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p38信号通路对单侧输尿管结扎大鼠RANTES的影响
目的 探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织的表达及活化状态.方法 采用免疫组织化学法和Western印迹分析法检测UUO大鼠肾组织p38MAPK的磷酸化水平和RANTES蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RANTES mRNA的表达.结果 RANTES蛋白和RANTES mRNA随着梗阻时间的延长,表达明显上调,同时p38MAPK蛋白活性增高,两者呈显著正相关(P＜0.05).结论 UUO大鼠肾组织中p38MAPK的活化可上调RANTES的表达.
关键词： 肾间质 有丝分裂素激活蛋白激酶 RANTES -
p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对溃疡性结肠炎肠黏膜肿瘤坏死因子α表达的影响
目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的表达及p38 MAPK抑制剂SB203580对活动性UC患者肠黏膜组织TNFα表达的影响.方法 30例活动性UC患者被纳入本研究,以15例结肠癌患者的癌旁正常组织作为对照.免疫组化法检测UC患者肠黏膜活检组织中磷酸化p38 MAPK的表达.体外组织培养条件下观察SB203580对UC患者肠黏膜组织TNFα表达的影响,ELISA法检测培养上清液中TNFα含量.结果 (1)UC患者肠黏膜磷酸化p38 MAPK的表达明显高于正常肠黏膜,A值分别为549.22±32.54、143.52±11.89.阳染面积分别为[(1680.61±115.30)×10-5、(351.68±12.73)×10-5]μm2,P值均＜0.01.(2)与未用SB203580处理的UC组比较,处理后UC肠黏膜组织分泌TNFα的水平明显较低,分别为(549.96±107.63、72.07±20.30)ng/L(P＜0.01).(3)与未用SB203580处理的UC组比较,处理后UC肠黏膜组织p38 MAPK下游分子活化转录因子-2(ATF2)的活性表达明显减少,A值分别为688.32±47.37、265.82±40.25,阳染面积分别为[(2489.02±193.63)×10-5、(1213.76±204.77)×10-5]μm2,P值均＜0.01,但对磷酸化p38 MAPK的表达无影响,A值分别为480.34±38.87、465.64±38.69,阳染面积分别为[(1536.68±182.16)×10-5、(1486.26±165.49)×10-5]μm2,P值均＞0.05.结论 p38 MAPK信号传导通路在UC的发病中起着重要作用,阻断该通路可减少炎性细胞因子的释放.提示p38 MAPK信号传导通路可以为UC的治疗提供一个新的靶标,SB203580有可能成为UC治疗的新药物.
关键词： 结肠炎 溃疡性 有丝分裂素激活蛋白激酶 肿瘤坏死因子 -
心房颤动心房组织内细胞外信号调节激酶和血管紧张素转化酶表达的研究
目的探讨心房颤动(房颤)心房组织内细胞外信号调节激酶(ERK1、ERK2)和血管紧张素转换酶(ACE)表达的变化.方法 52例风湿性心脏病患者,在心脏外科手术时取右心耳组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定ERK的mRNA表达量,免疫印迹(Western blotting)测定磷酸化ERK1、ERK2,ERK激活激酶(MEK1、2)和ACE蛋白水平,免疫组织化学技术观察磷酸化ERK1、ERK2在心房组织中的分布. 结果持续性房颤组(19例)ERK2 mRNA表达量以及磷酸化ERK1、ERK2、ACE和MEK1、2量较窦性心律组(21例)均明显增加 [ERK2 mRNA:(76.1±19.7)U 与(30.9±24.0)U, P<0.05;ERK1:(248±54)% 与(100±21)%, P<0.01;ERK2:(302±49)% 与(100±22)%, P<0.01;ACE:(298±45)%与(100±24)%, P<0.01;MEK1、2:(169±21)%与(100±8)%, P<0.05] ;持续性房颤组和阵发性房颤组(12例)之间各指标均无明显差别;免疫组织化学显示增加的ERK1、ERK2均分布在心房间质细胞. 结论研究提示心房间质细胞内激活的磷酸化ERK1、ERK2表达的增加可能有赖于心房组织ACE表达的增加,这可能是房颤时心房纤维化的分子机制之一.
关键词： 心房颤动 肽基二肽酶A 有丝分裂素激活蛋白激酶 -
慢性坐骨神经损伤大鼠海马GFAP和pERK表达的变化
目的:探讨慢性坐骨神经挤压损伤(CCI)大鼠海马组织中胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和磷酸化有丝分裂素激活蛋白激酶(pERK)表达的改变.方法:按Bennett法制作CCI模型,采用免疫组化法测定CCI大鼠海马组织中GFAP和pERK的表达.结果:CCI大鼠双侧海马齿状回胶质细胞GFAP和pERK表达均有增加,以手术对侧增加更为显著,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01).结论:中枢神经系统胶质细胞ERK/MAP激酶通路激活,可能参与慢性神经痛的发病过程.
关键词： 坐骨神经 创伤和损伤 神经胶质原纤维酸性蛋白 有丝分裂素激活蛋白激酶 海马 免疫组织化学 -
阿托伐他汀抑制同型半胱氨酸诱导的内皮细胞凋亡涉及NADPH氧化酶及p38MAPK途径
目的 观察阿托伐他汀对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧的影响,并探讨其作用机制.方法 Hcy单独或联合阿托伐他汀、N-乙酰半胱氨酸(NAC)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶抑制剂(DPI)或p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂(SB203580)处理人脐静脉内皮细胞后,检测细胞凋亡率,活性氧水平,NADPH氧化酶活性,caspase-3 mRNA的表达和p-p38MAPK的表达.结果 阿托伐他汀明显抑制Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧的产生,并能拮抗Hcy诱导的NADPH氧化酶的激活,p38MAPK蛋白的磷酸化及caspase-3 mRNA表达的增加.NAC、DPI、SB203580可产生相同的作用.结论 阿托伐他汀可能通过抑制NADPH氧化酶的激活,p38MAPK磷酸化途径抑制Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞活性氧的产生和细胞凋亡.
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p38有丝分裂素激活蛋白激酶在白蛋白刺激肾小管上皮细胞表达调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子中的作用
目的 探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38MAPK)对白蛋白诱导的大鼠肾小管上皮细胞表达调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)及核因子-κB(NF-κB)活性的影响.方法 培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分别加入不同浓度白蛋白(5、15、30 g/L)或/和SB203580(p38MAPK抑制剂),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分别检测RANTES mRNA及蛋白表达水平;应用凝胶迁移率变动分析检测NF-κB的活性变化;p38MAPK的磷酸化水平分析采用Western印迹法.结果 白蛋白呈浓度和时间依赖性上调RANTES mRNA及蛋白表达水平,呈时间依赖性激活NF-κB活性,白蛋白明显刺激了p38MAPK磷酸化水平增高,SB203580可抑制白蛋白刺激的RANTES表达与NF-κB活性.结论 白蛋白通过p38MAPK信号通路刺激RANTES的表达和NF-κB的活性.
关键词： 白蛋白 有丝分裂素激活蛋白激酶 核因子-κB 肾小管 上皮细胞 -
牛磺酸对重症急性胰腺炎大鼠枯否细胞p38MAPK信号转导通路的影响
目的 探讨牛磺酸对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠枯否细胞(KCs)P38MAPK的影响以及对分泌促炎细胞因子TNF-α和IL-1β的作用.方法 48只SD大鼠采用完全随机法分为假手术对照(SO)组、SAP组、SAP+Taut(牛磺酸)组.SAP模型通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠诱导,造模前SAP+Taur组分别于24、12 h从尾静脉内注入牛磺酸(3 mmol/L,0.1 ml/100 g).假手术或造模后分别于12、24 h处死动物,检测其血清中AST、ALT、AMS含量;分离KCs,采用Western blot法检测P38MAPK活化情况,凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测KCs中NF-κB DNA的表达,并用ELISA法检测KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量.结果 SAP组大鼠血清中AST、ALT、AMS含量均较SO组明显升高(P<0.01);而SAP+Taur组血清中AST、ALT、AMS含量与SAP组比较,明显降低(P<0.05).SAP组各时间点大鼠KCs中p38MAPK活性显著高于SO组(P<0.01),而且NF-κB的表达也明显高于SO组(P<0.01),KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量明显高于SO组(P<0.01),但SAP+Taut组大鼠KCs上述指标均显著低于SAP组.结论 牛磺酸可以抑制急性胰腺炎时KCs中p38MAPK的活化,减少NF-κB的表达,从而对促炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌起抑制作用,可能具有临床应用前景.
关键词： 牛磺酸 胰腺炎 枯否细胞 有丝分裂素激活蛋白激酶 -
人视网膜色素上皮细胞增生中表皮生长因子-表皮生长因子受体-有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导途径的激活及其作用
目的观察人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生中表皮生长因子(EGF)-表皮生长因子受体(EGFR)-有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号传导途径的激活及其作用. 方法人RPE细胞分别在0.1%、10%小牛血清(FCS),EGF(0.1、1、10、50、100 ng/ml)及上述各浓度EGF与10%FCS联合作用下培养3 d.采用原位杂交及免疫细胞化学方法,检测RPE细胞EGFR mRNA及蛋白质表达.使用抗磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2抗体进行免疫细胞化学染色,以观察MAPK激活情况. 结果 EGF在10%FCS改良Eagle培养液(DMEM)中作用时,其佳刺激浓度为1 ng/ml,EGF在0.1%FCS DMEM中作用时佳作用浓度为10 ng/ml;EGF作用后,磷酸化ERK 1/2抗体由在细胞浆中表达转移至在细胞核中表达. 结论 EGF呈浓度依赖性地促进RPE细胞EGFR mRNA及蛋白质的表达,且对MAPK也具有浓度依赖性的核转位作用.推测 EGF-EGFR-MAPK信号传导途径可能在RPE细胞增生中起重要作用,血清在此过程中有明显的促进作用.
