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白藜芦醇通过促进miR-34c表达抑制人结直肠癌SW480细胞的生长
目的：探究白藜芦醇抑制人结直肠癌 SW480细胞生长的可能机制。方法利用白藜芦醇（50μmol/L）处理培养的SW480细胞24 h，采用实时无标记动态细胞分析技术检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡，qRT-PCR检测KITLG mRNA及miR-34c表达，Western blot检测KITLG蛋白表达。结果与对照组比较，白藜芦醇处理后SW480细胞增殖率降低了51.5%，凋亡细胞的比例增加了343.9%；同时，白藜芦醇显著提高SW480细胞内miR-34c的含量，与对照组相比增加了263.9%，并使其靶基因KITLG的蛋白表达水平降低52.5%。结论白藜芦醇具有明显抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖并诱导其凋亡的作用，其可能机制与白藜芦醇增加miR-34c表达有关。
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miR-34c抑制人子宫内膜癌的机制分析
目的 MicroRNAs (miRNAs)是内源性表达长度约为22个核苷酸的小RNA分子,通过结合到靶mRNA上而抑制基因的表达.近年的研究表明某些miRNAs可以调节肿瘤细胞的增殖与迁移,然而miRNA在子宫内膜癌中的作用有待于进一步探索.本研究旨在探讨miR-34c在人子宫内膜癌中的表达规律、功能和分子机制.方法 通过荧光定量PCR技术检测20例人子宫内膜癌组织标本中miR-34c的表达.通过阳离子脂质体介导的方法将miR-34c转染入人子宫内膜癌细胞RL95-2中,应用MTS法检测子宫内膜癌细胞的增殖,克隆形成实验检测子宫内膜癌细胞的生长,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测子宫内膜癌细胞的迁移.生物信息学和荧光素酶报告基因实验确认miR-34c作用的靶基因.RNAi技术下调c-Met的表达.通过蛋白印迹检测miR-34c对c-Met蛋白以及细胞内重要信号通路与细胞周期相关蛋白的影响.结果 miR-34c在子宫内膜癌中表达明显降低.miR-34c能使子宫内膜癌细胞RL95-2细胞周期滞留在G1期,显著抑制细胞的增殖.细胞移形实验发现miR-34c能够显著抑制RL95-2细胞迁移.生物信息分析表明c-Met是miR-34c作用的靶基因,进一步通过荧光素酶报告基因实验得以证实.蛋白印迹分析发现miR-34c能下调RL95-2细胞中的c-Met蛋白、p-Akt蛋白以及p-ERK1/2蛋白表达情况,同时还能够下调CDK4、CDK6蛋白以及p-Rb蛋白的表达水平.RNAi技术下调c-Met的表达能够明显抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移.结论 本研究结果证明miR-34c通过作用于靶基因c-Met而抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移,说明miR-34c是子宫内膜癌中的重要抑癌基因.
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miR-34c在口腔鳞状细胞癌的表达及对Tca8113细胞生物学行为的影响
目的 探讨miR-34c在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织及细胞中的表达及其对口腔癌细胞生物学行为的影响.方法 qPCR检测中国地鼠口腔癌组织中miR-34c的表达水平,脂质体RNAiMAX介导miR-34c模拟物组(miRNA-34c mimics)和miR-34c抑制物组(miRNA-34c inhibitor)转染Tca8113细胞,并通过CCK-8和划痕实验检测调控miRNA-34c表达对Tca8113细胞活力及迁移能力的影响.结果 与正常组相比,中国地鼠口腔癌组miRNA-34c表达水平显著升高.miR-34c模拟物组Tca8113细胞增殖能力显著减弱(P<0.01),迁移能力降低不明显.miRNA-34c抑制组miRNA-34c的表达显著下调,细胞的增殖能力和迁移能力显著增强(P<0.05).结论上调miRNA-34c表达能有效抑制口腔癌细胞增殖,迁移能力降低不显著,但有降低迁移能力的趋势,下调miRNA-34c表达可促进口腔癌细胞的增殖,提高细胞迁移能力.
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膀胱移行细胞癌中miR-34c的表达及其临床意义
[目的]探讨MicroRNA-34c(miR-34c)在膀胱移行细胞癌中的表达及其在膀胱癌发生、发展中的意义.[方法]运用荧光定量real-time PCR检测miR-34c在膀胱癌组织中及癌周非瘤组织的表达水平,采用2-△△Ct算法计算膀胱癌组织与癌周非瘤组织中miR-34c表达量的比值,结合术后病理参数,运用统计学方法分析miR-34c与临床病理资料之间的相关性.[结果]在人膀胱癌组织中发现miR-34c较其相应周围非瘤组织明显低表达.在26例膀胱癌组织中,16例(61.9％)miR-34c显著低表达.miR-34c的低表达与肿瘤大小和恶性程度显著相关.肿瘤越大、恶性程度越高,miR-34c的表达量越低.[结论]低表达miR-34c可能是膀胱移行细胞癌组织的重要特征,并参与膀胱癌的生物学进程,可能对膀胱癌的诊断及防治提供新的思路.
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miR-9和miR-34c在老年痴呆患者血清中的表达及临床意义
目的 研究miR-9和miR-34c在老年痴呆患者血清中的表达水平,分析其对老年痴呆的诊断价值.方法 以本院接收诊治的73 例老年痴呆患者为研究对象,同时选取70 例将健康体检者作为正常组,采用 RT-qPCR检测所有研究者血清中miR-9和miR-34c的水平,采用临床痴呆评定量表( CDR)对老年痴呆患者进行认知能力评分,观察其诊断老年痴呆的灵敏度与特异度.结果 与正常组相比,老年痴呆患者血清HDL-C、LDL-C、Hcy、ANP水平以及MMSE评分方面均差异显著(P<0. 05),miR-9表达水平明显下降(P<0. 01),miR-34c表达水平明显上升(P<0. 01).依据CDR评分,痴呆程度越严重,miR-9水平越低,miR-34c水平越高.老年痴呆患者血清中miR-9与LDL-C和Hcy水平均呈负相关,与HDL-C、ANP水平以及MMSE评分均呈正相关;miR-34c与血清LDL-C和Hcy水平均呈正相关,与HDL-C、ANP水平以及MMSE评分均呈负相关. ROC分析表明,miR-9 和miR-34c的AUC面积分别为0. 811、0. 819;敏感度分别为89. 58% 、91. 67% ;特异度分别为80. 00% 、71. 11% ;截断值分别为0. 87、1. 14.结论 老年痴呆患者血清miR-9表达下调,而miR-34c表达上调,二者异常表达均与老年呆发生及发展过程有关,可作为临床诊断和病情监测的重要指标.
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白藜芦醇与奥沙利铂联合应用抑制结直肠癌细胞增殖的机制
目的:探讨联合应用白藜芦醇与奥沙利铂抑制结直肠癌细胞系增殖的作用机制.方法:单独或联合应用奥沙利铂和白藜芦醇处理人结肠癌细胞系HCT-116和HT-29,CCK-8实验检测肿瘤细胞活力,流式细胞术检测细胞周期;应用慢病毒介导使HCT-116细胞过表达miR-34c,再用奥沙利铂处理,检测肿瘤细胞的活力和凋亡;建立结直肠癌皮下荷瘤裸鼠模型,分别给予二甲基亚砜、奥沙利铂、白藜芦醇及白藜芦醇+奥沙利铂,制作肿瘤组织石蜡切片进行Ki67染色并计数.结果:与单独应用奥沙利铂或白藜芦醇相比,联合应用奥沙利铂和白藜芦醇更显著抑制HCT-116细胞的活力,细胞阻滞在G1期.荷瘤裸鼠实验同样显示奥沙利铂和白藜芦醇联合应用较单独应用时Ki67阳性率减少.结论:联合应用奥沙利铂和白藜芦醇具有协同抑制结直肠癌细胞增殖的作用,其可能机制与白藜芦醇促进结直肠癌细胞抑癌基因miR-34c表达有关.
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UVB诱导下早衰人皮肤成纤维细胞中miR-34c及SIRT1表达的研究
目的:运用反复亚毒性剂量紫外线B (ultraviolet B,UVB)辐射人皮肤成纤维细胞,构建应激诱导早衰(stress-induced premature senescence,SIPS)模型,观察衰老相关生物学标志、衰老相关基因信号分子p53、p21、p16、沉默信息调节因子2相关酶1 (sirtuinl,SIRT1)以及miR-34c的表达情况.方法:体外培养人皮肤成纤维细胞,予连续5次、每次剂量10 mJ/cm2的UVB辐射,细胞衰老B-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞,流式细胞术检测细胞周期阻滞情况,实时荧光定量PCR检测miR-34c及衰老相关基因p53、p21、p16、SIRT1 mRNA表达水平变化,Westem blot检测p53、p21、p16及SIRT1蛋白水平表达.结果:与对照组相比,SIPS组细胞SA-β-Gal染色呈强阳性[对照组(8.13±1.92)%,SIPS组(94.72±2.08)%,P＜0.05];多数细胞阻滞于G1期[对照组(52.96±1.76)%,SIPS组(77.31±2.05)%,P＜0.05];另外,实时荧光定量PCR显示miR-34c mRNA的表达升高(miR-34c-3p、miR-34c-5p分别为对照组0.93±0.09、1.03±0.03,SIPS组2.08±0.19、12.28±1.64,P＜0.05);衰老相关基因p53、p21、p16、SIRT1 mRNA的表达亦升高(对照组分别为0.74±0.23、1.06±0.23、0.86±0.13、0.74±0.25;SIPS组分别为1.84±0.55、20.25±2.34、16.7±3.94、2.15±0.22,P＜0.05);Western bolt表明p53、p21、p16及SIRT1蛋白水平表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-34c在反复多次亚毒性剂量UVB辐射人皮肤成纤维细胞后表达升高,对p53起正反馈调节作用,而SIRT1并未受miR-34c的抑制.
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miR-34c的表达及其基因启动子甲基化与肾癌的关系
目的 探讨miR-34c的表达及其基因启动子甲基化与肾癌的关系.方法 采用实时定量-PCR检测41例肾癌组织及癌旁组织中miR-34c的表达,同时采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测miR-34c基因启动子甲基化情况.结果 miR-34c在肾癌组织的相对表达量低于癌旁组织(1.21.±0.06 vs.1.42±0.08)(P＜0.05);miR-34c基因启动子甲基化在癌组织及癌旁组织的检测率差异无统计学意义(65.9％ vs.51.2％)(P＞0.05).在31例Ⅰ期肾癌组织中,23例(74.2％)检测到miR-34c基因启动子的甲基化,明显多于癌旁组织的15例(48.4％)(P＜0.05).结论 miR-34c基因启动子甲基化是早期肾癌中miR-34c基因发生失活的原因之一,可能与肾癌的发生发展有关.
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miR-34c对人喉癌细胞株Hep-2细胞的影响
目的 研究miR-34c对喉癌细胞株人喉癌表皮细胞(Hep-2)的细胞周期及细胞增殖的影响.方法 将HeF2分为转染miR-34c寡聚核苷酸组(A组)、转染无义序列组(B组)和空白对照组(C组).采用RT-PCR、MTT法、流式细胞术及Western blot技术评价各组细胞增殖和细胞周期的生物学变化.结果 转染miR-34c寡聚核苷酸后,Hep-2中miR-34c的表达上调；与C组相比,A组细胞增殖水平明显抑制.miR-34c寡聚核苷酸能够有效诱导Hep-2细胞周期阻滞在G1/G0期；A组细胞分裂周期蛋白42(CDC42)表达水平下调,cyclin依赖型激酶(CDK4)表达水平降低.结论 miR-34c寡聚核苷酸能够抑制喉癌细胞Hep-2的增殖；miR-34c是潜在的人喉癌细胞基因治疗的候选靶点.
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miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响
目的:研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响.方法:用hsa-miR-34cmimics转染HEC-1-B细胞.流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达.CCK-8检测细胞增殖能力的改变.细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制.流式细胞技术测细胞凋亡.结果:细胞转染率为81.16％.相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加(P＜ 0.05).结论:miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因.
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miR-34c在大鼠局灶性脑缺血模型中的表达
目的 通过检测miR-34c及其靶基因在大鼠局灶性脑缺血模型中的表达变化,初步探讨miR-34c及其靶基因在大鼠局灶性脑缺血中的作用.方法 首先利用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型;然后利用qRT-PCR检测miR-34c在大鼠脑缺血不同时间点的表达变化;利用生物信息学方法预测miR-34c的可能靶基因;再利用RT-PCR和qRT-PCR方法检测靶基因在大鼠脑缺血不同时间点的表达变化.结果 成功制备大鼠局灶性脑缺血模型;miR-34c在大鼠脑缺血模型中随着缺血时间的延长其表达呈下降趋势;靶基因Hspa1b、Cac-na2d1、Sperping1、Cntn2在大鼠脑缺血模型中随着缺血时间的延长其表达呈明显上升趋势.结论 miR-34c通过靶基因在大鼠局灶性脑缺血损伤过程中起到重要的保护作用.
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microRNA-34家族在肺癌中的作用机制
在许多癌症中， miR?34家族成员充当着极具潜力的具有肿瘤抑制活性的作用。例如，在肺癌中，外源性高表达miR?34a能够抑制肺癌细胞的增殖并诱导其凋亡。预示着利用miR?34a的恢复疗法（ replace?ment therapy）治疗肺癌具有良好的前景，其作用机制也正在逐渐阐明。许多研究发现， miR?34a家族成员与肺癌细胞的增殖、转移、凋亡、细胞周期的调控息息相关。因此， miR?34a家族成员在肺癌的早期诊断、治疗、预后及发病机制的研究中发挥着重要作用。文章综述了miR?34家族的研究现状，重点总结了 miR?34家族在肺癌中的作用机制。
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乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX中过表达miR-34c调节多柔比星敏感性的研究
目的:研究乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX中过表达miR-34c对多柔比星敏感性的调节作用.方法:培养乳腺癌细胞株MCF-7和乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX,转染miR-34c及阴性对照片段,用不同剂量多柔比星处理;取处理后的细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞活力、RNA检测试剂盒测定耐药相关基因的mRNA含量.结果:MCF-7/DOX细胞株中miR-34a、34b、34c的表达量均低于MCF-7细胞株且miR-34c表达量的下调为显著,MDR1、BCRP、UCP2、Twist、c-Src的mRNA含量显著高于MCF-7细胞株;转染miR-34c后,多柔比星对MCF-7/DOX细胞株活力的抑制效应强于转染阴性对照的MCF-7/DOX细胞株,MDR1、BCRP、UCP2、Twist、c-Src的mRNA含量显著低于转染阴性对照的MCF-7/DOX细胞株.结论:乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX中过表达miR-34c能够增加多柔比星敏感性,抑制耐药相关基因MDR1、BCRP、UCP2、Twist、s-Src的表达量.
