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树突状细胞负载Tα146-162对实验性自身免疫性重症肌无力的治疗作用
目的研究不成熟髓源树突状细胞(iMDC)负载Tα146-162对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的治疗作用及其机制.方法Tα146-162负载于体外培养的iMDC,获得Tα146-162-iMDC.20只EAMG评分1～2分的C57BL/6小鼠随机分为治疗组和对照组.治疗组第0、7、14天皮下注射Tα146-162-iMDC,对照组则皮下注射1 ml PBS.对EAMG小鼠进行肌力评分,入组后第21天结束观察.3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、Ⅱ-6、TGF-β的含量.结果与对照组相比,治疗组平均临床评分和抗原特异性淋巴细胞增殖反应显著降低(P＜0.01),淋巴细胞抗原特异性IFN-γ、IL-6分泌显著减少(P＜0.01),TGF-β的分泌两组差异无统计学意义.结论Tα146-162-iMDC能改善EAMG发病小鼠的临床表现,其诱导免疫耐受可能与抗原特异性的抑制淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-6的分泌有关,TGF-β在耐受诱导中可能不发挥主要作用.
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树突状细胞负载Tα146-162对TAChR预致敏T细胞免疫反应的影响
目的探讨髓源不成熟的树突状细胞(iMDC)负载Tα146-162在TAChR预致敏小鼠中能否诱导免疫耐受.方法 Tα146-162负载于体外培养的iMDC,获得Tα146-162-iMDC.流式细胞术分析iMDC 上CD11c、MHC-Ⅱ、CD40和CD86的表达.24只小鼠随机分为A1、A2、K1、K2 4组.第0天,A1组、A2组用TAChR+CFA致敏,K1组、K2组用 KLH+CFA致敏.第7天,A2组、 K2组注射Tα146-162-iMDC,A1组、K1组则注射PBS.第14天,以3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应.结果培养6 d的iMDC中等程度表达CD11c[(63.94±5.11)%]、低表达MHC-Ⅱ[(39.26±5.81)%]、CD40 [(26.60±4.03) %]和CD86[(18.41±3.68) %].与A1组相比,A2组 TAChR刺激下淋巴细胞增殖反应显著降低(P<0.05),ConA和KLH刺激下淋巴细胞增殖反应差异无统计学意义 (P >0.05).K1组与K2组在KLH刺激下淋巴细胞增殖反应差异无统计学意义(P >0.05) .结论 Tα146-162-iMDC可在TAChR预致敏的C57BL/6小鼠中诱导免疫耐受.
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树突状细胞负载Tα146-162对EAMG中Crry、CD59a、CD59b mRNA表达的影响
目的观察实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠肌肉中Crry、CD59a、CD59b mRNA的表达和Tα146-162-iMDC诱导免疫耐受对三者的影响.方法用GM-CSF、IL-10诱导骨髓细胞分化、增殖为不成熟的髓源性树突状细胞(iMDC),之后将Tα146-162负载其上(Tα146-162-iMDC).健康雌性C57BL/6小鼠30只,随机分为模型组(A组,12只)、干预组(B组,12只)和正常对照组(C组,6只),A、B组小鼠用电鳗乙酰胆碱受体(T-AChR)免疫诱导EAMG,B组小鼠用Tα146-162-iMDC干预.按照Christadoss标准对小鼠进行EAMG评分,3H-TdR标记检测淋巴细胞增殖反应,RT-PCR方法检测Crry、CD59a、CD59b mRNA表达.结果A、B组小鼠平均临床评分分别是1.67±1.15 vs 0.33±0.65(P＜0.01),发病率分别是75%vs 25%(P＜0.05).B组较A组小鼠抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显降低(P＜0.01).A组较C组小鼠Crry mRNA、CD59a mRNA表达明显降低(P＜0.05);B组较A组Crry mRNA、CD59a mRNA表达明显升高(P＜0.05),B组CD59a mRNA与C组相比无显著性差异(P＞0.05).3组小鼠肌肉中均检测不到CD59b mRNA.结论Crry mRNA、CD59a mRNA表达减少可能参与EAMG发生,CD59b可能与EAMG发病无关;Tα146-162-iMDC上调小鼠肌肉中Crry、CD59a mRNA表达及抑制抗原特异性淋巴细胞增殖反应可能是其阻抑EAMG发生的机制之一.
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树突状细胞负载Tα146-162治疗实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的B细胞活化机制研究
(P<0.01),B组较A组升高(P<0.05),但仍低于C组(P<0.05). 结论 Tα146-162-iMDC干预,能显著降低EAMG的发病率,改善临床症状,其机制可能与Cbl负性调控B细胞活化有关.
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免疫干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的B细胞活化机制
目的:检测脾脏和淋巴结中B细胞活化相关蛋白表达及蛋白磷酸化表达水平的变化,从B细胞活化的角度探讨Tα146-162-iMDC干预实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG的作用机制.方法:采用树突状细胞(DC)负载Tα146-162干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠(EAMG)的发病,34只6-8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为模型组(A)、干预组(B)和对照组(C).体外培养DC,然后负载Tα146-162进行干预.从初次免疫起至第90天实验终止前,行EAMG严重性临床评估及发病率的计算.Western blot检测Syk、Lyn、Btk和PLC-γ2蛋白及蛋白磷酸化表达.结果:临床评估:A组发病率高于B组(75%vs 25%,P＜0.05).实验终止时2组临床评分分别为1.69±1.12vs0.35±0.67(P＜0.01).C组小鼠无发病.A组小鼠的脾脏和淋巴结Syk和PLC-啦蛋白表达和磷酸化水平较C组小鼠升高(P＜0.01),B组较A组下降(P＜0.05),但高于C组(P＜0.05);A组小鼠的脾脏和淋巴结Lyn蛋白表达和磷酸化水平较C组小鼠降低(P＜0.01),B组较A组升高(P＜0.05),但仍低于C组(P＜0.05);A组小鼠的脾脏和淋巴结Btk蛋白表达较C组小鼠升高(P＜0.01),B组较A组降低(P＜0.05),仍高于C组(P＜0.05),但磷酸化水平三组无统计学意义(P＞0.05).结论:Tα146-162-iMDC干预,能显著降低EAMG的发病率,改善临床症状,其机制可能与抑制B细胞活化有关.
