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microRNA-10a对脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg免疫功能的影响
目的 探讨脓毒症小鼠CD4+CD25+Treg(regulatory cell)细胞中microRNA-10a(miR-10a)表达规律及与细胞免疫功能的关系.方法 采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立稳定的小鼠盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)模型,分别于术后1、3、5、7d处死小鼠,无菌留取脾脏,免疫磁珠法分选CD4+T细胞与CD4+CD25+T细胞(CD4+CD25+Treg).流式细胞术检测CD4+CD25+Treg胞内叉头蛋白翼状螺旋转录因子P3(Forkhead/winged helix transcription factorp3,Foxp3),CCK-8法检测脾效应T淋巴细胞增殖,实时定量PCR(Real-time PCR)检测Treg中miR-10a的基因表达水平.小鼠尾静脉注射慢病毒下调miR-10a,观察小鼠免疫功能.数据采用SPSS 19.0统计软件进行数据处理,两组样本比较采用独立样本f检验,多组均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)和Dunnett-t检验.结果 正常组小鼠CD4+CD25+Treg细胞在CD4+T细胞中的比例为(7.34±1.2)％,造模后脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg比例1、3、5、7d明显升高(P＜0.05).与假手术组相比,脓毒症小鼠Foxp3的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)也明显高于假手术组(P＜0.05).Real-time PCR检测CD4+CD25+Treg中miR-10a的表达.结果发现假手术组小鼠与正常组小鼠相比差异无统计学意义(P＞0.05).脓毒症小鼠Treg中miR-10a表达较假手术组升高(P＜0.05).脓毒症鼠尾静脉注射携带miR-10a抑制序列的慢病毒后,CD4+CD25+Treg/CD4+T比例明显升高(P＜0.05),且Foxp3的平均荧光强度也明显增强(P＜0.05),CD4+T细胞的增殖能力相应减弱(P＜0.05).结论 在脓毒症致病过程Treg中miR-10a表达上调,抑制miR-10a水平能够显著提高Treg的比例和促进免疫抑制功能.鉴于CD4+CD25+Treg在脓毒症免疫功能紊乱中的重要作用,miR-10a可能是脓毒症免疫调理治疗的有效靶点.
