首页 > 文献资料
-
血必净注射液对脂多糖刺激大鼠调节性T细胞凋亡及其介导效应T细胞免疫功能的影响
目的 探讨中药血必净注射液对体外脂多糖(LPS)刺激CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡及其介导效应T细胞(Teff)增殖反应、分泌白细胞介素-2(IL-2)功能的影响.方法 40只雄性清洁级Wistar大鼠,实验前禁食12 h.免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg,分为对照组(n=8)、抗CD3/CD28组(n=8)、抗CXB/CD28+LPS组(/1,=8)、抗CD3/CD28+血必净组(n=8)和抗CD3/CD28+LPS+血必净组(n=8).培养3 d后流式细胞术检测CD4+CD25+Treg凋亡率、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达,酶联免疫吸附试验检测IL-10分泌.同时,CD4+CD25+Treg与CD4+CD25-T细胞1:1培养,刀豆素A刺激68 h后分析Treg对Teff增殖的抑制效应,并检测上清中IL-2/可溶性IL-2受体水平.结果 抗CD3/CD28诱导Treg凋亡率为(33.70±3.06%),显著高于对照组(12.84±0.84)%;抗CD3/CD28+LPS+血必净组(45.13±2.70)%凋亡率明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.41±1.63)%,P＜0.01].同时,CD4+CLY25+Treg roxp3和CTLA-4表达及IL-10分泌随凋亡增加而降低.抗CD3/CD28+血必净组(31.26%)Teff增殖反应平均抑制率显著低于对照组(54.48%,P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组抑制率与抗CD3/CD28+LPS组比较亦明显下降(P＜0.01).此外,抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组IL-2分泌水平均显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01).结论 LPS刺激可明显上调大鼠Treg对Teff的抑制功能,血必净注射液能通过促进Treg凋亡而有效改善其对Teff的抑制效应.
-
microRNA-10a对脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg免疫功能的影响
目的 探讨脓毒症小鼠CD4+CD25+Treg(regulatory cell)细胞中microRNA-10a(miR-10a)表达规律及与细胞免疫功能的关系.方法 采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立稳定的小鼠盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)模型,分别于术后1、3、5、7d处死小鼠,无菌留取脾脏,免疫磁珠法分选CD4+T细胞与CD4+CD25+T细胞(CD4+CD25+Treg).流式细胞术检测CD4+CD25+Treg胞内叉头蛋白翼状螺旋转录因子P3(Forkhead/winged helix transcription factorp3,Foxp3),CCK-8法检测脾效应T淋巴细胞增殖,实时定量PCR(Real-time PCR)检测Treg中miR-10a的基因表达水平.小鼠尾静脉注射慢病毒下调miR-10a,观察小鼠免疫功能.数据采用SPSS 19.0统计软件进行数据处理,两组样本比较采用独立样本f检验,多组均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)和Dunnett-t检验.结果 正常组小鼠CD4+CD25+Treg细胞在CD4+T细胞中的比例为(7.34±1.2)％,造模后脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg比例1、3、5、7d明显升高(P＜0.05).与假手术组相比,脓毒症小鼠Foxp3的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)也明显高于假手术组(P＜0.05).Real-time PCR检测CD4+CD25+Treg中miR-10a的表达.结果发现假手术组小鼠与正常组小鼠相比差异无统计学意义(P＞0.05).脓毒症小鼠Treg中miR-10a表达较假手术组升高(P＜0.05).脓毒症鼠尾静脉注射携带miR-10a抑制序列的慢病毒后,CD4+CD25+Treg/CD4+T比例明显升高(P＜0.05),且Foxp3的平均荧光强度也明显增强(P＜0.05),CD4+T细胞的增殖能力相应减弱(P＜0.05).结论 在脓毒症致病过程Treg中miR-10a表达上调,抑制miR-10a水平能够显著提高Treg的比例和促进免疫抑制功能.鉴于CD4+CD25+Treg在脓毒症免疫功能紊乱中的重要作用,miR-10a可能是脓毒症免疫调理治疗的有效靶点.
-
老年小鼠对Lewis肺癌敏感性及T细胞亚群差异观察
目的 探讨青年和老年小鼠对Lewis肺癌成瘤敏感性及其免疫微环境T细胞亚群的差异. 方法 青年(2月龄)与老年(12月龄)小鼠各6只,分别在左腋下注射1×106个Lewis细胞,观察青年与老年小鼠体重及肿瘤生长情况;24 d后取血进行血常规检测,用流式检测脾脏CD4+、CD8+T细胞比例以及肿瘤微环境中浸润CD4+、CD8+T细胞及相关效应T细胞比例. 结果 老年组体重明显高于青年组(P＜0.001),老年和青年小鼠的瘤重分别为(5.084±0.528)g和(2.963±0.378),差异具有统计学意义(t=3.349,P=0.012);血常规指标检测显示,老年组白细胞及亚群(除单核外)数量明显低于青年组(P＜0.05);流式结果显示,老年组脾脏的效应和记忆效应CD4+T细胞比例均明显高于青年组(P＜0.001);且肿瘤微环境的效应和记忆效应CD8+T细胞表达也均明显高于青年组(P＜0.05);CBA检测结果显示,老年组和青年组肿瘤微环境中IL-6、IL-10的相对平均荧光程度值分别(25 090±3 820,10 670±1 793)、(6 252±864,3 061±451),且老年组的表达明显低于青年组(f =3.925,P=0.01;t=3.552,P=0.02). 结论 青年小鼠Lewis肺癌的生长比老年小鼠更快,原因之一可能由于炎症与免疫系统的差异导致.
-
重型再生障碍性贫血患者CD8+效应T细胞损伤骨髓造血途径的研究
目的 研究重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血CD8+ CD25+和CD8+HLA-DR+T细胞数量及其杀伤靶细胞的途径，探讨SAA的免疫发病机制。方法 应用流式细胞术检测29例SAA(初治14例、缓解15例)患者及12名健康对照者外周血CD8+ CD25+和CD8+ HLA-DR+T细胞的数量及其胞质内穿孔素、颗粒酶B、肿瘤坏死因子β(TNF-β)、胞膜FasL表达。结果 SAA初治组患者CD8+ CD25+T细胞占CD8+和CD3+T细胞的比例分别为(3.67±2.58)％和(2.25±1.35)％，缓解组为(5.19±4.29)％和(2.98±1.35)％，正常对照组为(4.84±2.31)％和(2.11±1.88)％，CD8+CD25+T细胞占CD8+和CD3+T细胞的比例三组间比较差异无统计学意义(P值均＞0.05)。初治组CD8+ HLA-DR+T细胞占CD8+T细胞比例为(39.30±8.13)％，缓解组为(20.65±5.38)％，正常对照组为(18.34±6.68)％，初治组明显高于缓解组及正常对照组(P＜0.01)，缓解组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。SAA初治组CD8+ HLA-DR+T细胞占CD3+T细胞比例为(27.81±7.10)％，缓解组为(12.02±3.03)％，正常对照组为(8.50±2.33)％，初治组明显高于缓解组及正常对照组(P＜0.01)，缓解组明显高于正常对照组(P＜0.05)。SAA初治组CD8+ HLA-DR+T细胞穿孔素、颗粒酶、TNF- β、FasL中位表达比例分别为8.51％、96.08％、72.11％、94.25％，均明显高于缓解组(1.78％、85.20％、34.38％、51.20％)及正常对照组(1.86％、82.09％、17.92％、32.91％)(P值均＜0.05)，缓解组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 SAA患者外周血CD8+ HLA-DR+效应T细胞比例增加，CD8+效应T细胞影响靶细胞的穿孔素-颗粒酶途径、细胞因子(TNF-β)途径、Fas/FasL途径均参与了骨髓造血细胞损伤的过程。
-
大黄酸增强低氧环境中效应T细胞的抗结肠癌活性
目的:验证中药有效成分大黄酸抑制低氧引起的结肠癌细胞中免疫抑制分子的表达,为大黄酸与效应T细胞的联合应用提供基础理论依据.方法:首先根据CCK-8检测大黄酸对结肠癌细胞系的细胞毒作用,选择恰当的研究浓度;然后用Western blot和qPCR检测在低氧条件下,一定浓度的大黄酸能否下调缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和某些免疫抑制分子的水平;后在我们自己建立的能够被T淋巴细胞特异识别杀伤的结肠癌细胞模型上,进一步检测大黄酸在低氧条件下对效应T细胞活性的影响.结果:与常氧对照组相比,低氧组、低氧+25μM大黄酸组和低氧+50μM大黄酸组细胞中程序性死亡受体-配体1(PD-L1)mRNA的相对量分别为1.63±0.29、0.80±0.17和0.47±0.12;半乳糖凝集素-1(galectin-1)mRNA的相对量分别为4.42±0.73、0.47±0.11和0.24±0.11.当效靶比为1:1、2:1和4:1时,T细胞对肿瘤细胞的杀伤百分率分别为(27.32±3.05)%、(42.68±3.69)%和(54.02±1.82)%;而低氧条件下,杀伤百分率分别下降至(21.53±3.74)%、(33.55±1.51)%和(45.20±2.27)%;在低氧条件下加入50μM大黄酸,杀伤百分率又分别升高至(32.70±2.37)%、(47.01±3.15)%和(57.26±1.12)%,各组之间有显著性差异(P<0.05).结论:一定浓度的大黄酸能够降低低氧引起的免疫抑制分子表达升高,并且可以逆转由于低氧产生的效应T细胞活性下降.大黄酸有望与T细胞过继免疫疗法联合使用,用于结肠癌的治疗.
-
孤立性房颤患者效应T细胞失衡的研究
目的 探讨心房颤动(房颤)与效应性T细胞失衡的相关性及阵发性与持续性房颤患者之间是否存在差异.方法 选取40例孤立性房颤患者,其中阵发性房颤患者(PAF组)25例,持续性房颤患者(CAF组)15例,另选择性别、年龄匹配的健康体检者20例作为对照组.清晨空腹抽血,以ELISA法检测3组血浆中IFN-γIL-4水平,以流式细胞术检测外周血中Th1、Th2细胞比例.结果 与对照组比较,PAF组和CAF组Th1细胞比例和血浆IFN-r水平显著升高.3组间Th2细胞比例和血浆IL-4水平比较均无显著性差异.PAF组和CAF组间Th1细胞比例和血浆IFN-r水平比较无显著性差异.结论 孤立性房颤患者的Th1细胞活性升高,Th1/Th2失衡,这种变化可能与房颤的发生发展相关.
-
CD8+T细胞活化与分化的分子机制
CD8+ T细胞识别由MHCⅠ分子递呈的抗原肽,由于大多数有核细胞都表达MHCⅠ分子,因此CD8+ T细胞在清除被病毒、胞内菌、寄生虫等感染的细胞或突变的肿瘤细胞中发挥着重要作用.识别病原微生物等抗原后,CD8+ T细胞活化并分化形成多种类型的效应和记忆细胞,不仅能及时清除被感染的细胞,也能形成长期保护.各亚群CD8+ T细胞的表面分子、功能和定位不同,细胞存活的时间、再次感染时的增殖能力和效应功能也有所差别.本文主要讨论CD8+ T细胞如何受到多条信号通路和转录因子调控,活化和分化成不同类型的效应和记忆细胞,并对临床应用T细胞抵御肿瘤和病原微生物的进展作一简单概述.
-
肿瘤坏死因子-β对重型再生障碍性贫血患者效应T细胞损伤骨髓造血的影响
目的:研究肿瘤坏死因子-β(TNF-β)对重型再生障碍性贫血(SAA)患者效应T细胞(CD8+HLA-DR+T细胞)损伤骨髓造血的影响,探讨TNF-β在SAA免疫发病中的作用.方法:以免疫磁珠阳性分选15例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞作为效应细胞,以阴性分选去除15名正常人骨髓单个核细胞中CD3+T细胞后作为靶细胞,两者混合培养,于体系中分别加入不同浓度TNF-β(终浓度分别为0、15、25、50ng/ml)为实验组,并设空白对照组,孵育72小时后,通过流式细胞术以Annexin V检测靶细胞凋亡状况,采用ELISA法测定培养上清液IL-10、IFN-γ水平.结果:空白对照组及3个实验组细胞凋亡比例分别为(49.85±20.33)%、(51.65 ±20.34)%、(55.94 ±20.19)%、(57.72 ±19.45)%,TNF-β终浓度为50 ng/ml组及25 ng/ml组均明显高于空白组和15 ng/ml组细胞凋亡比例(P<0.05),但空白组与15 ng/ml组,25 ng/ml组与50 ng/ml组细胞凋亡比例无显著差异(P>0.05).空白对照组及各实验组培养上清IL-10浓度分别为(217.99±29.47)ng/ml、(216.47±29.00)ng/ml、(212.15±13.19)ng/ml、(218.01±28.61)ng/ml,各组差异无统计学意义(P>0.05).TNF-β终浓度50 ng/ml 组培养上清IFN-γ水平[(593.50±48.18)ng/ml]明显高于空白对照组[(544.85±69.77)ng/ml],15 ng/ml组[(567.38±74.51)ng/ml]、25 ng/ml组[(544.05±79.69)ng/ml](P<0.05).结论:TNF-β能增强SAA患者效应T细胞诱导骨髓造血细胞凋亡,并呈浓度依赖性;高水平的TNF-β可能还促进SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞分泌IFN-γ,两者具有协同细胞毒作用.
-
EAE诱导过程中脾脏及CNS浸润Treg/Teff的变化
探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)诱导过程中脾脏及中枢神经系统(central nervous system,CNS)CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg、效应T细胞(effector T cell,Teff)的变化及作用.用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG35-55)免疫C57BL/6小鼠诱导EAE;用流式细胞仪分析EAE发病初期及高峰期脾脏和CNS浸润Treg、Th1和Th17的变化.MOG35-55肽诱导产生典型的EAE症状,脊髓可见大量的单个核细胞浸润;EAE发病前,脾脏Treg、Th1、Th17数量增加,随着EAE临床症状的出现,脾脏Treg、Teff均减少;EAE发病前既有少量Teff迁移至CNS,主要为Th17;EAE发病高峰期,CNS内Th17比例降低,Th1比例及数量显著增加;EAE发病前CNS可见少量Treg存在,发病后大量Treg迁移至CNS,但不能抑制CNS的炎症反应.以上结果提示,Th17可能参与了CNS免疫损伤的启动,而CNS浸润的Thl与疾病的严重程度密切相关;EAE发病高峰期脾脏Treg伴随着Teff大量迁移至CNS,但不能控制EAE的进展.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 调节性T细胞 效应T细胞 中枢神经系统 -
白细胞介素2受体信号在免疫系统活化与稳定中的作用
IL-2受体信号既可以维持机体免疫耐受,也可以调节细胞免疫应答.在本文中作者通过回顾IL-2受体结构、信号以及功能的相关研究,初步阐述了IL-2受体信号对于各T细胞亚群的不同作用,同时也描述了如何改造IL-2以选择性作用于特定T细胞亚群,为将其进一步应用于临床提供理论依据.
-
银屑病与Treg细胞的相关研究
调节功能与效应功能的平衡对肌体维持有效免疫应答和避免自身免疫发生至关重要.银屑病是由致病性效应T细胞(Tresp细胞)持续活化引起.调节性T细胞(Treg细胞)功能障碍将导致其抑制功能降低,使银屑病Tresp细胞过度增殖,提示系统应用Treg细胞治疗银屑病的可行性.
-
双阴性调节性T细胞在免疫抑制中的作用及其机制
αβTCR+CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞(DN Treg细胞)被证实具有通过对效应性T细胞的直接杀伤作用从而抑制免疫应答的能力.DN Treg细胞与特异性抗原接触后增加其调节活性,该过程部分通过其对抗原呈递细胞表面MHC抗原肽复合物的识别作用介导.DN Treg细胞与靶细胞接触后可通过Fas和Fas配体之间的交互作用介导其杀伤效应.对DN Treg细胞功能特性、分子表达方式及其激活机制的深入研究将有助于探索临床新的治疗手段.
-
活动期强直性脊柱炎患者外周血效应性T细胞的比例增加且程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)水平降低
目的 分析强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+ CD25-效应性T细胞(Teff)和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)的比例以及两群细胞表面程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达情况.方法 流式细胞术检测49例AS患者和31例健康对照者外周血中Teff和Treg的比例以及PD-L1在这两种细胞表面的表达水平.结果 与健康对照组相比,活动期AS患者外周血中Teff的比例显著增加,Treg比例无明显变化;活动期AS患者外周血PD-L1+ Teff的比例显著降低,且低于稳定期AS患者;活动期AS患者外周血Teff膜表面PD-L1的相对表达量也显著低于稳定期AS患者和健康对照组;AS患者外周血PD-L1+Treg的比例和Treg膜表面PD-L1的相对水平均显著低于健康对照组.结论 活动期AS患者外周血中Teff比例增加,PD-L1水平降低.
