1、STS、VCX和PNPLA4).FISH结果验证家系2胎儿STS基因缺失.胎儿核型结果为46,XY.结果Ⅳ-17足月剖宫产出生,出生时皮肤未见异常;至10日龄时,腹部出现白色鳞屑广泛附着.对该例婴儿随访至4个月,未发现其他临床症状. 结论 联合运用BoBs、FISH和SNP-array等分子遗传学技术有助于XLI的诊断及遗传咨询.
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肾病综合征合并寻常性鱼鳞病临床特征及相关基因突变研究
目的 研究肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)合并寻常性鱼鳞病(ichthyosis vulgaris,IV)患儿的临床特征,探讨FLG基因及NPHS2基因与疾病之间的关系.方法 分析我院3例NS合并IV患儿的临床、病理资料,并采用聚合酶链反应-单链构象多态性、DNA测序法,分析患儿NPHS2基因及患儿和3个家系中的部分IV患者的FLG基因.结果 ①3例NS合并IV患儿(1号女性,2号、3号为男性)对激素及多种免疫抑制剂治疗反应均差,随访观察1.5～4年未缓解.②1号患儿的兄长死于"尿毒症",其他2个家系中无肾脏疾病患者.③初次肾活检,2例为轻度系膜增生性肾小球肾炎,1例为微小病变;其中2例患儿在第1次肾活检的1年半后,重复肾活检,进展为中度系膜增生性肾小球肾炎.④3例患儿及3个家系中部分IV患者均具有FLG基因常见的突变类型R501X 和(或)2282del4,没有发现NPHS2基因突变.结论 3例NS合并IV患儿对激素及免疫抑制剂均耐药,肾脏病理损害进展较快,提示患儿对激素及免疫抑制剂耐药可能与FLG基因相关联.
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TGM1基因表达沉默对角质形成细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响
目的：观察转谷氨酰胺酶1基因（ TGM1）表达沉默前、后对角质形成细胞的细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响，探讨其机制。方法利用流式细胞仪（ FCM ）检测 RNA 干扰（ RNAi）技术沉默TGM1基因表达前、后人永生化角质形成细胞（ HaCaT细胞）的细胞周期状况；应用免疫细胞化学SP 法和Western 印迹法检测RNAi 技术沉默 TGM1基因表达前、后细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin B1、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）的表达差异。结果 TGM1基因沉默后，小干扰RNA（ siRNA）－TGM1转染组处于 G0／G1期的细胞数（78．27％±1．83％）明显高于阴性对照组（56．84％±2．72％，P＜0．05）和空白对照组（57．19％±3．72％，P＜0．05）；而S期和G2／M期的细胞数，siRNA－TGM1转染组（32．78％±5．48％、3．66％±0．30％）明显低于阴性对照组（57．32％±2．91％、9．39％±0．68％，均 P＜0．05）和空白对照组（55．71％±2．84％、9．77％±0．52％，均 P ＜0．05）。免疫细胞化学检测结果显示， TGM1基因沉默后 cyclinD1、cyclin B1、CDK4呈阴性表达；Western印迹法检测结果显示， TGM1沉默后cyclin D1、cyclin B1、CDK4的蛋白条带亮度明显降低。结论 TGM1基因沉默后能阻断HaCaT细胞的细胞周期，使细胞周期停留在S期，不能进入G2／M期，无法完成DNA的合成，未完成细胞的分裂；TGM1基因沉默可能通过抑制细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin B1、CDK4的表达影响表皮细胞的细胞周期。
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寻常性鱼鳞病合并肾病综合征1例
患者,男,24岁,因反复尿面泡沫增多伴双下肢水肿3年加重10天,于2010年8月11日入院.患者3年前无明显诱因下出现尿面泡沫增多,伴有双下肢可凹陷性水肿,在外院诊断为“肾病综合征”,肾活检示肾小球微小病变,给予口服醋酸泼尼松(65mg/d)治疗8周,效果不佳加用环磷酰胺冲击治疗11次,静脉用药,总量达8.8g,蛋白尿改善,醋酸泼尼松逐步减量,半年前症状基本缓解,遂停用醋酸泼尼松等治疗.10天前患者再次出现双下肢水肿,尿常规示尿蛋白(++++).有家族性鱼鳞病史,均为男性发病,否认食物或药物过敏史.
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先天性常染色体隐性遗传性鱼鳞病两家系ABCA12基因突变分析
目的 检测两个先天性常染色体隐性遗传性鱼鳞病家系ABCA12基因的突变情况.方法 根据典型的临床表现,2例先证者确诊为先天性常染色体隐性遗传性鱼鳞病.提取患者及其父母的外周血DNA,使用遗传性皮肤病多基因芯片对先证者进行高通量测序,确定突变位点,再用Sanger测序法对先证者和父母的DNA进行双向验证.结果 例1发现ABCA12基因上c.2759A＞G和c.7004A＞G两个复合杂合突变;例2发现ABCA12基因上c.6163_6164insT和c.7406G＞A两个复合杂合突变.2例患者的父母均是其中1个突变的携带者.对这4个突变进行功能预测显示,c.2759A＞G、c.7004A＞G和c.7406G＞A三个错义突变均有可能的致病作用,另外移码突变c.6163_6164insT编码的截断蛋白也可能影响蛋白质功能.c.2759A＞G、c.6163_6164insT为新发现的突变位点.结论 ABCA12基因复合杂合突变是两个家系先证者的致病突变.
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X连锁鱼鳞病并发Meleda角化病一例临床特征及SLURP-1和STS基因突变分析
目的 报道1例X连锁鱼鳞病并发Meleda角化病,并检测其基因突变.方法 收集临床资料,提取患儿及其父母外周血基因组DNA,PCR扩增SLURP-1和STS基因全部外显子及其侧翼序列,以100例健康人作为对照,对扩增产物行琼脂糖凝胶电泳检测,并对SLURP-1基因扩增产物进行DNA测序.结果 患儿躯干、四肢泛发规则排列的棕褐色或黑色多角形鳞屑,掌跖、肘膝、腹股沟、肛周红斑,过度角化,向背侧延伸,诊断为X连锁鱼鳞病并发Meleda角化病.基因检测提示,STS全基因缺失;SLURP-1基因第3外显子第286位核苷酸发生C→T纯合突变(c.286C＞T),导致其编码蛋白质在第96位氨基酸出现终止改变(p.R96*),其父母均为c.286C＞T杂合突变携带者.健康对照未发现此突变.结论 该患者携带STS全基因缺失和SLURP-1基因纯合无义突变,可能是导致X连锁鱼鳞病并发Meleda角化病的原因.
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寻常型鱼鳞病患者皮损中间丝聚合蛋白及其基因的改变
目的 探讨寻常型鱼鳞病患者中间丝聚合蛋白(FLG)基因突变与FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损组织中的表达及其临床意义.方法 采用SP免疫组化方法检测10例汉族寻常型鱼鳞病患者皮损及14例健康对照皮肤组织内FLG及兜甲蛋白的表达,用图像分析软件ImagePro plus(IPP)判定FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损及正常皮肤组织中表达的阳性单位(PU值).提取10例汉族寻常型鱼鳞病患者及100例健康对照者的基因组DNA,采用PCR及直接测序法,对FLG基因已报道的13个突变位点(3321delA、441delA、1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282de14、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X)进行测序.结果 FLG在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤角质层、颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达,胞质染色多见;寻常型鱼鳞病皮损阳性染色PU值明显低于健康对照皮肤(分别为0.2082±0.0080和0.2300±0.0228,两组比较,t=3.30,P＜ 0.01).兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达,胞质及胞核染色多见;寻常型鱼鳞病皮损表达的PU值明显低于健康对照皮肤(分另为0.1370±0.0112和0.1493±0.0073,两组比较,f=3.07,P＜ 0.01).7例寻常型鱼鳞病患者检测到FLG 3321delA突变位点,2例检测到FLG 441delA突变位点,健康对照组未检测到FLG基因突变位点.结论 FLG(3321delA,441delA)可能是汉族寻常型鱼鳞病患者的突变位点之一.FLG及兜甲蛋白表达下降可能与寻常型鱼鳞病患者皮肤屏障功能障碍有关.
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板层状鱼鳞病TGM1基因突变研究
目的探讨一个板层状鱼鳞病家系转谷氨酰胺酶1基因(TGM1)的突变.方法提取板层状鱼鳞病患者及家族成员的基因组DNA,采用PCR扩增TGM1基因所有的外显子及其邻近的剪切点并进行双向直接测序,并对TGM1基因的同源性进行分析.结果板层状鱼鳞病患者TGM1基因存在异常:外显子3的第504位碱基由胞嘧啶突变为胸腺嘧啶,使第142位氨基酸由精氨酸(R)转变为半胱氨酸(C),即R142C错义突变;外显子7的第1122位碱基由胞嘧啶突变为胸腺嘧啶,使348位氨基酸由精氨酸(R)突变为终止密码(R348X),导致其编码的蛋白缺失了C端的470个氨基酸.其父亲为R142C杂合子,母亲为R348X突变杂合子;R142C错义突变位于TGM1基因保守区域.结论该板层状鱼鳞病患者存在转谷氨酰胺酶1基因的R142C错义突变和R348X无义突变.
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表皮松解性角化过度鱼鳞病COL7A1基因突变研究
目的 探讨一个表皮松解性角化过度鱼鳞病家系基因的突变.方法 提取表皮松解性角化过度鱼鳞病患者及家族成员的基因组DNA,采用PCR扩增COL7A1基因所有的外显子及其邻近的剪切点并进行双向直接测序,用PCR检测突变位点从而进一步确定家系的致病原因.结果 发现患者COL7A1基因的一条等位基因第2号外显子上存在S48P的错义突变,而另一条等位基因第27号外显子上存在3625del 11缺失突变,造成编码区阅读框架的移位,终导致蛋白终止密码(PTC)的生产.结论 COL7A1基因的缺失突变和错义突变引起该患者临床症状的特异突变.
关键词： 鳞癣 表皮松解 突变 编码Ⅶ型胶原的COL7A1基因 -
TGM1基因表达沉默对角质形成细胞分化及角质化包膜形成相关蛋白表达的影响
目的 观察转谷氨酰胺酶l基因(transglutaminase 1,TGM1)表达沉默前、后对角质形成细胞的分化及角质化包膜形成相关蛋白表达的影响.方法 应用免疫细胞化学SP法和Western印迹法检测RNA干扰(RNAi)技术沉默TGM1基因表达前、后角质形成细胞分化标志物K10、内披蛋白、丝聚蛋白及角质化包膜形成相关的兜甲蛋白和富含脯氨酸的小蛋白(small proline-rich proteins,SPRRs)的表达差异.结果 免疫细胞化学检测显示:TGM1沉默后细胞K10、兜甲蛋白和富含脯氨酸的小蛋白呈弱阳性表达或阴性表达,而内披蛋白和丝聚蛋白呈中等阳性表达或强阳性表达;Western印迹法检测结果显示,TGM1沉默后K10、兜甲蛋白和富含脯氨酸的小蛋白的蛋白条带亮度明显降低,而内披蛋白和丝聚蛋白条带亮度与空白对照组和阴性对照组相比没有明显改变.结论 TGM1基因沉默可能通过抑制K10的表达影响表皮细胞分化;通过抑制角质化包膜形成相关蛋白兜甲蛋白和富含脯氨酸的小蛋白的表达影响表皮细胞角质化包膜的形成.
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盐酸特比萘芬凝胶联合盐酸布替萘芬乳膏治疗花斑癣60例疗效观察
花斑癣是一种浅表性真菌病。以色素减退或加深的糠秕状脱屑斑为特征，好发于躯干等出汗多的部位，多见于夏秋炎热季节［1］。笔者采用盐酸特比萘芬凝胶联合盐酸布替萘芬乳膏外用治疗花斑癣取得较好疗效，现报告如下。
