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检测同型半胱氨酸的方法学进展和评价
同型半胱氨酸是甲硫氨酸代诩过程中的主要中间产物,体内血浆半胱氨酸水平与心血管等疾病有着密切的关系.目前,有多种检测半胱氨酸的方法,其中以新推出的循环酶法测定血浆半胱氨酸为方便、准确、便宜,值得推广使用.
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卵黄抗体用于眼镜王蛇毒抗原检测的初步研究
目的探讨抗蛇毒卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标; ELISA的实验条件及相关参数通过棋盘滴定法确定,并进行特异性、灵敏度、精确度及稳定性等测定.结果本检测方法的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32～750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显.应用本方法对不同浓度(100、 300、 1 000 μg·L-1)的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内相对标准差在1%～3%之内,板间相对标准差在8%以内;稳定性实验显示:卵黄抗体置于37 ℃条件6天,其检测结果与4 ℃条件下无显著差异 (P>0.05).结论特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,但仍需要进一步研究以降低交叉反应.
关键词： 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY) 母鸡 酶联免疫吸附测定(ELISA) -
ELISA检查HCV-Ab(IgG)复检结果的分析及其灰区的确定
酶联免疫吸附测定(ELISA)以操作简便、技术可靠、试剂方便易得等优点,在医院实验室中被广泛应用.但由于ELISA影响因素较多,为提高对丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)检测的质量,在不进行抗-HCV补充确认实验的前提下,我院对初检阳性的标本进性了重复检测.
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ELISA竞争法测定人尿金属硫蛋白的初步应用
[目的]探讨应用ELISA竞争法测定正常人尿金属硫蛋白含量的价值.[方法]应用ELISA法测定了20～23岁健康在校大学生93份(男49,女44)晨尿样品的MT.[结果]本法的检测下限为2.5ng/ml,操作内和操作间的变异系数分别为2.25%和1.19%,回收率为97.6%～100.0%;人尿MT含量为(6.86±6.02)ng/μmol肌酐.[结论]本法具有较好的精密度和准确度;大学生尿MT含量无性别差异.
关键词： 金属硫蛋白(MT) 人尿 酶联免疫吸附测定(ELISA) -
基于胆汁泡相糖蛋白特征而研制诊断胆结石ELISA药盒的可行性分析
目的:分析胆汁泡相糖蛋白的特征并评估其ELISA药盒临床应用的可行性.方法:应用凝集素探针介导的点印迹法分析泡蛋白糖链的组成与结构,利用酶解方法测定泡蛋白各组分的构成,并分析其氨基酸组成.利用Westem blot法分析胆汁与血清泡蛋白的同源性,根据ELISA kit测定泡蛋白的含量分布,并以ROC曲线判别ELISA kit的临床应用价值.结果:化学分析泡蛋白由多肽和寡糖组成,其中多肽分子量约为21 u,糖链约占总蛋白含量的37.3%,为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖.泡蛋白具胆汁与血清分布两相性,胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清33.5 u泡蛋白含量分别为(213.4±70.1)μg/ml、(179.8±97.9)μg/ml,明显高于胆色素性结石症组和正常对照组(P<0.05),而后两者间差异无显著性(P>0.05).ELISA kit判断胆固醇性结石的胆汁相敏感度和特异度分别为85%和90%,而血清相为61.7%和93.3%.结论:胆汁泡蛋白是一种新认识的胆结石促成核因子,其在不同人群中具有表达谱的异质性,ELISA kit辅助诊断胆石症具有一定的临床应用价值,但尚需更多病例的积累和验证.
关键词： 糖蛋白 泡蛋白 酶联免疫吸附测定(ELISA) ROC曲线 -
宫颈癌患者HPV16感染及其血清抗体检测分析
目的: 探讨宫颈癌与人乳头瘤病毒16(HPV16)感染及其血清抗体的关系,为HPV感染及宫颈癌的临床诊断提供理论依据. 方法: 选择28例宫颈癌患者,用PCR方法检测宫颈癌组织的HPV型别;并采用重组杆状病毒-昆虫细胞系统制备HPV16病毒样颗粒(VLPs),用ELISA方法检测其血清HPV16 VLPs抗体,同时以36份尖锐湿疣患者血清及72份健康体检者血清作为对照. 结果: 宫颈癌HPV通用型DNA阳性率为50%(14/28),HPV16 DNA阳性率为42.9%(12/28),HPV18 DNA阳性率为3.5%(1/28).宫颈癌组血清HPV16 VLPs抗体阳性率为42.9%(12/28)、抗体滴度中位数为0.0380(0.0452),较健康对照组阳性率为1.4%(1/72)、中位数-0.0220(-0.0265)和尖锐湿疣组阳性率为8.3%(3/36)、中位数为0.0165(0.0415)差异具显著性意义(P＜0.01).HPV16 DNA检测法与HPV16 VLPs ELISA血清抗体检测法两者间呈中度相关(K=0.4 71,P<0.05). 结论: 本组宫颈癌以HPV16感染为多见,HPV16 VLPs血清ELISA抗体检测可用作HPV16感染的血清学诊断和宫颈癌的免疫学研究.
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120例孕妇血清ToRCH系列抗体检测结果分析
[目的]探讨孕妇ToRCH的感染情况. [方法]用ELISA法检测血清中ToRCH特异性IgM和IgG 抗体. [结果]弓形体(Toxo)抗体阴性,风疹病毒(RUV)、巨细胞病毒(CMV)和疱疹病毒2型(HSV-Ⅱ)的IgM、IgG阳性率分别为0.8%和30.0%、1.7%和33.3%、6.6%和50.0%.出现ToRCH抗体交叉阳性共48例,阳性率40.0%. [结论]汕头市部分孕妇存在ToRCH感染,应引起有关部门重视.
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采供血机构应用ELISA法筛查梅毒的必要性
[目的] 探讨无偿献血模式下梅毒抗体筛查方法的选择. [方法] 比较福州市13 248名无偿献血者梅毒ELISA(双抗原夹心)法与TRUST法的检测结果,并与TPPA结果对照. [结果] 梅毒抗体阳性97例,其中TRUST法检出率0.23%(31例),ELISA法0.68%(90例). [结论] TRUST法检出率低于ELISA法,无法满足安全血液的要求,不宜作为无偿献血常规筛查方法.
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无菌性脑膜炎患者埃可病毒感染的IgM抗体检测
[目的]探讨无菌性脑膜炎(脑炎)患者埃可病毒(ECHO)的感染情况. [方法]用 ELISA 法检测患者血清特异性IgM 抗体. [结果]136例脑炎患者血清和对照组60例血清中 ECHO IgM 抗体阳性率分别为37.5%和3.3% (Χ2 = 24.63,P ＜0.01).儿童组(3个月～14岁)阳性率43.2%,成人组(15～72岁)阳性率30.6%(P>0.05). [结论]潮汕地区脑炎患者中存在 ECHO 病毒感染.
关键词： 肠道病毒 无菌性脑膜炎 酶联免疫吸附测定(ELISA) IgM -
鸡卵黄抗眼镜王蛇毒抗体IgY的理化特性
目的研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体并研究该抗体的理化特性.方法拟用减毒后的眼镜王蛇毒免疫母鸡后,从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体IgY.采用间接ELISA法对此抗体的理化特性进行研究.结果 ELISA显示免疫后12天开始出现特异性抗体,且抗体滴度逐渐升高,约在免疫后60天左右,高可达1:100000,此高滴度可维持30天,以后滴度逐渐降低,至免疫后100～110天.滴度仍可维持在高滴度的一半(1:50000).此抗体在10～65℃温度范围内活性保持稳定;在pH为4～12范围内,抗体活性稳定;此抗体经胰蛋白酶处理1h内,活性下降不明显,但1h以后活性迅速下降.结论从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体IgY,是可行的,稳定的.
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抗蝰蛇毒卵黄抗体的制备及其免疫特性研究
目的 制备一种新的抗蝰蛇毒卵黄抗体.并研究其免疫特性. 方法 将产卵母鸡分为低剂量(A组)和高剂量(B组)免疫组.以甲醛减毒法制备的蝰蛇毒抗原免疫母鸡;以水稀释法联合硫酸铵沉淀和超滤法分离纯化卵黄抗体;总蛋白质通过改良Lowry法测定;以ELISA法测定卵黄抗体的效价、总卵黄抗体与特异抗体含量、交叉反应. 结果 低、高剂量组均诱导母鸡产生有效免疫应答.高剂量组免疫效价高于低剂量组(P<0.05),高剂量组于免疫后约40d抗体效价迭高峰,持续约4周;而低剂量组在免疫后约50d抗体效价迭高峰,持续约2周.免疫过程中;两组总卵黄蛋白无显差异(P>0.05),但高剂量组卵黄中平均特异性抗体(0.29±0.04)mg/ml明显高于低剂量组(0.21±0.03)mg/ml(P<0.05).制备的抗蝰蛇毒IgY与蝰蛇毒抗原具有较高特异性,但与五步蛇(54.3%)、蝮蛇(47.5%)及竹叶青蛇(43.1%)有明显交叉反应,与眼镜蛇(11.7%)有轻度的交叉反应. 结论 研究证实蝰毒抗原易诱导母鸡产生良好的免疫应答,并成功制备了抗蝰蛇毒的卵黄抗体,为蛇伤防治提供新的途径.
关键词： 蝰蛇 卵黄抗体(IgY) 鸡 免疫特性 酶联免疫吸附测定(ELISA) -
抗甘草酸二铵抗血清的制备
目的 通过人工抗原的构建,制备抗甘草酸二铵(DG)的特异性抗血清.方法 采用碳二亚胺法将DG与牛血清蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫抗原DG-BSA和包被抗原DG-OVA.用合成的人工抗原免疫家兔,制得抗甘草酸二铵的特异性抗血清,并通过酶联免疫方法 (ELISA)对抗血清进行鉴定.结果 制备了抗甘草酸二铵的多克隆抗体,获知理想的包被抗原的浓度为200 ng/mL,抗血清的工作浓度为1:10 000,雌、雄家兔抗血清的效价分别为1:51 200和1:25 600.结论 采用化学反应构建人工抗原的方法 ,可以制备出针对甘草酸二铵的特异性抗血清,从而为甘草酸二铵的鉴定及体内代谢的免疫学分析研究奠定了基础.
关键词： 甘草酸二铵 抗血清 酶联免疫吸附测定(ELISA) -
抗槲皮素抗体的研制
目的通过人工抗原的构建,制备针对槲皮素的特异性抗体.方法采用混合酸酐法合成的槲皮素卵清蛋白结合物作为包被抗原,将槲皮素与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)结合,制成人工抗原.用人工抗原免疫家兔,制备了针对槲皮素的特异性抗体,并用双向琼脂扩散试验和ELISA方法对抗体进行了鉴定.IR、UV、TLC和熔点分析表明,中间体结合物为新的化合物.结果理想的包被抗原浓度为400 ng/ml,相应抗血清工作浓度为1:1 600.结论运用混合酸酐法可以合成槲皮素人工抗原,进一步免疫可制备抗槲皮素的特异性抗体.
关键词： 槲皮素 抗体 双向琼脂扩散试验 酶联免疫吸附测定(ELISA) -
鼠青光眼模型中热休克蛋白27的表达及其作用
目的:探讨热休克蛋白27(HSP27)在鼠青光眼模型视网膜神经节细胞(RGCs)中的表达以及眼压对抗HSP27自身抗体的影响.方法:使用SPSS12.0软件将55只Wistar大鼠随机分为高眼压组(25只鼠)、sham对照(假手术)组(25只鼠)及正常对照组(5只鼠).采用电凝鼠巩膜表面至少3组静脉及角膜缘周围血管,建立鼠青光眼模型.采用免疫组化和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法分别检测术后1,2,3,4及8wk视网膜中RGCs以及神经纤维层(RNDL)HSP27的表达、分布以及血清中抗HSP27抗体水平.结果:随着眼压升高及高眼压持续时间延长,高眼压组右眼RGCs中HSP27表达逐渐增强,与其左眼、sham对照组右、左眼和正常对照组右、左眼比较,差异均有统计学意义(P＜0.001),且RNFL中也出现HSP27的表达.高眼压组血清中抗HSP27抗体水平在术后1wk轻度升高(P＞0.05),随着眼压升高及高眼压持续至术后8wk,血清中HSP27抗体水平逐渐升高并稳定于较高水平,与sham对照组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:内源性HSP27表达增强可能在青光眼视神经病变中具有重要作用.
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亚急性慢性炎性周围神经病抗GM1抗体检测的意义
目的:通过测定亚急性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(SIDP)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(CIDP)患者血清和脑脊液中抗GM1-IgG抗体及抗GM1-IgM抗体,探讨其临床意义.方法:应用ELISA法检测20例CI-DP、8例SIDP患者血清和脑脊液中抗神经节苷脂(GM1)抗体阳性率.结果:SIDP组血清和脑脊液中抗GM1-IgG抗体与其他神经疾病(OND)组、正常对照(NC)组相比,差异有显著性(P＜0.05);CIDP组血清中抗GM1-IgM抗体及抗GM1-IgG抗体阳性率与其他神经疾病组、正常对照组相比差异无显著性.结论:抗GM1-IgG抗体与SIDP相关.
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重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗免疫原性评价方法的研究
目的:探讨重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)候选疫苗免疫原性评价方法.方法:对以假病毒为基础的中和实验(ZsGreen法)测定血清中和滴度,以微球为基础建立的Luminex法测定中和滴度和ELISA法测定抗体滴度的3种方法进行相关性研究以及体内效价测定(ED50法)和体外相对效力测定(IVRP法)的相关性分析,同时对5种免疫原性的评价方法进行重复性验证.结果:ZsGreen法、Luminex法测定的中和滴度和ELISA法测定的抗体滴度检测结果表明:滴度值呈明显的剂量效应以及侯选疫苗具有良好的免疫原性.采用SPSS统计软件分析,对于HPV 16L1 ZsGreen法、Luminex法和ELISA法的相关系数分别为0.791,0.800,0.747(Spearman相关系数)和HPV 18L1的相关系数分别为0.734,0.625,0.634(Spearma相关系数).并且ED50法和IVRP法具有一定的相关性.5种方法重复性验证的RSD分别为:5.3%(ZsGreen)、5.2%( Luminex)、8.0%(ELISA)、32.3%( ED50)、6.3%(IVRP).结论:建立的HPV 16和HPV 18型疫苗评价方法为快速准确地评价免疫原性提供了多种解决方法.
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融合蛋白ProteinA残留检测方法的建立
目的:建立一种融合蛋白的Protein A(ProA)残留检测方法.方法:利用Cygnus公司的F400检测试剂盒,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法进行残留量检测,通过基质干扰试验、校正标准曲线法和非校正标准曲线的对比及加标回收率试验考察基质的干扰.用校正标准曲线法对3批融合蛋白原液进行残余ProA检测,并对该方法进行精密性和准确性验证.结果:产品基质对试验检测有干扰,应用校正标准曲线法可以消除这种干扰.3批供试品原液经3次测定,残余ProA的平均值分别为(0.24±0.03)、(0.29±0.03)和(0.36±0.03)ng·mL-1,RSD均小于15％.1批原液经3次测定,回收率为(99.92±8.28)％.结论:已成功建立该融合蛋白的ProA残留量检测方法,重复性好,准确性高,可作为该融合蛋白ProA残留量的常规检测方法,也为融合蛋白及单抗类制品的ProA残留量检测提供借鉴.
关键词： 融合蛋白 ProA残留检测 酶联免疫吸附测定(ELISA) 校正标准曲线 验证 -
甲型流感病毒NP含量ELISA检测方法的建立
目的:建立一种双抗体夹心ELISA检测方法,以检测流感疫苗中甲型流感病毒的核蛋白(NP)含量.方法:体外重组表达NP作为ELISA法测定蛋白含量参考品,筛选捕获抗体和检测抗体工作浓度、起始浓度和系列稀释倍数,建立ELISA法并对其进行优化和验证.结果:获得的重组NP纯度为99.0％以上.建立和优化后的ELISA参数:捕获抗体4μg· mL-1,检测抗体1∶1 000.NP含量参考品起始浓度为300 ～600 ng·mL-1,四参数拟合S型曲线的决定系数R2大于0.95,对疫苗中的甲型流感病毒NP具有特异性,原液和成品的加标回收率为88.2％～ 95.3％,方法重复性(n=5)的RSD小于15％.结论:建立的流感疫苗中甲型流感病毒NP含量ELISA检测方法特异性好,准确性和精密性高,可用于疫苗样品中甲型流感病毒NP含量的检测.
