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树突状细胞负载Tα146-162对实验性自身免疫性重症肌无力的治疗作用
目的研究不成熟髓源树突状细胞(iMDC)负载Tα146-162对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的治疗作用及其机制.方法Tα146-162负载于体外培养的iMDC,获得Tα146-162-iMDC.20只EAMG评分1～2分的C57BL/6小鼠随机分为治疗组和对照组.治疗组第0、7、14天皮下注射Tα146-162-iMDC,对照组则皮下注射1 ml PBS.对EAMG小鼠进行肌力评分,入组后第21天结束观察.3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、Ⅱ-6、TGF-β的含量.结果与对照组相比,治疗组平均临床评分和抗原特异性淋巴细胞增殖反应显著降低(P＜0.01),淋巴细胞抗原特异性IFN-γ、IL-6分泌显著减少(P＜0.01),TGF-β的分泌两组差异无统计学意义.结论Tα146-162-iMDC能改善EAMG发病小鼠的临床表现,其诱导免疫耐受可能与抗原特异性的抑制淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-6的分泌有关,TGF-β在耐受诱导中可能不发挥主要作用.
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补脾强力复方对自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺组织GR mRNA表达的影响
目的:观察补脾强力复方对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型大鼠胸腺组织中糖皮质激素受体(GR)mRNA表达的影响.方法:将Lewis大鼠按体重随机分为6组,即:正常组、模型组、强的松组(5.4 mg/kg)、补脾强力复方不同剂量组(剂量分别为4.75 g/kg,7.12 g/kg,9.49 g/kg),除正常组外,均采用鼠源性AchR-α亚基97-116肽段序列(R97-116)免疫接种复制EAMG模型.药物治疗后,ELISA法检测各组大鼠的AchR-Ab、皮质醇水平,RT-Q-PCR技术检测大鼠胸腺组织GR mRNA表达水平.结果:与正常组比较,模型组GR mRNA相对表达量降低(P＜0.01),与模型组比较,西药组、中药大、中、小剂量组大鼠AchR-Ab含量下降(P＜0.05),强的松组、中药大剂量组和中剂量组GR mRNA相对表达量增加(P＜0.05).结论:补脾强力复方可提高胸腺组织GR mRNA的表达,这可能是其治疗MG的作用机制之一.
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肌力康饮对EAMG大鼠血清AchR-Ab及TGF-β1水平的影响
目的:观察中药复方肌力康饮对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠血清AchR-Ab、TGF-β1水平的影响,以探讨其治疗重症肌无力的可能机制.方法:60只Lewis大鼠随机分为6组,每组10只:空白组,模型组,阳性药物组,肌力康饮高、中、低剂量组.采用AchR主动免疫的方法免疫除空白组外的各组大鼠,制备EAMG大鼠模型.确立模型成功,各组给药治疗4周后,采用ELISA法检测血清AchR-Ab、TGF-β1水平.结果:肌力康饮各组、阳性药物组能明显改善EAMG大鼠肌无力症状,临床症状评分显著降低、血清AchR-Ab水平明显下降、TGF-β1水平明显升高,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01);肌力康饮高剂量组与阳性药物组比较亦有明显差异(P<0.05);但肌力康饮各剂量组之间比较无显著性差异(P>0.05).结论:肌力康饮下调了EAMG大鼠过高的AchR-Ab水平,并使TGF-β1升高,从而改善了EAMG大鼠的临床症状.
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黄芪复方对EAMG大鼠血清IL-4、IFN-γ、TGF-β水平的影响研究
目的:观察黄芪复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清IL-4、IFN-γ、TGF-β水平的影响,以探讨其治疗重症肌无力的可能机制.方法:采用AChR加等量完全福氏佐剂,免疫Lewis大鼠,制备EAMG大鼠模型.40只Lewis大鼠随机分为4组,每组10只:福氏佐剂组、模型对照组、中药黄芪复方组和西药强的松组.各组给药治疗30天后,采用ELISA法分别测血清AChRab、IL-4、IFN-γ、TGF-β水平.结果:黄芪复方组、强的松组能明显改善EAMG大鼠肌无力症状,其血清AChRab、IFN-γ水平明显下降,TGF-β水平明显升高,与模型组相比,有显著性差异(P<0.05);但用药组间比较无显著性差异 (P>0.05).结论:中药黄芪复方可能是通过调控血清中IFN-γ、TGF-β水平,抑制AChRab的生成或增加其降解而达到治疗EAMG大鼠的作用.
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“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处乙酰胆碱受体表达的影响
目的：探讨“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠神经肌肉接头（NMJ）处乙酰胆碱受体（AchR）表达水平的影响机制。方法乙酰胆碱受体α1（AchRα1）129～145多肽片段与弗氏完全佐剂（CFA）混合免疫接种SPF三级Lewis雌性大鼠，建立 EAMG大鼠动物模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只，分成针灸治疗组10只、药物对照组10只、模型对照组10只，并将同期购进的未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以“温阳补气”针法治疗，30 min／次，1次／d，7 d为1个疗程，疗程间休息1 d，连续治疗2个疗程；药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗，18．5 mg? kg－1? d－1，连续治疗15 d；其余两组不予任何特殊处置，仅作对照观察。治疗结束后，采用 ELISA法测定大鼠NMJ处AchR的含量。结果经治疗后，针灸治疗组、药物对照组与模型对照组比较，两组EAMG大鼠NMJ处AchR的表达水平显著升高，与模型对照组相比均具有显著性差异（P＜0．01）；针灸治疗组与药物治疗组比较，两种疗法对 EAMG大鼠 NMJ处AchR表达水平的影响无显著性差异（P＞0．05）。结论“温阳补气”针法可以促进EAMG大鼠NMJ处AchR的表达，从而发挥其治疗MG的作用，其治疗效果与溴吡斯的明相近。
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重肌灵片对实验性重症肌无力的影响
用电鳐电器官提取的乙酰胆碱受体粗提物与完全福氏佐剂等量混合多点免疫Lewis大鼠制备EAMG大鼠模型,研究中药重肌灵片的作用,发现重肌灵片两个剂量组(6.56 g/kg和3.28 g/kg)均能显著改善EAMG大鼠临床症状,缓解连续低频电刺激所致大鼠后肢肌肉收缩幅度的衰减,降低血清中抗乙酰胆碱受体抗体的含量,抑制乙酰胆碱受体特异性的淋巴细胞增殖并能降低突触后膜上乙酰胆碱受体的减少.提示重肌灵能有效地改善EAMG大鼠临床症状及实验室指标.
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AchR或ConA诱导正常人淋巴细胞培养上清治疗EAMG的研究
观察乙酰胆碱受体(AchR)或刀豆蛋白(ConA)诱导的正常人淋巴细胞培养上清对小鼠实验性重症肌无力模型(EAMG)的疗效.分别用AchR或ConA诱导体外培养的正常人淋巴细胞,收集培养上清治疗EAMG小鼠.治疗前后用ELISA和微量细胞毒试验检测小鼠血中AchRAb的含量和T细胞亚群的变化,并检测小鼠的肌电图.结果显示,经两种培养上清治疗后,EAMG小鼠血中AchRAb水平明显下降,CD8+细胞数量显著增多,CD4+/CD8+比值明显降低,且小鼠肌电图也明显改善.本文提示AchR或ConA诱导的正常人淋巴细胞培养上清对EAMG小鼠有一定疗效,并探讨了其可能的作用机制和潜在的应用价值.
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中药复方重肌灵免疫调节作用及其机制的实验研究
目的:探讨中药复方重肌灵免疫调节作用及其机理.方法:建立Lewis大鼠EAMG模型.采用3H-TdR法检测重肌灵对ConA、脂多糖(LPS)诱导正常BALB/C小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响,及重肌灵对ConA、N2 AchR诱导EAMG大鼠淋巴结细胞增殖反应的影响.ELISA法测定重肌灵对EAMG大鼠血清中N2AchRab滴度及血清中IFN-γ水平的影响.结果: 重肌灵对ConA、LPS诱导正常ALB/C小鼠脾淋巴细胞增殖反应有明显的促进作用(P<0.05);对ConA诱导EAMG大鼠淋巴结细胞增殖反应有明显的促进作用(P＜0.01),而对N2AchR诱导EAMG大鼠淋巴结细胞增殖反应有明显抑制作用(P＜0.01).重肌灵对EAMG大鼠血清中N2AchRab滴度及血清IFN-γ水平有明显下调作用(P＜0.01).结论:重肌灵防治EAMG不是通过免疫抑制,而是利用它的免疫调节作用.机理可能是通过下调IFN-γ水平,而抑制N2AchR抗原诱导特异性免疫反应,而起到治疗作用.
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CD4+CD25+T细胞在实验性重症肌无力中的作用研究
目的:探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型小鼠外周免疫耐受机制异常在疾病发生、发展中的作用.方法:检测成模组小鼠CD4+脾细胞中CD4+CD25+T细胞(Treg)水平,脾细胞Foxp3 mRNA 的表达情况,并与未成模组、弗氏佐剂组及正常对照组进行比较.结果:与未成模组、弗氏佐剂组及正常对照组相比,成模组小鼠CD4+脾细胞内Treg的水平明显下降(P<0.01),脾细胞Foxp3 mRNA的表达降低(P<0.01).结论:EAMG模型小鼠存在外周免疫耐受缺陷,FoxP3基因可能通过影响Treg的数量和功能在EAMG的发病中起作用.
关键词： EAMG CD4+CD25+调节性T细胞 FOXP3 -
NK1.1+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力疾病发病中的免疫调节作用
目的:探讨NK1.1+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)疾病发病中的作用以及其调节机制.方法:腹腔注射抗小鼠NK1.1单克隆抗体(mAb)清除C57BL/6(B6)小鼠体内的NK1.1+细胞, 建立NK1.1+细胞缺陷小鼠模型;用AChR+CFA免疫小鼠诱发EAMG, 通过Lennon等的肌无力评分标准分析各组小鼠之间EAMG的发病情况和病情严重程度;应用ELISA法检测单核细胞(MNC)上清液中IFN-γ、 IL- 4的分泌和表达;应用放射免疫测定法检测血清中AChR IgG含量;用抗IFN-γ mAb中和小鼠体内IFN-γ, 观察发病情况及血清中AChR IgG的含量.结果:NK1.1+细胞缺陷的小鼠同正常免疫组小鼠相比, 发病率和病情严重程度均明显降低(发病率:36% vs 86%, P＜0.01);免疫后NK1.1+细胞缺陷组和正常免疫组小鼠相比, 发病率和病情严重程度无明显统计差异;NK1.1+细胞缺陷降低IFN-γ的表达, 但是IL- 4的分泌和表达无统计学意义;NK1.1+细胞缺失降低AChR特异性抗体的产生;中和体内IFN-γ后, EAMG的发病率和病情严重程度均减轻, 并且AChR特异性抗体减少.结论:NK1.1+细胞在EAMG发病初期发挥重要作用.在EAMG发病中, NK1.1+细胞可以使AChR特异性T细胞产生IFN-γ, 增加AChR特异性抗体产生, 从而加重EAMG的发病.
