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韩国第一家血糖仪生产企业——AIIMedicus公司
AIIMedicus公司作为韩国第一家血糖仪生厂商,是韩国三大血糖仪生产商之一,十多年来一直致力于血糖仪技术研发.AIIMedicus公司是世界上第一家商业化采用纯金试纸的血糖仪生产商.所有型号血糖仪均采用纯金电极和葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH第三代反应酶)试纸.公司生产车间为30万级净化车间(国内厂家均为10万级),试纸年产能达3亿条(一班工时).AIIMedicus公司的产品已经出口欧美等50多个国家,即使在全世界市场标准为严格的德国也打开了市场.
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揭示血糖检测仪技术的真相
近有媒体对血糖仪试纸受干扰一事进行报道,这可能让许多患者产生困惑.为避免读者的错误理解,对血糖仪可能受到的干扰需做如下解读:误区一 采用葡萄糖脱氢酶(GDH-PQQ)技术的血糖试纸在中国引起死亡事实:中国监查部门尚未收到任何采用葡萄糖脱氢酶(GDH-PQQ)技术的血糖试纸引起的相关不良事件报告.
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罗氏巧言搪塞称无须召回
美国食品药品监督局(FDA)曾经连续3次发出缺陷警告,使用葡萄糖脱氢酶(GDH-PQQ)技术的血糖仪或试纸,可能会造成异常的低血糖、昏迷甚至是死亡.2009年8月,FDA再次发出警告.因为从1997～2009年间,美国FDA已经接到13起致命报告.尽管如此,这并不妨碍使用这种技术的外资血糖仪在中国旺销.
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如何选择合适您的血糖仪
目前市面上的血糖仪主要有两种,基于葡萄糖氧化酶的血糖仪和基于葡萄糖脱氢酶的血糖仪.两种机器的差异主要体现在对氧含量、药物、其他糖类物质的抗干扰程度.
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毛细血管血糖测定在临床的应用
近几十年来除原来的实验室血糖测定外,应用袖珍血糖仪进行毛细血管血糖测定已日益普遍,现就毛细血管血糖测定做一简介.1毛细血管血糖测定的原理一般为葡萄糖氧化酶比色反应,此酶催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸及过氧化氢,后者被过氧化物酶催化产生颜色反应,通过与试纸条包装盒上的标准色板进行比较或通过散射仪测出读数,某些可通过电化学反应产生的电流进行测定,还有的仪器改用已糖激酶或葡萄糖脱氢酶进行类似反应测定血糖.
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血糖仪测定毛细血管和静脉血糖的结果比较
糖尿病是一种日益多发的常见病,血糖检测是其治疗过程中必不可少的环节.Advantage血糖仪是罗氏诊断公司(原德国宝灵曼公司)生产的一种新型血糖测定仪, 该仪器使用测定电流的生物感受器(biosensor),通过电化学反应来测量血糖.现在罗氏公司推出优越-Ⅱ试纸,每片试纸的黄色区域含有葡萄糖脱氢酶,血液中葡萄糖与之发生电化学反应而产生电流,电流的大小与葡萄糖浓度成正比,试纸产生的电流量被血糖仪测量,然后转化为血糖值.为评价Advantage血糖仪的性能,我们用该仪器同步测定了毛细血管和静脉全血血糖各304次,并与日立7150型自动生化分析仪测定的静脉血糖(304次)作了比较,现把结果报告如下.
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酶催化制备(R)-2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙醇
采用基因重组大肠杆菌表达(R)-羰基还原酶,通过优化诱导温度、碳源类型和补料速度,初步确定佳产酶条件:诱导温度为28℃,碳源类型为葡萄糖,佳补料速度为20 ml/h,产酶活力提高至63.1 U/g.利用葡萄糖脱氢酶耦合(R)-羰基还原酶催化制备奈必洛尔关键中间体(R)-2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙醇,确定葡萄糖脱氢酶和羰基还原酶的佳投酶量.当底物2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙酮投料量为5 g时,葡萄糖脱氢酶和(R)-羰基还原酶的佳投酶量为1 000U和120U,所制备目标化合物纯度98.3％,收率91％,手性HPLC纯度为99.6％,手性GC纯度为98.5％.
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gdh和ldh基因共表达重组大肠杆菌合成D-乳酸研究
D-聚乳酸是一种生物可降解材料,具有高热稳定性,生物合成其单体D-L酸将具有广阔的前景.以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增葡萄糖脱氢酶基因gdh,与表达载体pETduet-1连接获得pETduet-GDH;再以粘质沙雷氏菌基因组DNA为模板,PCR扩增乳酸脱氢酶基因ldh,与已构建的pETduet-GDH连接获得pETduet-LG,转化E Coli BL21共表达.过表达GDH和LDH大肠杆菌可不对称还原丙酮酸合成D-乳酸.经全细胞转化条件优化发现,添加NAD+能提高起始反应速度,在佳温度37℃、0.2 mol/L磷酸缓冲液、pH7.0、细胞浓度OD值为40和丙酮酸20 g/L时,底物转化率可达86.5％,D-乳酸产量为17.3 g/L.
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葡萄糖脱氢酶缓释系统PL-γ-PGA纳米颗粒的制备及研究
γ-聚谷氨酸( γ-PGA)是一种由枯草芽孢杆菌发酵生产的阴离子聚合物,具有良好的吸水性、生物相容性和生物降解性,无毒性且可由人体降解代谢,是一种很理想的药物载体.发酵得到的γ-PGA一般都具有很高的分子量,本文通过酸水解的方法,得到分子量符合药物载体要求的γ-PGA,并采用离子凝胶法,在水相反应体系中由低分子量γ-PGA与聚赖氨酸(PL)制备得到形态及表面特性良好的PL-γ-PGA纳米颗粒,粒径200～500 nm.在此基础上,制备了搭载葡萄糖脱氢酶(PQQ-GDHs)的PL-γ-PGA纳米缓释系统,载药效率达到61.2％,并且具有很好的稳定性,在体外模拟胃肠道和血液系统的缓释结果表明,分别有31.7％和40.2％的PQQ-GDHs在前48 h被释放.
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重组葡萄糖脱氢酶基因的表达研究
目的:将重组的葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中表达,优化表达条件,以期获得较高活力的葡萄糖脱氢酶.方法:将枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达,经对发酵时间、诱导物浓度、诱导时间以及细胞破碎等条件的控制,实现葡萄糖脱氢酶的高表达.结果:重组质粒转化菌发酵2 h后进入对数生长期,诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导2.5～3 h后用240 W超声破碎细胞,表达的粗提酶活力比诱导前提高了近千倍.SDS-PAGE电泳显示重组菌能表达单体分子量为31.5KD的特异性蛋白.结论:表达质粒的拷贝数、宿主菌培养条件、细胞破碎方式等均能影响酶的表达量.
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枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶的克隆和表达
目的:运用分子生物学手段获得葡萄糖脱氢酶基因,并表达该基因.方法:根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因序列设计引物,通过PCR获得该基因并与源序列进行比较分析,与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达,并在全自动生化分析仪上用速率法测定其活性.结果:克隆到的葡萄糖脱氢酶基因与源基因的同源性为99%,克隆到的GDH编码的氨基酸序列167位左右存在突变:EVI(GAAGTGATT)→AF(GCGTTT),利用酶的初提液测定的葡萄糖脱氢酶活力为75 U/L,比活性为10 U/mg.结论:运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,与表达载体连接后的重组体经大肠杆菌初步表达有活力,经诱导有望获得高产量的葡萄糖脱氢酶,从而为临床服务.
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葡萄糖脱氢酶连续监测法的研究
目的:建立葡萄糖脱氢酶连续监测法,优化其检测条件. 方法:按酶连续监测法测定要求,对克隆的枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶表达酶液进行测定,确定反应体系的底物浓度、适pH、反应温度、延滞时间、测定时间、检测范围等. 结果:以葡萄糖和NAD+为底物时,用连续监测法检测葡萄糖脱氢酶是可行的.当葡萄糖、NAD+的终浓度分别为100 mmol/L和2 mmol/L时,在反应pH 7.4,37℃,延滞时间30 s,测定时间60 s等条件下,检测上限可达10 000 U/L. 结论:连续监测法能用于测定葡萄糖脱氢酶,快速简便,结果可靠.
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葡萄糖脱氢酶的研究进展
葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase, GDH, EC1.1.1.47)是可从多种微生物和组织中获得的一种氧化还原酶,催化下列反应:
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高气压条件下使用快速血糖仪的准确性和差异性分析
国内外已有研究证实快速血糖仪检测血糖结果是可靠的,且因其体积小、用血少、检测快、便携带、易操作等优点,目前已广泛应用于临床工作中[1,2].然而,高气压环境下快速血糖仪的使用未见报道.本文对0.2 MPa(2ATA)环境下使用快速血糖仪检测血糖情况进行试验研究,结果报告如下.1 资料与方法1.1 一般资料 选择9名健康志愿者.为保证所测血糖值具有一定的代表性,尽可能得到相对大的血糖范围,使9名志愿者分别空腹,进舱前0.5 h以内进食和进舱前1.5h以内进食.
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如何选择适合自己的血糖仪
目前市面上的糖尿病血糖仪主要有两种,分别是基于葡萄糖氧化酶的血糖仪和基于葡萄糖脱氢酶的血糖仪.两种机器的差异主要体现在对氧含量、药物、其他糖类物质的抗干扰程度.
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巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的重组和表达研究
目的 运用聚合酶链反应技术从巨大芽孢杆菌中获得葡萄糖脱氢酶基因,并表达该基因.方法 根据巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因两端序列设计引物,通过PCR获得该基因,与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行诱导表达.结果 重组基因表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定显示特异性条带,并且酶活力达15 u/mL,比活力为10 u/mg.结论 运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,经诱导获得了较高产量的葡萄糖脱氢酶.
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重症患者床旁指端血糖监测的准确性、一致性评价及影响因素分析
目的:评价重症患者床旁指端血糖监测的准确性及一致性,分析影响因素.方法:依据指端皮肤状况,将280例危重患者分为皮肤正常组(177例)和皮肤异常组(103例).分别采用葡萄糖氧化酶法(GOD法)和葡萄糖脱氢酶法(GDH法)检测患者指端血糖值,以实验室血糖测定值为标准对照,对两组检测值进行准确性、一致性评价及影响因素分析.结果:(1)指端皮肤异常组患者位于临床准确区的检测值低于正常组,位于数据错误区的检测值高于正常组.(2)指端皮肤异常组患者血糖检测值绝对误差及相对误差均显著高于正常组(P < 0.01),与标准对照值间差值平均水平高于正常组.(3)患者血糖水平、平均动脉压、指端皮肤状况等进入回归方程.结论:重症患者血糖水平、平均动脉压及指端皮肤状况影响指端快速血糖检测准确性.指端皮肤异常情况下,血糖监测的准确性及一致性均呈现降低.
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不同分析原理POCT血糖仪的测定结果分析
目的 比对床旁检测(POCT)血糖仪的测定结果与主要性能,初步分析不同分析原理可能对血糖仪测定结果的影响.方法 用生产厂家校准过的葡萄糖氧化酶光化学法、葡萄糖氧化酶电化学法和葡萄糖脱氢酶电化学法3种分析原理的POCT血糖仪[强生稳步倍加型血糖仪(仪器Ⅱ)、强生稳豪倍优型血糖仪(仪器Ⅲ)、罗氏优越AdvantageⅡ型血糖仪(仪器Ⅳ)]进行精密度实验和配对比对实验,并将其与日立公司7600-020生化分析仪(仪器Ⅰ)测定结果进行性能比较分析.结果 仪器Ⅱ、仪器Ⅲ及仪器Ⅳ的血糖测定精密度实验结果分别为5.45、5.54和5.53 mmol/L,测定结果差异无统计学意义(P>0.05);3种血糖仪测定变异系数(CV)分别为2.48%、3.07%和2.17%;3种血糖仪与仪器Ⅰ血糖测定的配对实验直线斜率分别为0.972、0.978和0.949,直线相关系数为0.958、0.946和0.981.结论 三种分析原理血糖仪测定精密度符合国家标准,测定结果无统计学差异,与生化分析仪配对比较具有良好的直线回归和直线相关关系,可以满足临床快速血糖测定和患者的血糖自我监测的需要.
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葡萄糖脱氢酶基因的重组和表达研究
目的 为获得较高活力的葡萄糖脱氢酶.方法 根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因两端序列设计引物,以枯草芽孢杆菌WB600基因组DNA为模板,通过聚合酶链反应(PCR)获得该基因,与表达载体pET 22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达,并在半自动生化分析仪上用速率法测定其活性.结果 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,重组菌能表达单体分子量为31.5 kD的特异性蛋白.通过对重组基因表达条件的研究发现,诱导剂(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)浓度为0.5 mmol/L,诱导2.5～3 h后用240 W超声破碎细胞,可实现该基因的较高表达.结论 运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,重组基因经大肠杆菌诱导表达,获得了较高活力的葡萄糖脱氢酶,经纯化后可为临床服务.
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重症患者病情严重程度对入室即时血糖检测的影响分析
目的 研究重症患者病情严重程度对入室即时血糖检测准确性的影响.方法 选取240例危重患者,依据入室APACHEⅡ评分,分为3组:①低评分组,APACHEⅡ评分＜10分,95例;②中评分组,APACHEⅡ评分10～20分,95例;③高评分组,APACHE Ⅱ评分≥20分,50例.分别采用葡萄糖氧化酶法(GOD法)和葡萄糖脱氢酶法(GDH法)检测患者入室即时血糖值,并以实验室己糖激酶法(HK法)检测值为标准对照,对不同评分组间即时血糖检测值的准确性、一致性进行评价及误差分析.结果 ①Clarke误差表格分析显示伴随APACHEⅡ评分的升高,患者入室即时血糖检测值的准确性呈下降趋势.②Bland-Altman分析显示伴随APACHEⅡ评分的升高,患者入室即时血糖检测值与标准对照值间的一致性呈降低趋势.③误差分析显示伴随APACHEⅡ评分的升高,患者入室即时血糖检测值的绝对误差及相对误差呈增大趋势.结论 重症患者病情严重程度影响入室即时血糖检测的准确性,即APACHE Ⅱ评分越高,即时血糖检测的准确性及一致性可能越低,误差发生风险显著增加.
