首页 > 文献资料
-
多药耐药相关蛋白4对脂多糖诱导的内皮细胞通透性及细胞骨架的影响
目的 探讨多药耐药相关蛋白4 (MRP4)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)通透性及细胞骨架的影响.方法 PMVECs细胞株培养3至6代后随机分为4组,对照组(细胞不做任何处理)、LPS组(细胞仅接受LPS刺激)、shMRP4重组腺病毒组(Ad-shMRP4,将针对大鼠MRP4基因设计的短发夹RNA构建腺病毒载体上,通过腺病毒感染细胞+LPS刺激)、shRNA重组腺病毒组(Ad-shRNA,带绿色荧光蛋白基因空白的重组腺病毒载体感染细胞+ LPS刺激).通过荧光显微镜观察细胞感染率,Western botting检测MRP4的表达水平,Transwell小室法检测单层细胞通透性,激光共聚焦显微镜观察细胞内纤维肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况.多组间差异采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与对照组比较,LPS组及Ad-shRNA组MRP4的表达水平显著上调(P＜0.05)、单层细胞通透性显著增加(2、6、12、24h分别为:0.28±0.02和0.41±0.04、0.32±0.02;0.30±0.01和0.53±0.04、0.39±0.03;0.33±0.04和1.12±0.17、0.70±0.07;0.32±0.03和0.79±0.02、0.57±0.05,P＜0.05),F-actin分布紊乱、重构以及应力纤维形成.与LPS组比较,Ad-shMRP4组MRP4的表达水平明显下调(P＜0.05)、单层细胞通透性明显降低(2、6、12、24 h分别为:0.41±0.04和0.32±0.02;0.53±0.04和0.39±0.03;1.12±0.17和0.70±0.07;0.79±0.02和0.57±0.05,P＜0.05),F-actin重构以及应力纤维形成显著减少.结论 MRP4基因沉默显著增减轻LPS诱导的内皮细胞通透性增高及细胞骨架破坏,对内皮细胞屏障发挥保护作用.
-
抑制多药耐药相关蛋白4对脓毒症大鼠肺血管内皮屏障功能的保护作用
目的 探讨抑制多药耐药相关蛋白4 (MRP4)对脓毒症大鼠肺血管内皮屏障功能的影响.方法 60只Sprague Dawley大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、脓毒症组和MRP4抑制剂干预组,每组20只动物.脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔法.MRP4抑制剂干预组于脓毒症模型建立前30 min腹腔注射MRP4抑制剂MK571 (20 mg/kg).术后24h,采用ELISA法检测血清促炎细胞因子白介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,取肺组织做病理学检查,用伊文思蓝法测定肺组织渗透性.结果 与假手术组大鼠相比,脓毒症组大鼠血清IL-6和TNF-α水平显著升高,肺组织损伤明显,肺组织渗透性增强.与脓毒症大鼠组比较,MRP4抑制剂干预组大鼠血清IL-6和TNF-α水平明显降低,肺组织病理损伤减轻,肺组织渗透性减弱.结论 抑制MRP4可显著改善脓毒症大鼠肺血管内皮屏障功能障碍.
-
MRP4基因型与炎症性肠病患者6-硫鸟苷酸浓度、不良反应的相关性研究
目的 考察多药耐药相关蛋白4(MRP4)的单核苷酸多态性(SNP)T-1393C和C934A与炎症性肠病(IBD)患者服用硫嘌呤类药物后的活性代谢产物6-硫鸟苷酸(6-TGNs)浓度及药物不良反应之间的相关性.方法 共97名单独服用硫唑嘌呤(AZA)或6-巯基嘌呤(6-MP)的IBD患者纳入研究,收集全血提取DNA,用聚合酶链反应-直接测序法进行MRP4 T-1393C和C934A基因型分析;分析MRP4基因型与6-TGNs浓度及不良反应的相关性.结果 相同剂量下,MRP4-1393突变型(TC/CC型)患者服用AZA或6-MP后发生不良反应的风险显著高于MRP4-1393野生型(TT型)患者(OR=2.55,95%CI:0.94~6.90),尤其是发生骨髓抑制的风险TC/CC型显著高于TT型(OR=11.20,95%CI:1.18~106.26).结论 MRP4-1393 T>C突变与药物不良反应高发生率密切相关,该基因型检测将有助于指导硫嘌呤药物的个体化应用.
-
人多药耐药相关蛋白MRP4不同状态的分子模型
ATP结合盒(ABC)转运蛋白中的多药耐药相关蛋白MRP4与多药耐药性的产生有关.多药耐药性的产生对于抗肿瘤和抗感染的治疗是一个很大的挑战.在一些MRP4高表达的肿瘤中,抑制MRP4的作用对影响肿瘤的进程和药物的耐药性都有显著效果.由于MRP4的结构信息非常有限,缺少X-射线晶体结构,同源模建是获得MRP4三维结构的一种有效的方法.我们主要基于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的P-gp,海栖热胞菌(Thermotoga maritima)的ABC转运蛋白TM287/288及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的ABC转运蛋白Sav 1866的结构分别建立了人MRP4的底物摄取态、底物转运态和底物释放态模型.模建的结构进一步进行能量小化和分子动力学模拟优化,经过多种工具和服务器的验证证明了模建结构的合理性和可靠性.这些MRP4的结构可以用来研究MRP4结构和功能的关系,以及设计特定的膜转运蛋白调节剂(MTMA).
-
多药耐药相关蛋白4抑制剂对脓毒症 急性肺损伤大鼠的保护作用
目的：探讨多药耐药相关蛋白4（MRP4）抑制剂对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠的保护作用。方法将60只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、脓毒症组及MRP4抑制剂MK571干预组，每组20只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）建立大鼠脓毒症模型，Sham组仅开腹不进行盲肠结扎和穿刺。MK571干预组于制模前30min腹腔注射20mg/kgMRP4抑制剂MK571，Sham组和脓毒症组给予等量生理盐水。于术后24h取大鼠股动脉血进行血气分析，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；取肺组织计算湿/干质量（W/D）比值，采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测MRP4蛋白表达。结果与Sham组相比，脓毒症大鼠动脉血pH值和动脉血氧分压（PaO2）显著降低〔pH值：7.18±0.03比7.40±0.03，PaO2（mmHg，1mmHg＝0.133kPa）：63.15±6.24比98.05±2.58〕，而动脉血二氧化碳分压（PaCO2）明显升高（mmHg：56.60±8.30比37.85±3.18），血清TNF-α水平亦显著升高（ng/L：146.24±19.99比25.77±9.83）；肺组织W/D比值明显增加（7.75±0.47比4.09±0.58），MRP4蛋白表达显著上调（灰度值：0.153±0.006比0.087±0.005，均P＜0.05）。与脓毒症组相比，MK571预处理后大鼠动脉血pH值（7.30±0.02比7.18±0.03）和PaO2水平（mmHg：80.30±5.34比63.15±6.24）显著升高，PaCO2明显降低（mmHg：29.25±3.24比56.60±8.30），血清TNF-α水平显著降低（ng/L：97.96±16.72比146.24±19.99）；肺组织W/D比值明显减少（5.89±0.51比7.75±0.47），MRP4蛋白表达显著下调（灰度值：0.124±0.006比0.153±0.006，均P＜0.05）。结论 MRP4抑制剂通过下调MRP4表达可明显改善脓毒症ALI大鼠肺功能，降低炎性因子水平，从而对ALI大鼠起到保护作用。
-
多药耐药相关蛋白4在不同放射敏感性大肠癌细胞中的表达
目的 通过对大肠癌放射敏感细胞株与抵抗细胞株的筛选,观察多药耐药相关蛋白4(MRP4)在2株细胞中的表达,探讨MRP4蛋白表达与放射敏感性的关系.方法 用不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)X射线照射大肠癌细胞株LOVO、DLD-1、HT-29、HCT116、RKO并从中筛选出放射敏感和抵抗细胞株,免疫组织化学方法检测MRP4蛋白在这2株细胞中的表达差异.结果 放射敏感细胞株LOVO与放射抵抗细胞株RKO在射线干预后生长抑制曲线差异有统计学意义(P＜0.01)；MRP4蛋白在RKO与LOVO中的低表达率分别为71％、17％和29％、83％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MRP4蛋白在放射敏感细胞株LOVO中低表达,而在放射耐受细胞株RKO中高表达,表明MRP4蛋白表达不仅和化疗抵抗相关,还与肿瘤的放射抵抗相关.
-
川西獐牙菜醇提物对大鼠胆汁酸转运蛋白Mrp4、转录因子Nrf2表达的影响
目的 观察川西獐牙菜醇提物对肝细胞胆汁酸转运蛋白Mrp4(multidrug resistanceassociated protein 4,Mrp4)、转录因子Nrf2的调控作用.方法 将14只SD大鼠分为2组:正常对照组、川西獐牙菜醇提物组,每组7只.分别用生理盐水、川西獐牙菜醇提物处理7d后,收集组织标本,免疫组化检测Mrp3、Mrp4在肝脏的表达变化,Western blot及RT-PCR检测胆汁酸转运蛋白Mrp3、Mrp)4和转录因子Nrf2、核受体Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化.结果 在mRNA水平,RT-qPCR结果显示川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组增加2.1倍,同时,Mrp3表达增加1.7,转录因子Nrf2表达增高1.8倍,核受体Lrh-1表达增高1.4倍;在蛋白水平,Western blot结果表明川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组组增加2.5倍,同时,Mrp3表达增高3.0倍,转录因子Nrf2表达增高2.3倍,核受体Lrh-1表达增高1.3倍,而免疫荧光结果则进一步证实了RT-qPCR与Western blot的结果,显示川西獐牙菜醇提物组Mrp3、Mrp4的表达较正常对照组组明显增强.结论 川西獐牙菜醇提物能够刺激肝细胞表面胆汁酸转运蛋白Mrp4表达增高,这种调控作用可能与Nrf2相关.
