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膀胱癌组织中染色体3q26.1小片段高频率缺失及其意义
目的 探讨人膀胱尿路上皮癌组织中染色体3q26.1小片段拷贝数改变及其临床意义.方法 采用微阵列比较基因组杂交(array comparative genomic hybridization,Array-CGH)技术分析35例膀胱癌组织(Ta～T118例,T2～T417例)基因组DNA(区段/基因)拷贝数改变.采用实时荧光定量PCR验证57例冻存膀胱癌组织(Ta～T125例,T2～T4 32例),34例甲醛固定石蜡包埋膀胱癌组织(Ta～T115例,T2～T419例),以及29例膀胱癌患者术前尿脱落细胞和15例健康志愿者尿脱落细胞中3q26.1小片段拷贝数的改变情况.结果 Array-CGH分析显示,膀胱癌组织中存在染色体3q26.1中一个小片段的高频率缺失,缺失率为77.1%(27/35).实时荧光定量PCR验证发现,57例膀胱癌冻存组织和34例膀胱癌固定包埋组织中该3q26.1小片段高频率缺失率分别为78.9%(45/57)和100.0%(34/34);膀胱癌患者术前尿脱落细胞中3q26.1小片段的相对拷贝数(中位数为0.0020)与正常对照组(中位数为0.0030)相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 染色体3q26.1小片段缺失是膀胱尿路上皮癌特征性的DNA分子水平异常改变.尿脱落细胞的3q26.1小片段缺失有可能成为膀胱癌的分子标志物.
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不同质量精子线粒体DNA拷贝数及完整性的比较研究
目的 探讨精子线粒体DNA (mtDNA)拷贝数与完整性与男性不育的相关性.方法 选取正常精液样本18例,异常精液样本34例,采用Percoll液密度梯度离心将样本分为30％层和80％层精子,并采用实时荧光定量PCR技术测定精子mtDNA拷贝数及长链PCR技术测定mtDNA完整性.结果 在80％层精子中,少精子症组mtDNA拷贝数[(1.52±0.68)个]和少弱精子症组[(1.93±0.65)个]与正常组[(0.80±0.45)个]比较,差异有统计学意义(P＜0.01);少弱精子症组mtDNA完整性(0.93±0.27)与正常组(2.70±1.74)、弱精子症组(3.24±2.18)及少精子症组(1.76±0.76)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).在30％层精子中,少精子症组mtDNA拷贝数(13.33±9.96)和弱精子症组(1.92±1.29)与正常组(4.85±3.00)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 质量差的精子中存在mtDNA拷贝数增加及完整性减弱,mtDNA的检测可能成为预测精子质量的一个指标.
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利用单线虫两重PCR技术对秀丽隐杆线虫线粒体DNA拷贝数进行相对定量的方法
目的 基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法.方法 首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物设计软件MPprimer和引物特异性评估软件MFEprimer V2.0设计两重PCR引物;然后针对以单线虫为PCR扩增模板的处理条件进行摸索,包括蛋白酶K的消化浓度及反应时间;后研究秀丽隐杆线虫nDNA片段和mtDNA片段扩增后到达平台期的时间,进而比较不同循环数扩增下秀丽隐杆线虫线粒体拷贝数相对定量的可行性.结果 单线虫经蛋白酶K 60℃消化及95℃灭活处理后,能较特异地扩增出nDNA和mtDNA;单线虫PCR模板的处理条件为50 μg/ml蛋白酶K 60℃处理2 min并于95℃灭活10 min;线粒体拷贝数相对nDNA而言,趋于稳定的PCR循环数为26.结论 建立了一种以为nDNA内参快速相对定量线粒体拷贝数的方法,为线粒体DNA拷贝数相关的实验研究提供了技术支撑.
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肠型胃癌原发灶与淋巴结转移灶癌细胞染色体异常特征的比较
目的 探讨胃癌发生淋巴结转移的机制,寻找和定位与胃癌转移相关基因.方法 本研究应用比较基因组杂交技术分析和比较了15例肠型胃癌患者原发灶和其对应的淋巴结转移灶癌细胞染色体基因组改变特征.结果 较常见染色体DNA拷贝数扩增的部位是8q,13q,20和7;较常见染色体DNA拷贝数丢失的部位是1p,17p,19,21q和22q.其中,有意义的发现是20q12-13扩增,21qcen-21丢失,4q丢失,14q22-ter丢失.结论 本研究结果表明胃癌原发灶和淋巴结转移灶癌细胞染色体基因改变显著的部位是20q扩增,及21q,4q和14q的丢失;提示在这些部位可能存在与胃癌淋巴结转移相关的基因.
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荧光定量PCR检测289例乙型肝炎病毒DNA意义分析
目的荧光定量PCR检测血样中乙型肝炎病毒DNA拷贝数,探讨血清HBV-DNA检测结果与HBV抗原抗体(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)5项标志物(HBV-M)间的关系及临床意义.方法采用荧光定量PCR和ELISA法分别检测289例乙肝患者血样.结果 122例HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性血样中,HBV-DNA阳性检出率98.4%;89例HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性血样中,HBV-DNA阳性检出率42.7%;27例HBsAg、HBcAb均阳性血样中,HBV-DNA阳性检出率29.6%;6例HBV-M全阴性血样中,1例HBV-DNA呈弱阳性.结论只有检测HBV-DNA才能确定HBV的真实感染和复制情况.荧光定量PCR检测HBV-DNA作为判断乙肝病毒感染、复制及传染性强、弱等的确定依据,在追踪患者预后及流行病学上有一定意义.
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杭州地区乙肝表面抗原阳性孕妇300例前S1蛋白与DNA拷贝数变化趋势分析
目的：分析乙型肝炎病毒（ HBV）前S1蛋白与HBV-DNA拷贝数的变化趋势。方法选取医院就诊的300例乙型肝炎表面抗原阳性孕妇，检测HBV前S1蛋白表达情况和HBV-DNA拷贝数，对结果进行分析。结果HBsAg阳性、e抗原（HBeAg）阳性、核心抗体（HBcAb）阳性的患者前S1蛋白阳性率为92．38％。 HBsAg阳性、HBcAb阳性患者前S1蛋白阳性率为16．15％。随着HBV-DNA拷贝数的增加，前S1蛋白的阳性率亦不断上升，在HBV-DNA拷贝数＞108 copies／ml时，前S1蛋白的阳性率达到100％。结论前S1蛋白能较好地反映体内的HBV情况，在乙肝五项检测的基础上联合检测前S1蛋白的表达水平，可为低水平HBV感染患者的早期诊断提供参考。
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线粒体DNA拷贝数:一种新型的职业与环境暴露生物标志
线粒体是职业和环境化学物毒效应的重要靶细胞器,线粒体相应结构和功能指标可能成为化学物暴露的早期效应标志.本文综述了外周组织线粒体DNA拷贝数(mtDNAcn)在职业和环境化学物暴露下的变化特征,苯、二甲基甲酰胺等有机溶剂及多环芳烃暴露可增加mtDNAcn,但空气颗粒物与烟草烟雾的长期暴露却又能降低mtDNAcn,因而表明mtDNAcn在不同毒物及其暴露时间和剂量下可能会出现不同的效应特征,mtDNAcn在职业和环境化学物早期危害效应监护中的作用值得研究.
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乙型肝炎病毒携带者血清HBV DNA拷贝数与甲胎蛋白分析
目的 分析乙型肝炎病毒携带者的血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数及甲胎蛋白含量,探讨乙型肝炎病毒DNA拷贝数与甲胎蛋白含量之间的相关性.方法 收集临床已确诊的乙型肝炎病毒携带者30例,其中男18例,女12例.通过实时荧光定量PCR法测定乙型肝炎病毒携带者的乙型肝炎病毒DNA拷贝数,采用化学发光法测定血清甲胎蛋白的含量.结果 乙型肝炎病毒携带者的血清甲胎蛋白含量均值为(5.2±3.3) g/L,比正常人的(3.8±1.3) g/L略高(P<0.05),但乙型肝炎病毒携带者的血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数与甲胎蛋白含量相关性较弱,相关系数为 -0.201(P>0.05).结论 乙型肝炎病毒携带者的血清甲胎蛋白含量较正常人高,应定期随访和复查,但血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数高低并不代表肝细胞损伤的严重程度.
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更昔洛韦对小鼠单纯疱疹病毒性急性脑损伤的保护作用
目的探讨更昔洛韦(GCV)对单纯疱疹病毒(HSV)性急性脑损伤的保护作用及其机制.方法建立小鼠HSV急性脑损伤模型,比较GCV治疗前后小鼠生存状况、死亡率和电镜下脑组织结构变化;接种病毒后d7处死小鼠,通过荧光定量PCR检测脑组织中HSV-Ⅰ DNA的拷贝数.结果电镜下感染模型组小鼠脑细胞胞浆水肿明显,核仁固缩,核内结构破坏,多数线粒体呈空泡样改变,核仁内可见病毒颗粒内脊破坏、髓鞘严重松解、破坏.GCV治疗后小鼠症状明显好转,体质量增加理想,死亡率明显降低,脑组织病理损害明显减轻,小鼠脑组织中HSV-Ⅰ DNA拷贝数也显著低于模型组.结论 GCV能有效抑制HSV-Ⅰ复制,减轻临床症状、脑组织损伤,降低小鼠HSV急性脑损伤的死亡率.
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乙型肝炎病毒感染者血清HBV DNA水平与HDL-C的相关性
目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清HBV DNA和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,探讨血清HBV DNA拷贝数与HDL-C水平的相关性.方法 收集116例HBV感染者血清,通过实时荧光定量PCR法测定血清HBV DNA拷贝数,通过选择性抑制均相测定法分析血清HDL-C值；计算HBV DNA拷贝数与HDL-C的相关系数,并对相关系数进行显著性检验.结果 在乙型肝炎病毒感染者中,血清HBV DNA拷贝数对数均值为(4.18±1.77 )/ml,分布范围为(1.38～7.85)/ml；血清HDL-C浓度均值为(1.30 ±0.29) mmol/L,分布范围为(0.66～2.01)mmol/L.血清HBV DNA拷贝数与HDL-C水平存在负相关(r=-0.5346,P=0.0023).结论 HDL-C对乙型肝炎病毒的复制有抑制作用.
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人肝细胞癌中c-Myc DNA拷贝数的检测及其意义
目的:检测原发性肝癌及其癌旁组织中c-Myc基因DNA含量,探讨c-Myc基因DNA拷贝数的变化与肝癌发生的关系.方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应(RT PCR)法扩增89例肝癌及相应癌旁组织中c-Myc基因DNA,并用磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作内参照,比较肝癌及相应癌旁组织中c-Myc基因DNA拷贝数的差异及与临床特征间的关系.结果:肝癌组织中c-Myc基因DNA拷贝数为6.12±3.57,癌旁组织为5.28±2.03,差异具有统计学意义(P＜0.05),低分化与高分化组间及高分化与中分化组间的癌组织c-Myc的DNA拷贝数差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:肝癌组织c-Myc基因DNA拷贝数与肝癌发生有密切关系.
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5个膀胱癌相关基因片段的DNA拷贝数改变及其意义
目的:探究本实验室前期工作发现的膀胱癌患者肿瘤组织中DNA拷贝数高频率改变的5个基因片段是否为中国(汉族)人膀胱癌特征性的异常改变.方法:针对上述5个DNA片段:CEP63、FOSL2、GHR、PAQR6、ZFAND3,采用实时荧光定量PCR技术,分析比较它们在白种人来源的商品化基因组DNA、30例健康中国汉族人外周血白细胞、51例膀胱癌患者肿瘤组织及配对的外周血白细胞的基因组DNA样品中拷贝数改变的情况.结果:除ZFAND3外,另外4个基因在白种人商品化基因组DNA与中国健康人外周血白细胞样品之间均存在DNA片段拷贝数差异.与中国健康人外周血白细胞相比,膀胱癌患者肿瘤组织中CEP63、GHR和PAQR6 DNA片段拷贝数均增加(P均＜0.05),FOSL2和ZFAND3拷贝数均无显著改变(P均＞0.05);膀胱癌患者的外周血白细胞样品中CEP63和PAQR6拷贝数均增加(P均＜0.01),FOSL2和ZFA ND3拷贝数均减少(P均＜0.01),而GHR拷贝数无显著改变(P=0.220).与膀胱癌患者自身外周血白细胞基因组DNA相比,在肿瘤组织中,CEP63、FOSL2、GHR和ZFAND3拷贝数均增加(P均＜0.01),而PAQR6拷贝数无显著改变(P=0.325).结论:基因CEP63、FOSL2、GHR和PAQR6在中国汉族人与白种人之间存在DNA片段拷贝数差异.在汉族人中,CEP63、GHR基因片段的拷贝数增加很可能是在膀胱癌发生发展过程中获得的基因异常改变;而PAQR6拷贝数增加则可能是膀胱癌患者所携带的遗传变异.
