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腺病毒载体介导的共刺激分子融合蛋白对实验性自身免疫性心肌炎的作用
目的探讨腺病毒载体介导的共刺激分子融合蛋白CTLA4Ig与ICOSIg联合治疗对实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的作用.方法猪心肌肌球蛋白免疫Lewis大鼠制成EAM模型.分别构建CTLA-4胞外域、ICOS胞外域与人IgG Fc段融合的腺病毒表达载体,常规方法生产表达上述融合蛋白的腺病毒用于治疗,免疫第14天注射后观察至第28天.第28天超声心动图检测心脏功能,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌炎症程度,Western blot检测心肌CTLA-4、ICOS、ICOSL及B7-1、B7-2蛋白表达水平,ELISA检测血浆IL-2、IL-4和IFN-γ水平.结果CTLA4Ig、ICOSIg单独或联合治疗均使大鼠心功能指标、心肌炎症程度明显改善.Western blot显示联合治疗组CTLA-4、ICOSL及ICOS、B7-1蛋白表达下调,而B7-2表达差异无统计学意义.细胞因子平衡向TH2方向偏离.结论CTLA4Ig及ICOSIg联合阻断共刺激分子通路减轻EAM自身免疫性心肌损伤,改善大鼠心脏功能.其机制可能通过下调心肌组织CTLA-4、ICOS、ICOSL及B7-1蛋白表达.
关键词： 实验性自身免疫性心肌炎 ICOS CTLA-4 基因治疗 融合蛋白 -
HVEM过表达树突状细胞对自身免疫性心肌炎的作用
目的 探讨单纯疱疹病毒进入介导子(herpes virus entry mediator,HVEM)基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC)能否防治肌凝蛋白诱导的小鼠心肌炎模型,并分析其机制.方法 以肌凝蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠制备实验性自身免疫性心肌炎(EAM)动物模型,通过小鼠尾静脉输注肌凝蛋白冲击的HVEM基因修饰的DC,观察其对心肌炎的免疫保护作用,并探讨其可能机制.结果 HVEM基因修饰的DC能够抑制自身免疫应答造成的小鼠心肌损伤,其机制主要是通过分泌IL-10,并诱导产IL-10调节性T细胞(Tr1)抑制自身反应性T细胞的活化.结论 HVEM基因修饰的DC能抑制EAM的发生,并且HVEM介导的信号网络可能在不同的细胞中产生不同的作用.
关键词： 实验性自身免疫性心肌炎 单纯疱疹病毒进入介导子 免疫调节 树突状细胞 -
腺病毒介导反义CⅡTA基因对实验性自身免疫性心肌炎的治疗
目的研究反义CⅡTA基因对心肌肌凝蛋白诱导的实验性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myocarditis,EAM)的治疗作用. 方法以携带反义CⅡTA基因的腺病毒载体对肌凝蛋白免疫后的小鼠进行静脉注射,同时设立空载病毒组与单纯免疫组作为对照,以多种手段观察反义CⅡTA基因对EAM的治疗效果. 结果治疗组与两对照组相比,心肌病理损伤程度减轻;血浆抗心肌肌凝蛋白抗体滴度及cTnⅠ浓度明显下降(P<0.05),流式细胞术检测外周血与脾脏T细胞I-Ad表达量明显下降(P<0.05). 结论反义C Ⅱ TA基因对心肌肌凝蛋白诱导的EAM具有较好的治疗作用.
关键词： CⅡTA 反义核酸 腺病毒 基因治疗 实验性自身免疫性心肌炎 -
阿托伐他汀对Lewis大鼠实验性自身免疫性心肌炎疗效的研究
目的:实验性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myocarditis,EAM)是一种T淋巴细胞介导性疾病.研究表明其主要发病机制是Th1/Th2细胞因子失衡.本研究旨在探讨3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂--阿托伐他汀对Lewis大鼠EAM模型中Th1/Th2偏离的影响及对EAM的治疗价值.方法:6～8周龄雄性Lewis大鼠23只,体重120～140 g.以纯化猪心肌肌球蛋白免疫制成EAM模型.开始免疫的同时(第0 d),大鼠随机均分为3组大剂量治疗组、小剂量治疗组和对照组.大剂量治疗组给予阿托伐他汀10mg·k-1g·d-1,小剂量治疗组给阿托伐他汀1mg·k-1g·d-1,对照组给予等体积饮用水,分别以灌胃器给药,连续用药21 d.第21天(炎症高峰期),行超声心动图检测后,取心肌组织,观察大体及镜下炎症程度.ELISA法检测血浆IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平,并以IFN-γ/IL-4比值作为Th1/Th2偏离方向的指标.常规酶法测定血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及HDL-C水平.结果:大剂量及小剂量阿托伐他汀治疗均使EAM大鼠心功能显著改善.两组心脏重量/体重比值及炎症程度分级均较对照组显著降低.阿托伐他汀治疗降低Th1型细胞因子(IFN-γ,IL-2)水平,而升高Th2型细胞因子水平(IL-4,IL-10).3组间TC、TG及HDL-C水平未见统计学差异.结论:阿托伐他汀抑制Th1型细胞因子分泌、促进Th2型细胞因子产生,从而使Th1/Th2平衡向Th1方向偏离,抑制T细胞炎症反应,改善EAM.该效应不依赖于阿托伐他汀的降脂作用,表明阿托伐他汀具有免疫调节效应,从而在自身免疫病治疗中具有应用前景.
关键词： 阿托伐他汀 辅助T细胞 实验性自身免疫性心肌炎 特发性扩张型心肌病 自身免疫 -
治疗自身免疫性心肌炎药物实验研究进展
自身免疫性心肌炎进展快,复发率高,可导致严重心律失常、心源性休克和充血性心力衰竭等.临床上还没有确切有效的药物,主要以对症处理为主.近年来国内外从不同的角度开展了大量关于治疗该病药物的实验研究,如抑制炎症因子或共刺激分子的基因靶向治疗、调节氧化还原反应药物、调节Thl/Th2炎症因子分泌药物、抑制心肌重构药物的探索与开发等.现就治疗该病药物实验研究进展予以综述,以指导药物临床试验与应用,并为未来该领域进一步研究提供参考.
关键词： 自身免疫 心肌炎 药物治疗 实验性自身免疫性心肌炎 -
B7-H4在实验性自身免疫性心肌炎小鼠中的表达
目的：研究新型共刺激分子B7-H4在实验性自身免疫性心肌炎小鼠发病中表达情况。方法：将BALB/c小鼠随机分为对照组与实验组。给实验组小鼠注射猪心肌肌凝蛋白建立实验性自身免疫性心肌炎模型，对照组给予同体积不含肌凝蛋白的完全弗氏佐剂及生理盐水。在实验的第14、21、30、45天分批处死小鼠，提取组织进行淋巴细胞增殖实验、苏木素-伊红（HE）染色、免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR（real-time PCR）。结果：心肌炎症改变在第21、30天时严重，之后逐渐降低；淋巴细胞增殖实验与real-time PCR的结果与心肌炎症情况类似，在实验期间随炎症情况变化，较正常均增高（ P＜0.05）；免疫组化结果显示B7-H4蛋白在心肌炎的心肌血管内皮恒定表达。结论：新型共刺激分子B7-H4参与心肌炎病程，可能为心肌炎的发病机制提供新的研究思路。
关键词： B7-H4 共刺激分子 实验性自身免疫性心肌炎 -
青藤碱衍生物4EDB的合成、鉴定以及对实验性自身免疫性心肌炎的治疗作用观察
目的·制备青藤碱衍生物4EDB,研究体内4EDB对实验性自身免疫性心肌炎(EAM)小鼠的治疗作用.方法·采用随机分组方法,将BALB/c小鼠分为空白对照组、EAM+4EDB组和EAM组,每组6只.免疫开始的第14日开始灌胃给药,5 mg/(kg·d).第21日处死小鼠,取出心脏做病理切片,并进行天狼星红染色和苏木精-伊红染色(H-E染色);real-time PCR检测心肌组织相关炎症因子白介素-1(IL-1)、IL-6、IL-17A、转化生长因子-β(TGF-β)的表达.结果·与EAM组相比,EAM+4EDB组心肌炎症病理评分降低(P=0.020),纤维化得到缓解,心肌组织炎症因子IL-1、IL-6、IL-17A、TGF-β 水平下降(P<0.05).结论·新合成的青藤碱衍生物4EDB对EAM模型小鼠的心肌炎症有缓解作用,其机制可能与其抑制炎症因子表达有关.
关键词： 青藤碱 4EDB 实验性自身免疫性心肌炎 炎症 -
CD40siRNA对实验性自身免疫性心肌炎大鼠Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17与白细胞介素-23的作用
目的 探讨CD40小分子干扰RNA(CD40siRNA)对实验性自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠的心肌病理改变、心肌组织中Th17细胞及外周血中IL-17、IL-23水平的影响.方法 选取40只健康雄性6～8周龄Lewis大鼠,体质量185 ～210 g,随机分为对照组、EAM组、CD40siRNA组及小分子干扰RNA (siRNA)组,每组10只.EAM组、CD40siRNA组及siRNA组以猪心肌球蛋白与完全弗氏佐剂的混合液0.2 mL大鼠足垫区皮下注射,对照组大鼠足垫区皮下注射PBS 0.2 mL.CD40siRNA组与siRNA组免疫后第8天分别尾静脉注射CD40siRNA表达载体、siRNA表达载体.免疫后21 d处死所有大鼠,光镜下观察心肌病理变化并计算心肌组织病理积分；实时荧光定量-PCR法检测心肌组织Th17细胞分化的特异性转录因子基因RORC mRNA表达水平,ELISA法检测外周血IL-17、IL-23水平.结果 1.CD40siRNA组心肌组织病理积分较EAM组明显下降(2.34±0.60比3.40 ±0.35,P＜0,05)；2.CD40siRNA组RORC mRNA较EAM组明显下降(2.13 ±0.28比2.93 ±0.36,P＜O,05);3.CD40siRNA组IL-17水平较EAM组明显下降(114.38 ±8.29比148.70±5.04,P＜0,05)；4.CD40siRNA组IL-23水平较EAM组明显下降(107.00±7.69比136.98 ±23.16,P＜0,05).结论 CD40siRNA可减轻EAM大鼠心肌炎症,其机制可能与抑制EAM大鼠Th17细胞分化特异性转录因子基因RORC mRNA的表达、减少IL-17及IL-23的分泌有关.
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IL-27对实验性自身免疫性心肌炎的干预作用研究
目的:探讨IL-27对实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的干预作用.方法:用心脏肌球蛋白(MyHC-α614-629)诱导小鼠模型并用IL-27进行干预,苏木素-伊红染色分析心肌损伤程度,ELISA法测定细胞因子的水平,流式和ELISA法体外分析IL-27对EAM源的脾脏CD4+T细胞的作用.结果:IL-27干预后心肌损伤程度减轻,细胞因子TNF-α、IL-6和IL-17分泌水平降低,体内外研究证实IL-10分泌水平增加.结论:IL-27能够有效缓解EAM.
关键词： 白细胞介素-27 实验性自身免疫性心肌炎 心肌损伤 -
IL-18、IL-12及相关因子在大鼠实验性自身免疫心肌炎心肌中的表达时程和特征
目的 探讨IL-18、IL-12及相关细胞因子在大鼠实验性自身免疫心肌炎(EAM)心肌中的表达时程和特征.方法 以猪心脏肌球蛋白加等体积弗氏完全佐剂,辅结核杆菌H37Ra株之乳液为抗原.于Lewis大鼠双后肢皮下注射造模(EAM);用胶原酶灌流和网筛过滤法分离纯化心肌细胞;经免疫组化技术评估心肌损伤程度;按实时荧光定量法测急性期和慢性期,IL-18、IL-12及相关因子(IL-18R,IL-18RAcPL,IL-18BP以及IL-12p40,IL-12p35,IL-12Rβ1,IL-12β2)mRNA表达情况.结果 IL-18、IL-12及相关因子表达主要在急性期,免疫后2周表达增多并达峰值(P<0.01,与正常对照组比较),4周后减少,并与EAM病程正相关;IL-18、IL-12及相关因子主要在巨噬细胞表达,其受体复合物在αβ T细胞表达;慢性期仅IL-18BP在心肌细胞有表达.结论 IL-18、IL-12及相关因子参与EAM病理过程,各因子主要集中于急性期巨噬细胞和αβ T细胞表达.
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实验性自身免疫性心肌炎小鼠体内一氧化氮的变化
目的:研究实验性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myoearditis,EAM)小鼠体内一氧化氮(nitric oxide,NO)含量的变化.方法:以20只小鼠建立EAM小鼠模型(EAM组),以同数量的小鼠作为对照组.于初次免疫后21 d,观察心脏大体和组织学变化,同时提取心肌蛋白进行western blot检测.分离小鼠脾脏细胞检测巨噬细胞含量变化及细胞内NO含量,并且利用化学试剂盒对小鼠血清和心肌组织中NO含量进行分析.结果:成功建立了EAM小鼠模型.流式细胞术分析显示,EAM组小鼠脾脏中CD11b+F4/80+巨噬细胞的比率显著升高(P＜0.05);但NO荧光探针检测显示,单个细胞内NO的含量明显减少(P＜0.05).与对照组相比,EAM组小鼠血清中NO的含量未见明显变化;但心脏中NO的含量显著升高(P＜0.05).Western blot的结果表明,EAM组小鼠心脏中内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS (iNOS)的含量均有所升高(P＜0.05).结论:NO可能是参与自身免疫性心肌炎疾病发生发展过程的一种调控物质.
关键词： 实验性自身免疫性心肌炎 一氧化氮 巨噬细胞 心脏 小鼠 -
巨噬细胞移动抑制因子在实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌中的表达及白藜芦醇的治疗作用
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(M IF)在实验性自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠心肌组织中的表达及白藜芦醇缓解EAM的可能机制.方法 采用猪心肌免疫球蛋白皮下注射法制作自身免疫性心肌炎模型,随机将24只6周龄雄性Lewis大鼠分为对照组(Con)、模型组(MC)和白藜芦醇干预组(MC+Res).采用超声心动图检测评价各组大鼠心脏结构及功能改变;随后采用Western blot检测心肌组织中MIF的表达,HE染色检测心肌组织病理损伤,免疫组化法检测心肌组织中的巨噬细胞浸润程度.结果 对照组无明显炎症细胞浸润,模型组心肌组织中有大量炎症细胞浸润,同时伴有明显心肌纤维断裂、溶解及大量巨噬细胞聚集,白藜芦醇干预可显著缓解心肌纤维溶解、断裂,减少巨噬细胞浸润(P＜0.05);与对照组相比较,模型组LVEDs显著增加(P＜0.01),LVEF、LVFS显著减少(P＜0.01);与模型组比较,白藜芦醇干预组中LVEDs明显减少(P＜0.05),LVEF、LVFS明显增加(P＜0.05);模型组中MIF蛋白表达水平较对照组明显升高(P＜0.01);与模型组相比较,白藜芦醇可明显降低M IF表达(P＜0.05).结论 心肌组织中MIF参与了EAM的发病,白藜芦醇对EAM的治疗作用可能与其降低MIF表达、减少巨噬细胞的浸润和聚集有关.
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 白藜芦醇 巨噬细胞 实验性自身免疫性心肌炎
