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单核细胞TLR7/8表达与HIV-1感染疾病进程关系的研究
目的 对HIV-1感染者单核细胞TLR7/8表达水平及与疾病进展的相关性进行研究,探讨单核细胞TLR7/8在HIV-1疾病进程中的作用.方法 选取63名HIV-1感染者及18名健康对照,应用MACS磁珠分选法纯化CD14+单核细胞,用2.5μg/ml R848刺激单核细胞TLR7/8,QIAGEN公司的RNA提取试剂盒提取单核细胞总RNA,实时定量RT-PCR测定TLR7/8的mRNA表达.结果 HIV-1感染者单核细胞TLR7和TLR8的表达水平与CIM+T细胞显著正相关(r=0.614,P＜0.01;r=0.419,P＜0.01).TLR7 mRNA表达:缓慢进展组明显高于HIV感染组、AIDS组和健康对照组(P＜0.05),HIV感染组明显高于AIDS组(P＜0.05);TLR8 mRNA表达:缓慢进展组明显高于AIDS组(P＜0.05).体外用R848刺激11LR7后表达显著下调,而TLR8的表达稳定.结论 AIDS疾病进程中HIV-1感染者单核细胞TLR7/8表达水平明显下降,TLR7的表达水平下降更显著.
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骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达
背景:间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚.目的:观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响.方法:DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型.实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞.结果与结论:与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P < 0.01或P < 0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P > 0.05).说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性.
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负载布鲁杆菌WboA-/-S2株对小鼠骨髓源性肥大细胞的活化作用研究
研究猪种布鲁杆菌WboA-/-S2株对骨髓源性肥大细胞(BMMC)的激活作用.用粗糙型布鲁杆菌WboA-/-S2株感染BMMC,并以光滑型S2株作为对照,采用RT-PCR法观察BMMC载菌后不同时间点TLR4和TLR8表达的变化;用ELISA法检测感染后BMMC上清中TNF-α、IL-6、IL-1和IL-12的含量.结果显示负载WboA-/-S2株和S2株12 h时BM-MC TLR4的表达量均明显高于正常对照组,其中负载WboA-/-S2株的BMMC TLR4表达又明显高于S2株负载组,24 h时二者表达均明显减弱;在负载12 h WboA-/-S2株组BMMC TLR8表达明显高于正常对照组,而S2株组的BMMC TLR8与正常对照组相比条带无明显变化,24 h时二者表达均减弱.负载WboA-/-S2株后3h、6h、12 h、24 h BMMC所分泌的TNF-α和IL-6都明显高于S2株负载组(P＜0.05),而在负载两菌的BMMC上清中均未检测到IL-1和IL-12.结果表明WboA-/-S2株较S2株更易被BMMC识别,激活BMMC的能力也明显强于S2株,并可快速诱导BMMC分泌大量细胞因子.
关键词： 肥大细胞 布鲁杆菌WboA-/-S2株 布鲁杆菌S2株 TLR4 TLR8 -
Toll样受体7、8、9在原发性舍格伦综合征中的表达
目的:检测原发性舍格伦综合征(primary Sjogren's syndrome,pSS)患者血细胞中Toll样受体(TLR)7、8、9的表达水平,并检测TLR7、9在pSS患者腮腺组织中的表达.方法:采用实时定量PCR,对37例pSS患者和24例对照组患者血细胞中TLR7、8、9的水平进行检测,分析2组之间的差异.应用免疫荧光法和免疫组化分别检测TLR7和TLR9在pSS患者腮腺组织中的表达.应用SAS6.12软件包,对数据进行t检验.结果:实时定量PCR显示,pSS组的TLR7、9的mRNA表达量显著高于对照组,2组之间有显著差异(P<0.05),pSS组的TLR7是对照组的2.17倍,pSS组的TLR9是对照组的2.33倍.而TLR8在2组之间无显著差异(p>0.05).免疫荧光和免疫组化发现,TLR7、9在pSS组患者腮腺组织中的导管上皮细胞、淋巴细胞和上皮岛均为阳性;而对照组腮腺组织中仅导管上皮细胞为阳性.结论:TLR7和TLR9在原发性舍格伦综合征患者中存在表达异常.
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TLR8受体的配体逆转NSCLC患者CD4+CD25+Treg 功能的机制研究
目的 初步探讨TLR8激动剂CpG-A对非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CD4+CD25+Treg功能的影响及Foxp3表达的调控.方法 ①MACS分离CD4+CD25+Treg及CD4+CD25-Teff并体外培养;流式细胞术检测CpG-A处理后CD4+CD25+Treg的功能变化.②RT-PCR检测CpG-A处理后CD4+CD25+Treg细胞的TLR8及Foxp3基因的转录和表达.③采用激光共聚焦技术检测CD4+CD25+Treg细胞Foxp3蛋白表达及定位变化.结果 ①CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-Teff共培养,加入CpG-A后CD4+CD25-Teff细胞增殖比率增高,平均荧光强度(MFI)明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).②CpG-A能够明显下调Foxp3 mRNA相对表达量.③CpG-A处理后CD4+CD25+Treg细胞Foxp3蛋白荧光强度较对照组明显减弱.结论 CpG-A激活TRL8信号可以逆转NSCLC患者体外培养的CD4+CD25+Treg对CD4+CD25-Teff的抑制能力,其机制可能与下调Foxp3的表达相关.
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TLR8在小鼠DC2.4细胞中的表达及其作用
目的 探讨应用CL075和Poly(dT)后,TLR8及其相关细胞因子IL-12,IL-10在小鼠DC2.4细胞中的表达情况.方法 常规培养DC2.4细胞,光学显微镜观察未刺激组、Poly(dT)刺激组、CL075和Poly(dT)共同刺激组细胞的形态变化;Real-timePCR测定TLR8、IL-12、IL-10的mRNA表达;ELISA测定IL-12、IL-10的蛋白表达;Westernblot测定TLR8的蛋白表达.结果 未刺激及Poly(dT)刺激组细胞较幼稚,树突较短且少.CL075和Poly(dT)刺激组细胞活化,树突增多且伸长;Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12、IL-10的mRNA及蛋白表达量与阴性对照组相比均无统计学意义.CL075和Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLRS、IL-12的mRNA及蛋白表达量较阴性对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),而IL-10的mRNA及蛋白表达量则明显低于阴性对照组(P<0.01或P<0.05).结论 应用CL075和Poly(dT)后,TLR8、IL-12在小鼠DC2.4细胞中的表达水平明显升高,而IL-10的表达水平则明显降低.
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胶原诱导的关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8的表达及其与相关细胞因子的关系
目的:观察Toll样受体8(TLR8)在鸡Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型小鼠脾脏单个核细胞中的表达及其与IL-10等细胞因子表达的关系.方法:12只DBA/1J小鼠随机分成造模组和阴性对照组.造模组小鼠采用鸡Ⅱ型胶原诱导,在诱导后的第27天出现关节红肿时处死所有小鼠.用ELISA测定小鼠外周血的TNF-α,HE染色观察小鼠关节的炎症变化,Real-time PCR检测脾脏单个核细胞表达IL-10、IL-17A、IL-1β及TLR8的水平.结果:HE染色结果显示,造模组小鼠关节部位与阴性对照组相比出现明显的炎症细胞浸润;造模组小鼠的外周血血清TNF-α水平较阴性对照组明显升高(P< 0.01);模型小鼠脾脏单个核细胞表达IL-10、IL-17A、TLR8和IL-1β的水平也明显高于阴性对照组(P<0.01或P<0.05).相关性分析表明,TLR8的表达与IL-10的表达呈负相关(r=0.945;P<0.01),而与IL-17A、IL-1β无明显相关性(P>0.05).结论:TLR8在鸡Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型小鼠脾脏单个核细胞中的表达水平明显升高.尽管IL-10的表达水平也高于对照组,但其与TLR8的表达呈现明显负相关.
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黄芩苷对胃癌SGC-7901细胞TLR8、HIF-1α、PDGFβ和pten表达的影响
目的:探讨不同浓度的黄芩苷对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及对pten和survivin基因的影响.方法:以不同浓度(1 0、20、40、80、160、320μmol/L)的黄芩苷处理胃癌SGC-7901细胞后,采用MTT法测定细胞活力;80、120、160 μmol/L的黄芩苷处理胃癌SGC-7901细胞后,采用RT-qPCR法检测Toll样受体8(TLR8)、低氧诱导因子(HIF-1α)、血小板衍生生长因子β(PDGF-β)和第10号染色体上磷酸酶和张力白同源缺失性基因(pten)的表达,Western-blot法分别检测胃癌细胞TLR8、HIF-1α、PDGF-β和pten蛋白的表达.结果:不同浓度的黄芩苷均能抑制细胞增殖,RT-qPCR法检测显示TLR8、HIF-1α、PDGF-β基因表达下调,pten基因表达上调.结论:不同浓度的黄芩苷可抑制胃癌细胞增殖,并能上调pten和下调TLR8、HIF-1α、PDGF-βmRNA及蛋白的表达.
关键词： 胃癌 黄芩苷 TLR8 HIF-1α 血小板衍生生长因子β
