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非小细胞肺癌分子标志物EML4-ALK的研究进展
近几年来,中国肺癌的发病率和病死率均呈显著升高趋势.据世界卫生组织(WHO)统计,2008年,我国肺癌总病死率是28.7/10万,约45万余人,占全部癌症死亡人数的23.1％.西方国家,肺癌也是癌症死亡的主要原因;其中,非小细胞肺癌(NSCLC)约占75％～ 80％,5年总生存率约为10％～15％[1].目前已经发现一些分子靶向药物能明显改善治疗效果.表皮生长因子受体( EGFR)基因突变是原发性肺腺癌的发生原因之一,靶向针对EGFR的酪氨酸激酶抑制剂能在某种程度上有效控制肺腺癌疾病的发展[2].分子靶向治疗发展中关键的步骤就是要明确肺癌的关键致癌基因.Soda等[3]发现另外一种有增殖活性的酪氨酸激酶融合基因棘皮动物微管相关蛋白类似因子4( EML4)-间变性淋巴瘤激酶(ALK)与NSCLC有关.EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC患者通常没有EGFR突变及K-ras突变,多发生于不吸烟或轻度吸烟的年轻肺腺癌患者,预后较好,特别是用ALK抑制剂治疗可获约80％以上的疗效[4],对培美曲塞加顺铂化疗亦有明显效果[5].这些均提示EML4-ALK融合蛋白是肺腺癌特异性较高的分子标志物.
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白藜芦醇联合经猪副半奇静脉逆行灌注低温保护液对脊髓缺血再灌注的保护作用
目的 观察白藜芦醇联合经猪副半奇静脉逆行灌注低温保护液对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及对脊髓组织中微管相关蛋白-2表达的影响.方法 将18只西藏小型猪随机分为3组:手术对照组(I/R组,n=6),冷液逆灌组(CL组,n=6),白藜芦醇联合冷液逆灌组(CL+ Res组,n=6).L/R组:常温阻断降主动脉60 min;CL组:阻断前游离出副半奇静脉,阻断降主动脉60 min,同时经副半奇静脉逆行灌注低温(4 ℃C)生理盐水,灌注流速为16.65 ml/min;CL+ Res组:手术过程同CL组,术后立即管饲白藜芦醇10 mg/kg.各组术中监测动脉压、血气分析、椎管温及鼻咽温的变化.于术后6h、1、2d、1、2、4周进行神经功能评分,术后4周取L2～L4段脊髓,采用Western blot法检测脊髓组织中微管相关蛋白-2的表达变化.多组均数比较采用单因素方差分析,两两组间比较用LSD法检验.结果 18只西藏小型猪全部存活.I/R组行为学评分显著降低,6h、1、2dCL组和CL+ Res组评分均高于I/R组(F=8.612、17.276和11.985,P=0.035,0.011和0.023),术后6h、2dCL组和CL+ Res组评分差异无统计学意义(P=0.526和0.114),术后1 dCL组和CL+Res组评分差异有统计学意义(P =0.021),随着再灌注时间的延长行为学评分逐渐增加.降主动脉阻断后各组实验动物的鼻咽温及椎管温均有下降,I/R组和两实验处理组分别在阻断60 min和再灌注20 min时,鼻咽温及椎管温降至低,明显低于阻断前(F=23.187～ 55.029,P＜0.01);再灌注后,I/R组动物的鼻咽温及椎管温均逐渐回升,至再灌注60 min时,鼻咽温及椎管温与阻断前相近(P=0.115和0.302);而CL+ Res组与CL组鼻咽温及椎管温回升不明显,在再灌注60min时,鼻咽温及椎管温明显低于阻断前(CL组:P=0.005和0.001;CL+ Res组:P=0.002和0.001).Western blot检测微管相关蛋白-2的表达分别为I/R组0.37±0.18,CL组0.54±0.26,CL+ Res组0.66±0.31,在CL+ Res组表达水平高于CL组(P =0.021),且CL+ Res组与CL组均高于I/R组(F=9.381,P=0.037).结论 白藜芦醇联合经猪副半奇静脉逆行灌注低温保护液对猪脊髓缺血再灌注损伤有保护作用,并且白藜芦醇可能加强了逆行灌注低温保护液的保护效果.
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自噬及自噬相关蛋白在帕金森病模型大鼠黑质纹状体中的表达及意义
目的：观察自噬及自噬相关蛋白 Beclin1及微管相关蛋白1轻链3（microtubule‐associated protein 1 light chain 3，MAPlLC3，简称 LC3）在帕金森病（Parkinson disease ，PD）模型大鼠黑质纹状体中的表达及变化，探讨自噬在 PD 发病中的作用。方法将90只 SD 大鼠随机分为正常组、假手术组、PD 模型组（模型组），每组又分为模型制备后4 d 、8 d 两个亚组，每个亚组各15只。采用颈背部皮下注射鱼藤酮制作 PD 模型，透射电镜观察自噬体的形成，免疫组化法和 Western blotting 法检测黑质纹状体自噬相关蛋白 Beclin1和 LC3的表达水平。结果（1）电子显微镜下 PD 模型组黑质纹状体中出现自噬体，呈圆形，大多位于细胞核旁，溶酶体数量增多。8 d 时，自噬体、溶酶体数量显著增多。（2）与正常组比较，假手术组黑质纹状体中 Beclin1和 LC3表达略增多，但差异无统计学意义（均 P＞0.05）；与假手术组比较，模型组黑质纹状体 Beclin1和 LC3的表达明显增多（均 P＜0.01），8 d 高于4 d ，差异有统计学意义（均 P＜0.05）。结论 PD 模型大鼠黑质纹状体中自噬活性被激活，自噬可能参与了 PD 的发病过程。
关键词： 帕金森病 自噬 Beclin 1 微管相关蛋白类 微管相关蛋白 1 轻链 3 -
黄芩素甙对脑缺血沙土鼠海马CA1区微管运动蛋白Kinesin活性的影响
背景:脑缺血-再灌注损伤与Kinesin活性密切相关,研究认为微管运动蛋白Kinesin活性下降是脑缺血后神经细胞死亡的早期标志.黄芩素甙可以防止脑缺血-再灌注诱发的蛋白激酶C的激活、减轻钙超载,且可减小缺血梗死灶的体积,从而减轻脑缺血-再灌注损伤.但是黄芩素甙脑保护作用是否与Kinesin活性有关,目前很少报道.目的:观察黄芩素甙对脑缺血-再灌注期间海马锥体细胞微管运动蛋白Kinesin活性的变化.设计:随机对照实验.单位:济宁医学院附属医院麻醉科及徐州医学院附属医院江苏省麻醉学重点实验室.材料:实验于1999-02/08在江苏省麻醉学重点实验室完成.选用雄性沙土鼠35只.方法:将沙土鼠随机分成假手术组(5只)、缺血再灌注对照组(15只)和黄芩素甙组(15只)3组,根据再灌注时间将缺血再灌注对照组和黄芩素甙组分为3个亚组,即再灌注I组(再灌注6 h)、再灌注Ⅱ组(再灌注48 h)和再灌注Ⅲ组(再灌注96 h).每亚组5只动物.缺血再灌注对照组和黄芩素甙组制备沙土鼠前脑缺血-再灌注损伤模型,脑缺血时间为10 min.假手术组仅游离双侧颈总动脉但不予阻断.黄芩素甙组于缺血前15 min给予灯盏花素(其有效成分为黄芩素甙)45 mg/kg腹腔注射,假手术组和缺血再灌注对照组则给予等量的生理盐水灌胃.应用免疫组织化学染色方法结合计算机图象分析技术测定海马微管运动蛋白Kinesin的活性.主要观察指标:各组动物Kinesin的活性及其变化.结果:纳入实验的动物为35只,均进入结果分析,无实验动物脱失.在海马CA1区,缺血再灌注对照组缺血-再灌注6,48和96 h时微管运动蛋白Kinesin活性分别降至假手术组的58%,38%和12%(P均<0.01),而黄芩素甙组在再灌注6,48和96 h后,微管运动蛋白Kinesin活性分别为假手术组的81%,61%和21%,均明显高于缺血再灌注对照组(P均<0.05).在海马CA2,CA3和CA4区,微管运动蛋白Kinesin的活性无明显变化.结论:黄芩素甙可通过抑制脑缺血-再灌注期间海马CA1区微管运动蛋白Kinesin活性的下降达到脑保护作用.
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噻萘普汀对慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞MAP2表达的效应
目的 探讨慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞内微管相关蛋白2(MAP2)表达变化及噻萘普汀的效应.方法 采用强迫游泳作为应激模型,25只大鼠随机分为对照组、应激组及应激给药组.利用免疫组织化学方法及计算机图像分析技术,定量测定各组大鼠海马CA3区锥体细胞磷酸化MAP2表达水平及阳性细胞数.结果 与对照组(149.34±1.81)比较,应激组大鼠海马CA3区锥体细胞磷酸化MAP2表达的平均灰度值(144.99±4.40)明显下降,给药组(148.84±2.73)则明显高于应激组;应激组阳性表达的细胞数(40.36±1.35)明显少于对照组(42.73±1.56),给药组(42.14±1.62)则明显多于应激组.结论 噻萘普汀可抑制慢性应激所致的大鼠海马CA3区锥体细胞内磷酸化MAP2表达上调.
