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尼氟灭酸对CCI模型鼠DRG神经元TMEM16A表达的抑制作用
目的:观察尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)干预后,TMEM 16A在坐骨神经压榨性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上的表达,研究TMEM16A是否参与神经病理性疼痛.方法:制备CCI模型,热板实验检测热缩足反射潜伏期(thermalwithdrawal latency,TWL).在模型制备后第ld开始以腹腔注射形式给予不同浓度的NFA干预14d,取大鼠L4～6 DRG神经元进行实验.免疫荧光实验明确TMEM16A在DRG神经元中的分布;运用RT-PCR技术和Westem Blot技术在给予不同浓度NFA干预后,检测CCI模型DRG神经元上TMEM 16A的mRNA水平和蛋白的表达.结果:(1) CCI组的TWL较正常组明显缩短,给予10 μM、50 μM和300 μM的NFA干预后,各组TWL较CCI组均明显延长(P＜0.01,刀=6);50μM的NFA干预组较10 μM的NFA干预组TWL也明显延长(P＜0.05,n=6);但300 μM的NFA干预组与50 μM的NFA干预组相比,TWL时间差异无统计学意义. (2)免疫荧光显示TMEM16A主要存在于DRG神经元上;(3) CCI组mRNA水平较正常组明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元TMEM 16A的mRNA水平较CCI组逐渐降低,差异具有统计学意义(P＜ 0.01,n=6). (4) CCI组TMEM16A蛋白表达较正常组的明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元上TMEM16A蛋白表达较CCI组逐渐减低,差异具有统计学意义(P＜ 0.01,n=6).结论:尼氟灭酸能抑制神经病理性疼痛大鼠DRG神经元TMEM16A的表达,而且与尼氟灭酸的剂量相关,提示钙激活氯通道可能参与或调控神经病理性疼痛的发生.
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Ano1在心脏成纤维细胞中的功能表达及其意义
目的 探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠心脏成纤维功能表达及其意义.方法 利用胶原酶急性分离心房成纤维细胞;应用RT-PCR检测到成纤维细胞ANO1 mRNA的表达;利用western blot检测到ANO1蛋白在小鼠心肌成纤维细胞中表达;利用膜片钳技术记录钙激活氯电流,结果 成纤维细胞表达ANO1 mRNA和蛋白,有钙激活氯电流,该氯电流可以被特异性的阻断剂CaCCinh抑制.结论 ANO1在小鼠心脏成纤维细胞中有明确表达,ANO1是钙激活氯通道的分子基础.
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钙激活通道对不稳定逼尿肌条收缩功能调节的实验研究
目的探讨钙激活钾通道和氯通道对逼尿肌条收缩的调节在逼尿肌不稳定发生中的作用.方法建立Wistar大鼠逼尿肌不稳定模型,设正常对照组,利用逼尿肌条体外实验,观察阻断与开放通道后肌条的收缩频率和动力指数变化及差异.结果对照组与不稳定组肌条收缩频率分别为(2.3±0.5)次/min和(4.1±0.9)次/min,动力指数分别为31.3±6.1和59.5±7.8,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).2组逼尿肌条的收缩频率和动力指数在钙激活钾通道阻断与开放前后的增加或下降变化均有统计学意义(P＜0.05),其中对照组大电导钙激活钾通道阻断后频率下降(23±10)%,不稳定组增加(29±10)%,2组动力指数分别增加(24±5)%和(16±5)%,通道开放后频率分别下降(34±7)%和(23±9)%,动力指数分别下降(32±9)%和(23±7)%.2组小电导钙激活钾通道阻断后频率分别增加(77±16)%和(27±10)%,动力指数分别增加(81±12)%和(52±14)%,通道开放后频率分别下降(49±6)%和(35±7)%,动力指数分别下降(55±8)%和(32±12)%.2组钾通道阻断或开放前后变化幅度的差异有统计学意义(P＜0.01).对照组阻断钙激活氯通道后收缩频率及动力指数下降(9±20)%和(8±9)%(P＞0.05),不稳定组分别下降(44±17)%和(50±12)%(P＜0.01),2组变化幅度差异有统计学意义(P＜0.01).结论钙激活钾通道和氯通道反馈调节逼尿肌收缩功能,钾通道作用下降和氯通道作用增强可能是导致梗阻性逼尿肌不稳定的重要原因之一.
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以ANO1蛋白为靶点的钙激活氯通道调节剂研究进展
钙激活氯通道是广泛存在于人体内的一种阴离子通道,参与分泌、心肌细胞去极化、神经信号传导等多种生理活动.ANO1蛋白是钙激活氯通道的分子基础之一,对ANO1蛋白进行调节能够产生多种药效作用,例如镇痛、治疗痢疾、哮喘、抑制肿瘤等.近10年来发展出许多ANO1蛋白调节剂筛选测试方法,虽然筛选出一系列以ANO1蛋白为靶点的钙激活氯通道调节分子,但是这些分子的药理学作用却并不一致.本文从筛选方法、构效关系、潜在应用前景等多方面对ANO1蛋白调节分子的研究进展进行论述.
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跨膜蛋白16A分子结构及调控机制研究现状
跨膜蛋白16A(TMEM16A)是一种钙激活氯通道,参与人体多种生理及病理过程,如腺体分泌、高血压和癌症等.TMEM16A电流具有复杂的电压以及钙离子依赖性,但其调控机制并不十分清楚.本文基于新发现的TMEM16A晶体结构,阐述具有10个跨膜域的TMEM16A二聚体结构,详细介绍TMEM16A通道的钙离子结合位点以及孔道结构以及各种分子亚型,进而总结钙离子/钙调蛋白、跨膜电压、磷酸化、细胞内分子(如膜脂质、质子氢)等对TMEM16 A的调控机制.本文通过对TMEM16 A分子结构及调控机制研究进展的探讨,有利于深入理解TMEM16A参与的生理过程和病理机制.
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氯离子通道研究进展
氯离子是体内重要丰富的阴离子，它进出细胞的过程，除了与氯离子相关的一些转运体主动转运有关外，经过阴离子通道进行转运是重要方式之一。氯离子通道组织分布广泛，参与了众多的生理过程：包括细胞体积的调节、膜电位的稳定性调节、信号转导以及跨上皮运输等。该文重点综述了钙激活氯通道和容积调节氯通道的生理功能及分子基础，简单介绍了电压门控氯通道、囊性纤维跨膜电导转运体及配体门控氯通道。
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钙激活氯通道 TMEM16 A在大鼠心房和心室中的表达差异
目的：探究钙激活氯通道(CaCCs） TMEM16A在大鼠心房和心室组织中的表达情况，为临床治疗心肌缺血、心律失常以及心力衰竭等疾病提供新的治疗靶点。方法2014年10月—2015年9月，将18只清洁级Sprague-Dawley大鼠适应性饲养1周，采用10％水合氯醛溶液腹腔注射麻醉后取心脏，分离心房和心室组织进行实验。采用Western blotting法和实时荧光定量反转录PCR ( RT-qPCR）法分别检测大鼠心房和心室组织中TMEM16A及其mRNA水平。结果大鼠心房和心室组织 TMEM16A 水平分别为(0.46±0.02）和(0.33±0.03），心房和心室组织TMEM16A mRNA水平分别为(3.55±0.17）和(1.00±0.03），大鼠心房组织中TMEM16A及其mRNA水平高于心室组织(P＜0.01）。结论 CaCCs TMEM16A在大鼠心房和心室组织中均有表达，其在心房组织中的水平高于心室组织。
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钙激活氯通道密度调节Anoctamin 1电流作用的研究
目的：研究钙激活氯通道（CaCCs）密度对CaCCs蛋白—Anoctamin 1（Ano1）电流特性的调节作用，探讨高表达Ano1促进肿瘤发生的机制。方法瞬时转染Ano1质粒到HEK293细胞，高密度CaCCs通过表达Ano124 h获得，低密度CaCCs通过表达Ano16 h获得。膜片钳方法检测钙离子激活的Ano1的全细胞电流。激活电流曲线以指数曲线拟合。结果 Ano1质粒表达6 h的电流密度显著低于表达24 h的电流密度（P<0.05）。在低CaCCs密度时，Ano1的激活电流曲线适于用单指数拟合，τslow为（292.71±38.11）ms。在高CaCCs密度时，Ano1的激活电流曲线适于用两指数拟合，τfast为（47.78±4.58）ms；τslow为（385.74±71.44）ms。高CaCCs密度下的Ano1电流比低CaCCs密度下的Ano1电流多了一个快速激活成分（τfast），而高CaCCs密度与低CaCCs密度比较Ano1的τslow差异没有统计学意义（P>0.05）。结论 CaCCs的密度可调节Ano1激活的动力学变化；高表达Ano1可促进CaCCs的激活。
关键词： Anoctamin 1 钙激活氯通道 通道密度 激活动力学 肿瘤 -
钙激活氯通道电生理特性及调节机制
钙激活氯通道(Calcium-activated Chloride Channels,CaCC)在许多生理过程中起着重要作用,如分泌蛋白及盐的跨上皮转运、神经元兴奋、平滑肌生理特性的维持、卵母细胞受精和心脏动作电位的复极化等.CaCC电生理特性较复杂,其全细胞电流随胞内钙离子浓度和刺激电压的不同而表现出不同整流特性和时间电压依赖性,不同组织的单通道电导有很大差异,大小介于1～70pS.CaCC可被NFA、9-AC、DPC、DIDS所阻断.目前CaCC通道蛋白的分子结构还不清楚,已克隆的两种蛋白家族CLCA和Bestrophin可作为其候选分子.本文综述了CaCC的电生理特性、调节机制、分子结构和生理功能.
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钙激活氯通道对大鼠脑基底动脉舒缩活动的影响
本文旨在观察钙激活氯通道(calcium-activated Cl-channels,CaCCs)在大鼠脑基底动脉舒缩活动中的作用.应用压力肌动图技术观察给予不同药物干预后大鼠脑基底动脉血管段直径的变化.结果显示:(1)脑基底动脉管腔内压力为0～100 mmHg时,压力诱发引起的脑血管舒缩活动的比例为78.6％O=28),且血管的收缩比舒张反应更快.(2)脑基底动脉管腔内压力为60 mmHg时,振幅平均值为(62.6±6.4) ixm(n=22),频率平均为(8.0±2.3)次/5 min 0=22).(3)在细胞外液无钙时,血管段舒缩活动减弱.(4)在细胞外液加入L-型钙通道阻断剂尼莫地平,血管段舒缩活动减弱.(5)在细胞外液加入CaCCs通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)和NPPB [5-nitro-2-(3-phenylpropylamine)benzoic acid],压力诱发的血管舒缩活动减弱,并使脑基底动脉血管保持持续舒张.以上结果提示,管腔内压力诱发的脑基底动脉血管舒缩活动与细胞外钙内流及CaCCs作用相关.
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钙激活氯通道 TMEM16A 在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义
目的：探讨 TMEM16A 在子宫内膜癌组织中的表达特征以及其临床应用价值。方法选取2012年3月至2014年3月妇科经手术治疗及病理诊断为子宫内膜癌的患者48例，并以同期良性子宫病变且子宫内膜正常病例50例作为对照组，进行病理组织的生化检验，比较 TMEM16A 的表达情况。结果子宫内膜癌患者TMEM16A 评分均为阳性，﹢、﹢﹢和﹢﹢﹢的比例分别为16.7％、33.3％、50.0％；对照组主要表现为阴性和弱阳性，比例分别为68.0％和32.0％；两组间数据比较差异有统计学意义（χ2=49.980，3.114，19.919，33.108，P ﹤0.01）。临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期子宫内膜癌患者 TMEM16A 表达阳性率分别为44.4％、100％、100％，比较差异有统计学意义（χ2=11.429，P ﹤0.01）；组织学分级 G1、G2、G3的阳性率分别为55.6％、88.9％、100％，差异有统计学意义（χ2=10.273，P ﹤0.01）；肌层浸润﹤1/2和≥1/2的阳性率分别为73.7％和100％，比较差异未见统计学意义（χ2=3.324， P ﹥0.05）。结论 TMEM16A 参与了子宫内膜癌的恶变和进展的病理过程，与疾病的发病机制具有相关性。
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大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯通道与细胞质钙的关系及意义
目的 观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜钙激活氯通道(ClCa)与细胞质钙的关系及意义.方法 大鼠PASMCs获取采用急性酶分离法.荧光光度法检测细胞质内游离钙离子浓度([Ca2+]i);全细胞膜片钳技术测定PASMCs钙激活氯电流(ICl(Ca));等长张力测定法观察ClCa阻滞剂尼氟灭酸(NFA)和Indaryloxyacetic acid (IAA-94)对大鼠肺动脉张力的影响.结果 环匹阿尼酸(CPA)和苯福林(PE)均可引起[Ca2+]i升高;升高的[Ca2+]iI可以引出ICl(Ca); NFA和IAA-94可以舒张CPA、PE引起的肺动脉环收缩.结论 生理条件下大鼠PASMCs的ClCa是钙依赖性的;细胞外Ca2+内流及细胞质内Ca2+释放均可激活该通道,其参与了血管活性药诱导的肺动脉收缩.
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TMEM16A在口腔癌前病变和鳞癌中的表达及意义
目的 检测跨膜蛋白16A(TMEM 16A)在口腔癌前病变组织及口腔鳞癌组织中的表达与分布情况,分析其在口腔癌变机制中的作用.方法 采用免疫组织化学染色法检测10例正常黏膜组织、10例上皮单纯性增生、30例上皮异常增生和45例口腔鳞癌标本中TMEM 16A的表达情况.结果 TMEM 16A在正常黏膜组织上皮中为阴性表达,在口腔癌前病变组织出现不同程度的表达,且随着上皮异常增生程度增加,TMEM16A蛋白表达逐渐增强.TMEM16A在口腔鳞癌中表达显著高于口腔癌前病变,在口腔鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中,TMEM16A的表达差异无统计学意义(x2=1.74,P＞0.05).结论 TMEM16A在不同级别口腔癌前病变及鳞癌中表达的差异提示其可能在口腔鳞癌发生早期有重要作用.
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逼尿肌不稳定中钙激活钾/氯通道mRNA表达差异的实验研究
目的探讨钙激活钾/氯通道在正常和不稳定逼尿肌组织中的mRNA表达变化.方法雌性Wistar大鼠采用会阴部尿道结扎法制作成膀胱出口梗阻(bladder outlet obstruction,BOO)模型,经清醒状态膀胱测压确定逼尿肌不稳定(detrusorinstability,DI)后,提取正常与DI逼尿肌组织mRNA,以RT PCR方法研究组织中大电导钙激活钾通道(big conduc-tance calcium activated potassium channel,Bkca)、小电导钙激活钾通道(small conductance calcium activated potassium channel,Skca)、钙激活氯通道(calcium activated chloride channel,Clca)的mRNA表达,凝胶成像分析比较其差异性变化.结果大鼠尿道梗阻后DI发生率76.17%,膀胱容量及大逼尿肌压显著增加(P＜0.01).钙激活钾/氯通道在两组大鼠逼尿肌中均有表达,其中Bkca、Skca2、Skca3明显降低,而Clca明显升高.结论钙激活钾/氯通道的表达改变可影响逼尿肌兴奋性的反馈调节,在逼尿肌不稳定的发病机制中有重要作用.
关键词： 逼尿肌不稳定 钙激活钾通道 钙激活氯通道 逆转录聚合酶链式反应 mRNA表达 -
钙激活钾/氯通道对大鼠逼尿肌不稳定调节作用的实验研究
目的研究钙激活钾/氯通道对逼尿肌不稳定的调节作用的变化,探讨其在逼尿肌不稳定(Detrusor instability,DI)发生中的作用.方法采用Wistar大鼠DI模型,常规制备正常及DI逼尿肌条,体外张力测定其自发收缩频率和幅度,观察通道阻断剂及开放剂的作用.结果 DI组自发收缩频率与张力较对照组显著增加.大电导钙激活钾通道(Big conductance calcium activated potassium channel,BKca)阻断后,对照组频率降低而张力增加,DI组仅频率明显提高,开放后对照组频率与张力均降低,DI组仅频率明显下降.小电导钙激活钾通道(Small conductance calcium activated potassium channel,SKca)阻断后两组的频率与张力均明显增加,而开放后则对照组均降低,DI组仅频率下降.钾通道阻断或开放后对照组频率与张力的变化幅度明显高于DI组.钙激活氯通道(Calcium activated chloride channel,Clca)阻断后,DI组频率与张力下降,而对照组无明显改变.结论钙激活钾/氯通道反馈调节逼尿肌的收缩,DI时Kca作用下调而Clca作用上调,提示钙相关的调节异常在DI的发生中具有重要作用.
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内皮素-1对新生大鼠心肌细胞的影响及机制
目的:研究内皮素-1(ET-1)诱导心肌肥大的机制及对抗的药物.方法:在培养新生大鼠心肌细胞中,采用L-型钙通道阻滞剂拉西地平(larcidipine)和MN9202、钙激活氯通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)通路的阻断剂白屈菜季氨碱(chelerythrine,che)和ERK通路阻断剂PD98059(PD)观察内皮素-1在诱导心肌蛋白质合成中的影响.结果:对照组(DMEM)蛋白质含量为273±20μg/ml,ET-1组为312±30μg/ml,较对照组升高14%.ET-1+NFA组、ET-1+che组、ET-1+MN9202组、ET-1+larcidipine组、ET-1+PD98059组分别为280±10μg/ml、283±10μg/ml、285±27μg/ml、275±22μg/ml、293±33μg/ml;与ET-1组比较分别降低10%、9%、8.6%、13.1%、6.1%.结论:ET-1刺激引起的心肌细胞蛋白合成与钙激活氯通道和L-型钙通道有关,PKC和ERK通路在ET-1诱导心肌肥大的信号转导通路中起重要作用.
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TMEM16A调控血管平滑肌功能的研究进展
钙激活性氯离子通道(CaCC)存在于多种不同组织中,介导了众多的生理病理过程.跨膜蛋白16A(TMEM16A)为CaCC重要的分子基础,主要表达于血管平滑肌细胞,影响血管重塑.对TMEM16A进行研究可以为多种疾病提供新的治疗靶点.本文就TMEM16A的分子结构、TMEM16A在血管平滑肌细胞中的表达以及调节血管平滑肌细胞的作用机制等进行综述.
