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转化生长因子-β1的Smad4非依赖性途径对胰腺癌细胞生长的影响
目的探讨转化生长因子(TGF)-β1过表达对Smad4纯合性缺失的胰腺癌细胞生长的影响.方法将含TGF-β1的真核表达载体转染到人胰腺癌细胞BxPC3中,通过流式细胞仪、生长曲线以及细胞迁移试验观察其对BxPC3生物学行为的影响.用Western印迹法检测TGF-β1对BxPC3细胞中p21WAF/CLIP1表达的影响.结果转染TGF-β1基因的BxPC3细胞的形态发生明显改变,其生长速度自第4天开始较转染空载体pcDNA3的阴性对照组减慢.发现BxPC3细胞组S期细胞(27.53±0.02)%与pcDNA3组(26.32±0.01)%的比例均高于TGF-β1组(17.01±0.03)%,P<0.01,表明TGF-β1阻止细胞进入S期.细胞迁移试验表明转染的细胞运动能力明显增加.Western印迹法检测表明p21WAF/CLIP1的表达也相应增高.结论 TGF-β1的Smad4非依赖性途径通过增强p21WAF/CLIP1的表达使细胞阻滞于G0-G1期,从而抑制细胞生长,并且该通路能诱导上皮细胞向间叶细胞转变.
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顺铂诱导宫颈癌SiHa细胞周期阻滞及凋亡的研究
目的:探讨顺铂在体外对宫颈癌SiHa细胞周期和凋亡的影响及其作用机制.方法:采用MTT法测定顺铂对SiHa细胞增殖的影响;DNAladder和Hoechst33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用前后的周期阻滞和凋亡;Westem blot检测E6、p53和p21的表达.结果:顺铂抑制SiHa细胞生长呈时效和量效关系,10 mol/L顺铂作用SiHa细胞12、24、36和48 h,亚G1峰分别为(3.07士0.15)%、(5.18±0.28)%、(17.73±1.20)%和(32.55±2.74)%,与对照组比较差异均有统计学意义,t值分别为32.80、31.46、29.73和25.99,P值均为0.000;顺铂能使SiHa细胞发生G2～M期阻滞,24 h达到高(66.43±4.62)%,凋亡开始;Hoechst33258实验组可见凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;Westernblot提示,顺铂作用SiHa细胞后HPV E6的蛋白水平表达逐渐降低,p53和p21蛋白水平表达逐步升高.结论:顺铂随着药物浓度和作用时间的增加对SiHa细胞的体外抑制效应增加,顺铂通过引起SiHa细胞G2～M周期阻滞及抑制HPV E6蛋白的表达,恢复p53功能,启动凋亡,起到杀伤肿瘤作用.
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P21、P53蛋白及热应激蛋白70水平检测对多环芳烃相关肺癌的诊断价值
目的探讨多环芳烃(PAHs)相关肺癌的早期诊断指标,以期用于职业性肺癌及职业相关肺癌的筛检.方法采用Western斑点印迹法,对确诊的PAHs相关肺癌组(简称肺癌组)29例、非肿瘤性肺病组28例和健康对照组30例人群的血清中P21、P53及热应激蛋白(HSP)70蛋白水平进行检测.结果肺癌组患者血清中P21、P53及HSP70蛋白阳性检出率(P21 58.62%、P53 34.48%、HSP7041.38%)高于非肿瘤性肺病组(P21 14.29%、P53 7.14%、HSP70 10.71%),差异有显著性(P＜0.01);血清标本P21蛋白敏感性为58.62%,阴性预测值(NPV)为68.42%;P53蛋白的敏感性为34.48%,NPV为78.05%;HSP70蛋白的敏感性为41.38%,NPV为63.04%.3种蛋白联合检测的敏感性可提高到82.76%,与任何单一指标相比,差异均有显著性(P＜0.05);NPV为78.26%.18例细胞学阴性肺癌患者P21、P53或HSP70阳性13例(72.22%).结论P21、P53及HSP70蛋白联合检测对PAHs相关肺癌诊断提供了一套筛选指标,同时可补充细胞学的诊断价值.
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P53蛋白及P21蛋白在视网膜母细胞瘤表达的研究
目的:探讨P53和P21在视网膜母细胞瘤发生中的作用,及其与预后的关系.方法:应用抗人P53、P21抗体,采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化霉(SP)免疫组化方法,对30例RB常规石蜡标本进行P53和P21蛋白的测定.结果:P53和P21在RB中的阳性表达率分别为60%和80%.P53的表达与临床分期有关(P＜0.05).P53和P21的表达均与生存时间有关,P53阳性组生存时间低于P53阴性组(P＜0.05),P21阳性组生存时间高于P21阴性组(P＜0.01); P53阳性组的2年生存率低于P53阴性组,而P21阳性组的2年生存率高于P21的阴性组.结论:在RB的发生中P53和P21起着重要的作用.P53和P21的表达可以作为临床预后的一个参考指标.
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组蛋白去乙酰化酶3及P21蛋白在结肠直肠癌组织中的表达及其临床意义
目的:观察组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)及P21蛋白在结肠直肠癌组织中的表达及其临床意义;探讨二者间的关系,以及HDAC3与结肠直肠癌临床分期间的关系.方法:以Western印迹法检测30例结肠直肠癌组织及正常黏膜中HDAC3及P21蛋白的表达差异,并分析其与病人临床病理特征间的关系.结果:30例结肠直肠癌组织中HDAC3及P21蛋白的表达与正常黏膜比较有统计学差异(P<0.001);HDAC3及P21的表达与结肠直肠癌的病理分期无天系.结论:HDAC3在结肠直肠癌组织中的表达显著升高,而P21蛋白则明显降低.HDAC3可能通过抑制P21蛋白的表达而引起结肠直肠黏膜的异常增生:二者在结肠直肠癌的发生过程中起较重要的作用.
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宫颈鳞状细胞癌HPV16/18、p53、p21表达及意义
目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型、18型及p53、p21基因蛋白的表达情况以及与宫颈癌的关系.方法应用免疫组化二步法检测50例宫颈鳞癌、40例正常宫颈黏膜中HPV16、HPV18、p53、p21的表达.肿瘤组分＜60岁和≥60岁2个年龄组,观察HPV感染情况.结果宫颈鳞癌中HPV16、HPV18、p53、p21表达分别为48%、20%、54%和50%,而正常宫颈黏膜中的表达分别为10%、0、0、10%,两者经统计学比较差异有显著性(P＜0.01);＜60岁组和≥60岁组HPV16阳性率分别为84.2%和25.8%,年青组明显高于年老组,经统计学比较差异有显著性(P＜0.01).结论(1)宫颈鳞癌的发生与HPV16、HPV18感染有密切关系,提示检测宫颈HPV16、HPV18感染情况对于宫颈鳞癌的随访和早期诊断有着重要的参考价值.(2)提示宫颈黏膜在HPV感染后,可能在p53、p21多种癌基因的共同作用导致宫颈鳞癌的发生发展.
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膀胱癌P21、P53、nm23蛋白表达的临床意义
目的:探讨癌基因与抑癌基因表达与膀胱癌生物学行为的关系.方法:应用免疫组化方法对48例膀胱移行细胞癌中P21、P53、nm23蛋白进行检测.结果:P21、P53、nm23蛋白表达的阳性率分别是58.3%、47.9%、41.7%.P21、P53蛋白表达阳性率与肿瘤分级、分期及复发呈正相关.nm23蛋白表达阳性率与分级呈正相关,与分期及复发呈负相关.77.1%膀胱癌有上述蛋白异常表达,其中47.9%膀胱癌同时有两个或两个以上蛋白表达.结论:癌基因及抑癌基因的异常表达及协同作用,在膀胱癌发生、发展中起重要作用.
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P21和P27蛋白在卵巢癌组织中的表达及其意义
目的 探讨P21和P27蛋白在卵巢癌组织中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学方法检测10份正常卵巢组织、10份良性卵巢肿瘤以及30份恶性卵巢肿瘤组织中P21和P27蛋白的表达.结果 正常卵巢组织、良性肿瘤组织P21、P27蛋白阳性表达率与卵巢癌组织比较,差异有显著性(P=0.014、0.004).P21和P27蛋白在恶性卵巢肿瘤中的表达与临床分期有关(P=0.024、0.008),而与组织学类型、组织分化程度、有无腹水、淋巴结有无转移无关(P=0.067～0.562).3种组织中P21和P27蛋白的表达呈正相关(P＝0.039).结论 P21和P27蛋白表达异常可直接影响细胞周期转化,促进卵巢癌的发生.联合检测P21和P27蛋白对卵巢癌的预后评估和指导治疗有积极的意义.
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P21蛋白在食管鳞癌中表达的临床意义
目的:探讨P21蛋白在食管癌和远癌组织中的表达及其与食管癌发生、发展及生物学行为的关系.方法:应用免疫组化技术检测48例食管癌和远癌组织中P21蛋白的表达.结果:P21蛋白在食管鳞癌、远癌组织中表达的阳性率分别为31.25%、93.75%,食管癌组织P21蛋白阳性表达率明显低于远癌组织,差异有统计学意义(X2=40.0,P＜0.001,r=0.65),P21蛋白阳性表达与食管癌组织学类型、淋巴结转移、TNM分期呈负相关,与外膜浸润无关.结论:P21蛋白的异常表达与食管鳞癌的发生,发展及组织学类型、淋巴结转移TNM分期密切相关.
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体外转染SV40 T抗原对鼠内皮细胞周期素D1、P53和P21表达的影响
目的:探讨SV40 T抗原促进鼠内皮细胞增殖动力改变的机制,为基因治疗转化细胞提供理论依据. 方法:用含有SV40 T抗原的表达质粒(pRNS-1)转染大鼠主动脉内皮细胞,经G418加压筛选,获得阳性克隆后扩增培养.在光镜下观察转染前后细胞的形态和生长特性;流式细胞仪检测细胞增殖周期; PCR检测外源基因的整合;免疫组化蛋白水平检测SV40 T抗原的表达;Western blot检测周期素(Cyclin)D1、P53和P21的表达.结果: 转染后的鼠内皮细胞体外生存期延长,大量细胞由G1期进入S期,对血清和生长因子的依赖性降低.与转染前的细胞相比,转染后的鼠内皮细胞表达更多的P53和Cyclin D1, P21表达量降低.结论:SV40 T抗原可能通过调节Cyclin D1、P53和P21的表达来影响鼠内皮细胞的增殖.
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子宫内膜癌抑癌基因P53的功能、表达及其临床意义
[目的]探索抑癌基因P53的功能及表达在子宫内膜癌发生发展及不同分期、分级和病理类型间的意义.[方法]设置对照,分别应用Western Blot法和LSAB法测定32例子宫内膜癌P53的功能及表达.[结果]子宫内膜癌组P53功能异常和过度表达分别为28.1%、15.6%,显著高于对照组8.8%、0%(P＜0.05);在腺癌组中,100%低分化、13.3%中分化和0%高分化者P53功能异常,3者间有极显著性差异(P＜0.01);在早期组中,100%浆液性癌的P53过度表达显著高于腺癌4.3%(P＜0.05).[结论]抑癌基因P53异常在子宫内膜癌发生发展中起着一定的作用,在乳头状浆液性癌恶变过程中可能发生早且起着一个中心作用,在腺癌中与肿瘤的恶性程度相关.
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宫颈鳞癌中P21ras蛋白表达及临床意义
目的研究P21ras蛋白表达与宫颈鳞癌发生发展的关系.方法应用SP(Streptavidin--Peroxidase)免疫组化染色方法对10例正常宫颈组织、47例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和56例宫颈鳞癌组织的P21ras蛋白进行检测.结果正常宫颈组织无P21ras蛋白表达,CIN及宫颈鳞癌阳性表达率分别为36.17%、73.21%,三者间差异极为显著(P<0.01).CINI、CINⅡ、CINⅢ表达率分别为16.67%、33.33%和55.56%,三者问差异显著(P<0.05),P21ras蛋白表达与宫颈鳞癌临床分期、组织学分级及淋巴结转移无关.结论P21ras蛋白表达与宫颈鳞痛发生发展密切相关,并发生于癌变的早期阶段.
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胃癌组织中P53及P21蛋白的表达
①目的探讨P53和P21蛋白异常表达在胃癌发生发展中的作用.②方法应用免疫组化技术检测58例胃癌及相应癌旁组织中P53和P21蛋白的表达.③结果胃癌组织P53蛋白阳性表达率为86.21%(50/58),癌旁组织P53蛋白均为阴性表达,胃癌组织P53蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织,差异具有极显著性(P=0.000).胃癌组织P21蛋白阳性表达率为62.07%(36/58),癌旁组织P21蛋白阳性表达率为89.66%(52/58),胃癌组织P21蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,差异有极显著性(χ2=12.5,P<0.01).胃癌组织中P21与P53蛋白共同阳性表达率为56.9%,但两者无相关性(χ2=1.323,r=0.203,P>0.05).④结论 P53和P21蛋白表达异常与胃癌发生有关.
