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ANXA2和ANXA4在胃腺癌中的表达及临床意义
目的:研究膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)、膜联蛋白A4(Annexin A4,ANXA4)在人体胃腺癌(gastric adenocarcinoma cells,GAC)的表达,探讨其表达与GAC生物学行为的关系及两种蛋白的相关性.方法:免疫组织化学SP法检测组织芯片中75对配对的GAC和其相应癌旁组织ANXA2和ANXA4的表达,结果:在GAC和癌旁组织中ANXA2、ANXA4的表达分别为:33.1％(25) vs 1.3％(1)、68.0％(51) vs 25.5％(13),二者在GAC的表达显著高于癌旁组织(x2=24.448,p=0.000; x2=39.353,P=0.000); ANXA2和ANXA4在GAC表达呈正相关(r=0.335,P=0.003)；两种蛋白的表达与GAC的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和分化程度有关(P＜0.05),与年龄、性别和远处转移无关(P＞0.05)；肿瘤大小与ANXA2表达有关(P＜0.01),与ANXA4表达无关(P＞0.05).结论:ANXA2和ANXA4的表达上调可能共同参与了GAC的发生、发展、浸润和转移,可作为临床预测GAC预后的标志物和治疗靶点.
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内异症不孕患者种植窗期子宫内膜组织中差异蛋白的表达及其与子宫内膜容受性的关系
目的 探讨内异症不孕患者种植窗期子宫内膜组织中差异蛋白的表达及其与子宫内膜容受性的关系.方法 采用荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱( MALDI-TOF-MS)技术,对因输卵管因素不孕接受腹腔镜治疗的非内异症患者(10例,对照组)和内异症(术后病理检查证实)不孕患者(10例,内异症组)种植窗期(排卵日后第6天)在位子宫内膜的差异表达蛋白进行筛选并鉴定；应用蛋白印迹法检测两组患者子宫内膜组织中表达差异明显的膜联蛋白A4蛋白的表达变化,探讨膜联蛋白A4与子宫内膜容受性的关系.结果 两组患者种植窗期子宫内膜有意义(上调或下调150％)的差异表达蛋白共7个,其中等电点为5.84,相对分子质量为36 100的蛋白在内异症组患者种植窗期的表达量较对照组减少348％,为差异表达明显的蛋白；经鉴定,此蛋白斑点肽指纹图谱为膜联蛋白A4,其蛋白相对表达量内异症组为7.2±0.9,对照组为17.8±2.6,两组比较,差异有统计学意义(t=7.654,P=0.002).结论 内异症不孕患者种植窗期子宫内膜存在多种差异表达蛋白,其中膜联蛋白A4蛋白表达量下调显著,可能与子宫内膜对胚胎的容受性下降有关.
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Annexin A4-EGFP融合蛋白的表达纯化及其凋亡检测能力初探
膜联蛋白(annexin)是一类进化保守的多基因家族蛋白,可与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl-serine,PS)结合,由于PS与许多重要疾病密切相关,具有作为药物发现新靶点的潜力,使得annexin具有良好的药物发现价值和新药研发前景.AnnexinA4(以下称A4)是膜联蛋白家族成员之一,参与多项细胞功能,如胞吐作用和凝血反应,所有这些功能与膜联蛋白可结合酸性磷脂的能力相关.目前对A4的功能尚不完全了解,获得足量的A4是深入了解A4的结构与功能的基础.为了克服传统从生物组织中提纯人源A4的方法得率不高,且较为复杂等问题,本文通过原核系统重组表达A4,以获取大量可溶性蛋白,探究其与PS的结合能力,为后续研究奠定基础.利用分子生物学的手段构建融合表达质粒pET28a-annexin A4-EGFP,大量表达、选用并比较了两种获取可溶性annexin A4-EGFP(以下称A4-EGFP)融合蛋白的纯化方法,同时检测A4-EGFP对凋亡细胞的识别能力.通过亲和层析纯化获得纯度为80％的A4-EGFP;而选用膜吸附纯化方式,终获得了纯度达90％的蛋白.流式细胞仪检测结果显示:A4-EGFP融合蛋白可识别和标记早期凋亡细胞,其与PS亲和力为79.58±11.68nmol·L-1,与A5-EGFP和PS的亲和力同处一个数量级.本文成功实现了A4-EGFP在原核体系中的高效可溶性表达,建立了简易、高效的分离纯化方法,获得了产率高达75.2 mg·L-1的A4-EGFP,为深入研究A4的功能及其潜在的应用奠定了基础.
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膜联蛋白A4与妇科肿瘤关系的研究进展
膜联蛋白A4（Anxa4）是膜联蛋白超家族中的重要成员之一，介导细胞凋亡、分化，参与肿瘤的增殖、侵袭和转移、血管发生和化疗耐药等。近年多项研究表明Anxa4在不同类型的卵巢癌及子宫内膜癌等肿瘤中差异表达：相对于化疗敏感的卵巢浆液性癌，化疗抗拒（chemoresistant）的卵巢透明细胞癌高表达Anxa4，恶性程度较高的子宫内膜浆液性癌相对于子宫内膜样腺癌则高表达Anxa4，但相对于母系卵巢浆液性腺癌细胞系，铂类抗拒的子细胞系低表达Anxa4， Anxa4高表达与宫颈癌细胞系HeLa细胞抗拒化疗药物所诱导的凋亡有关。而Anxa4与上述肿瘤化疗敏感性相关的分子机制涉及钙离子信号等通路调节、化疗药物转运等相关的“非基因转录效应”，还有与核因子κB（NF-κB）信号通路相关的“基因转录效应”。就Anxa4与妇科肿瘤间的关系进行综述，探寻分子靶向Anxa4治疗肿瘤的研究依据。
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膜联蛋白A4表达与卵巢浆液性囊腺癌化疗耐药性相关
目的:了解膜联蛋白A4(Annexin A4)在不同卵巢组织中的表达及其与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理因素之间的关系,明确Annexin A4表达与卵巢浆液性囊腺癌患者化疗敏感性是否有关.方法:通过免疫组化SP法检测58例卵巢浆液性囊腺癌组织和30例良性卵巢肿瘤中Annexin A4表达水平,对卵巢浆液性囊腺癌病人进行随访,了解其化疗敏感性,进行统计分析.结果:Annexin A4在卵巢浆液性囊腺癌组织中(74.1％)表达明显高于良性卵巢肿瘤(26.7％)(P＜0.05),且其表达在有无淋巴结转移及有无绝经的卵巢浆液性囊腺癌患者中无显著性差异(P＞0.05),而与患者组织分化程度、手术病理分期有关(P＜0.05).Annexin A4蛋白在化疗耐药组(92.0％)的表达明显高于化疗敏感组(60.6％)(P＜0.05).结论:Annexin A4在卵巢浆液性乳头状囊腺癌的发生发展中可能起重要作用,且与患者化疗耐药性有关,有望成为预测化疗敏感性的生物学指标.
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膜联蛋白A4对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力及黏附相关基因表达的影响
目的 探讨人膜联蛋白A4(AnnexinA4,ANXA4)对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力的影响及其相关机制.方法 化学合成针对ANXA4序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectamineTM 2000转染人肝癌细胞株MHCC97H；RT-PCR和western blot检测RNA干扰后ANXA4 mRNA和蛋白质的表达水平；黏附实验检测ANXA4表达下降对细胞黏附能力的影响；荧光定量RT-PCR检 测RNA干扰后黏附相关基因表达的变化.结果 荧光定量RT-PCR及western blot结果表明,经siRNA干扰后,ANXA4 mRNA和蛋白质表达水平明显降低；细胞黏附实验结果显示,与空白对照组的0.293±0.019和Mock组的0.305±0.018相比,实验组为0.234±0.013,差异有统计学意义(P＜0.05).荧光定量RT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,实验组ITGA5、ITGB1、E-cadherin mRNA表达水平下调,ICAM1、CD44、OPN mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 ANXA4可能通过调节黏附相关基因的表达水平影响细胞的黏附能力,参与肝癌的发生和发展进程.
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膜联蛋白A4在甲状腺乳头状癌组织的表达及意义
目的 探讨膜联蛋白A4(Annexin A4)蛋白及mRNA在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其相关性.方法 应用免疫组织化学与反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测78例PTC组织、35例结节性甲状腺肿及20例癌旁组织中Annexin A4蛋白和mRNA表达水平,并与临床病理特征进行相关分析.结果 Annexin A4蛋白在PTC中的表达明显高于结节性甲状腺肿及癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05).Annexin A4 mRNA在PTC中的相对表达量(0.641 ±0.154)明显高于结节性甲状腺肿(0.266±0.082)及癌旁组织(0.188±0.034),差异有统计学意义(P＜0.05).Annexin A4蛋白及mRNA表达明显相关,且均与PTC的肿瘤直径、病理学T、N分期明显相关(P＜0.05).结论 Annexin A4的异常表达可能参与了PTC的发生、发展及淋巴结转移过程.
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膜联蛋白A4在原发性肝细胞癌中的表达及其意义
目的 观察膜联蛋白A4(Annexin A4)在不同肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达情况,探讨其临床病理意义.方法 先应用RT-PCR验证ANX A4在不同类型肝组织中mRNA的表达,再应用免疫组织化学方法检测在15例正常肝组织、15例乙肝后肝硬化组织和63例不同表型肝癌组织标本中的表达,探讨其差异表达与临床病理资料之间的联系及其意义.结果 (1)ANX A4 mRNA表达水平在肝硬化及肝癌组织中均比正常肝组织上调(P＜0.05),但肝硬化组与肝癌组差异无统计学意义(P＞0.05);(2)ANX A4蛋白阳性表达率正常肝组织为20%,乙肝后肝硬化组织为26.67%;在63例HCC中阳性率为49.21%,癌旁组织为61.90%,其中小肝癌阳性率为50.00%,大肝癌为64.29%,多发癌为28.57%,相应癌旁组织阳性率分别为50.00%、64.29%、66.67%.随着肝细胞的恶性转化并进展,ANX A4蛋白呈逐渐上调趋势,但当肿瘤出现侵袭转移时反而下调.与临床病理指标的相关性研究表明Annexin A4与HCC进展及侵袭相关.结论 (1)从正常肝→肝硬化→肝癌组织,Annexin A4的mRNA表达水平逐渐上调;(2)ANXA4蛋白在HCC组织中的表达明显失调,其变化可能与HCC进展及侵袭相关.
