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体外扩增CD4+CD25+Treg细胞的效果比较及体外免疫抑制功能鉴定
本研究比较3种不同细胞组分扩增CD4+ CD25+ Treg的效果并鉴定其免疫抑制功能.用免疫磁珠分选法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载CD3/CD28克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激,分别对CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞进行体外扩增培养,流式细胞术检测扩增后CD4+ CD25+ Treg细胞的比例及Foxp3基因的表达,用混合淋巴细胞反应(MLR)检测CD4+ CD25+ Treg对CD4+ CD25-T细胞增殖的抑制作用,CCK-8方法检测细胞抑制率.结果表明:经过2周培养,3组细胞均有明显的扩增.CD4+T细胞组扩增倍数为(77.8±5.32)倍,CD4+ CD25+ Treg细胞的比例由(6.61±1.00)％增加到(15.33±1.31)％.CD4+ CD25-T细胞组扩增迅速,倍数为(95.20 ±7.67)倍,CD4+ CD25+ Treg细胞的比例由培养前(0.37±0.13)％增加到(9.84±0.98)％.磁珠分选后的CD4+ CD25+ Treg细胞的扩增倍数为(41.20±6.92)倍,细胞纯度由(86.75±1.25)％下降到(85.32±1.62)％,Foxp3表达由(76.92±1.13)％下降到(75.33±2.11)％,扩增前后的细胞纯度和Foxp3表达,差异无统计学意义(P＞0.05).体外抑制实验显示体外扩增的CD4+ CD25+ Treg细胞对CD4+ CD25-T细胞增殖有明显的抑制作用,对效应性T细胞增殖的抑制效能与其细胞数呈正相关.结论:本研究在体外成功扩增了小鼠CD4+ CD25+ Treg细胞,并且具有免疫抑制功能,其中CD4+ CD25+ Treg细胞组扩增的CD4+ CD25+ Treg细胞数量多,细胞纯度高.
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晚期非小细胞肺癌患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞的表达及临床意义
目的 探讨晚期非小细胞肺癌患者外周血CD4+ CD25+ FOXP3+调节性T(Treg)细胞的表达及其临床意义.方法 采用免疫荧光术及流式细胞仪检测50例晚期非小细胞肺癌患者及50例健康对照组外周血中CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞、CD4+T细胞和CD4+CTLA-4+T细胞的表达.结果 晚期非小细胞肺癌患者外周血中CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CTLA-4+T细胞的比例均高于健康对照组(均P＜0.05),CD4+T细胞的比例均低于健康对照组(均P ＜0.05).结论 晚期非小细胞肺癌患者外周血CD4+ CD25+FOXP3+ Treg细胞比例高于健康对照者,可能与肺癌患者的免疫抑制和肿瘤进展相关.
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益气养阴方影响Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的实验研究
目的 通过对Lewis肺癌移植鼠肿瘤生长及肿瘤组织中Notch信号表达、CD4+ CD25+ Treg细胞变化的观察,探讨益气养阴方干预肺癌的量效关系及机制.方法 将肺癌移植小鼠随机分为4组,模型组只行造模;中药组按小鼠体重按不同剂量灌胃给药分为等效剂量组、大剂量组;化疗组以CTX腹腔注射化疗.记录各组小鼠瘤体大小,观察期满后留取标本行Notch信号表达检测.结果 ①肿瘤相对体积(RTV)及肿瘤相对抑制率:大剂量组RTV低于其他3组(P＜0.01),化疗组RTV低于等效剂量组(P＜0.05);大剂量组肿瘤抑制率较其他3组高(P＜0.05).②肿瘤组织中Notch信号通路表达及CD4+ CD25+ Treg细胞:等效剂量组Notch1 mRNA表达及CD4+CD25+ Treg细胞高于化疗组(P＜0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组低(P＜0.05);等效剂量组Notch3 mRNA表达与化疗组比较差异无统计学意义(P＞0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Notch3 mRNA表达量降低(P＜0.05);等效剂量组、高剂量组、化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达均较模型组降低(P＜0.05),等效剂量组与化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达量降低(P＞0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达量降低(P＜0.05).结论 益气养阴方剂有抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,此种作用与益气养阴方剂的药物用量之间存在量效关系,且此种关系提示较大剂量的益气养阴方用量可能更有利于抑制Lewis肺癌细胞生长,而这种抑制作用与益气养阴方剂调控肿瘤组织中Notch1信号通路及CD4+ CD25+ Treg细胞有关.
关键词： 益气养阴方 Notch信号 肺肿瘤 CD4+ CD25+ Treg细胞 -
补肾活血方联合地屈孕酮对复发性自然流产患者CD4+ CD25+调节性T细胞及IL-10、TGF-β1表达的影响
目的:探讨补肾活血方联合地屈孕酮治疗复发性自然流产(RSA)的疗效及免疫调节机制.方法:选择肾虚血瘀型RSA妊娠患者62例,随机分为中药组(21例)、西药组(20例)、中西药组(21例).中药组采用自拟补肾活血方治疗,西药组采用地屈孕酮治疗,中西药组采用两者联合治疗.同时选正常妊娠者20例为正常对照组,不予任何药物治疗.观察各组治疗前后临床疗效、流式细胞仪测定外周血CD4+ CD25+调节性T细胞百分率,ELISA法检测血清IL-10、TGF-β1水平.结果:中西药组临床综合疗效优于其余两组,但差异无统计学意义(P＞0.05),中药组和西药组疗效比较,差异亦无统计学意义(P＞0.05).治疗组各组治疗后较治疗前外周血CD4+ CD25+调节性T细胞百分率、血清IL-10及TGF-β1水平均明显升高(P＜0.05).治疗后与中药组、西药组相比,中西药组外周血CD4+ CD25+调节性T细胞百分率、血清IL-10及TGF-β1水平升高(D＜0.05),中药组与西药组间比较,则均无统计学意义(P＞0.05).结论:补肾活血方联合地屈孕酮治疗肾虚血瘀型RSA临床疗效确切,从整体上调节免疫耐受状态,使妊娠得以维持.
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扶正肺瘤方对肺癌患者CD4+CD25+Treg细胞的影响
目的:观察扶正肺瘤方对肺癌患者CD4+CD25+reg细胞的影响.方法:将50例患者随机分为观察组和对照组,每组各25例.对照组单纯给予DP方案化疗(多西紫杉醇联合顺氯氨铂),观察组在对照组的基础上加服扶正肺瘤方,两组均在治疗2个疗程(3周为1个疗程)后通过流式细胞术检测患者外周血免疫细胞,比较观察组和对照组CD4+CD25+Treg免疫细胞检测值,同时比较每组治疗前后免疫细胞功能变化情况.结果:治疗前两组外周血CD4+ CD25+ Treg细胞百分率无明显差异(P＞0.05);2个疗程后,两组患者外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的表达较治疗前均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组下降更为明显,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).观察组T细胞及NK细胞活性均有提高,且均明显优于对照组(P＜0.05).结论:扶正肺瘤方可下调晚期非小细胞肺癌患者CD4+ CD25+,调节性T细胞的表达水平,从而有助于恢复机体对肿瘤的免疫监视能力.
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重症肺炎合并脓毒血症患儿血清CD4+CD25+Treg细胞在临床诊断中的价值评估
目的 探索hs-CRP、PCT以及CD4+ CD25+ Treg细胞比率在诊断肺炎合并脓毒血症过程中的临床应用效果与价值.方法 本研究采用回顾性病例对照研究方法,收集本院诊断为肺炎合并脓毒血症的患儿45例为肺炎合并脓毒血症组,对照组选择本院中其他疾病患者50例.结果 肺炎合并脓毒血症组PCT、hs-CRP和CD4+ CD25+ Treg(％)细胞水平均高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为35.71、19.85、21.39,P均＜0.01).hs-CRP、PCT和CD4+CD25+ Treg细胞的ROC曲线下面积分别为0.871、0.840和0.812,3者之间差异无统计学意义(P＞0.05).hs-CRP、PCT和CD4+ CD25+ Treg细胞在肺炎合并脓毒血症的诊断佳截点分别是≥12.4 mg/L、≥2.08 ng/ml和≥6.87％.结论 CD4+ CD25+ Treg细胞比率可能是诊断肺炎合并脓毒血症新的诊断指标,具有良好的临床诊断价值.
关键词： 肺炎 脓毒血症 CD4+ CD25+ Treg细胞 诊断价值评估 -
再生障碍性贫血患者外周血Th17、CD4+CD25+Treg细胞的免疫应答研究
目的 探究再生障碍性贫血患者外周血TH17、CD4+ CD25+ Treg细胞的表达特征及血象影响.方法 采集血液标本,进行细胞处理、细胞培养、细胞因子的ELISA检测、流式细胞术检测;将实验结果用Mann-WhitneyU秩和检验,进行二分类组间比较;用Kruskal-Wallis H(K)秩和检验,进行多分类趋势分析.结果 对照组、NSAA组与SAA组相比,外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例依次降低;TH17细胞比例依次升高;差异有统计学意义(P＜0.05);TNF-α细胞因子水平组间差异无统计学意义(P＞0.05).SAA组、NSAA组外周血血红蛋白计数与TH17细胞比例均呈负相关(r值分别为-0.09、-0.889,P＜0.05).SAA组、NSAA组外周血血红蛋白计数与CD4+ CD25+ Treg细胞比例均呈正相关(r值分别为0.889、0.882,P＜0.05).SAA组、NSAA组外周血血红蛋白计数与血清IL-17细胞因子均呈负相关(r值分别为-0.900、-0.975,P＜0.05).结论 Th17/Treg失衡是再生障碍性贫血发生、发展的关键因素;Th17细胞免疫应答增强,CD4+ CD25+ Treg细胞免疫应答减弱,加重了再生障碍性贫血患者骨髓衰竭的严重程度.
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小鼠孕早期暴露量子点对妊娠结局和CD4+CD25+Treg细胞的影响
目的 探讨小鼠孕早期暴露硫化锌量子点(QDs)对妊娠结局和外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的影响.方法 制备成年健康孕鼠并将其随机分为高剂量QDs组、低剂量QDs组和对照组,分别于妊娠第3～5天尾静脉注射0.50和0.05μmol/L QDs,以及生理盐水各100μl,于妊娠第15天观察妊娠结局,并采用流式细胞术分析孕鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例.结果 QDs可引起流产、吸收胎和死胎等不良妊娠结局,高剂量QDs使胚胎平均着床数、胎鼠均重及胎盘均重低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);且QDs暴露孕鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的比例低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小鼠孕早期暴露QDs具有胚胎毒性,且其毒性机制可能与降低外周血中CD4+ CD25+ Treg细胞比例、扰乱妊娠免疫耐受有关.
关键词： 量子点 生殖毒理 CD4+ CD25+ Treg细胞 妊娠免疫耐受 -
慢性丙型病毒性肝炎患者CD4+CD25+Treg细胞与自身抗体的相关性研究
目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者CD4+ CD25+ Treg细胞水平与自身抗体之间的关系及其临床意义.方法 选取2013年10月至2015年2月该院收治的324例新入院且未经治疗的慢性丙型病毒性肝炎患者,利用间接免疫荧光和免疫印迹方法检测患者自身抗体谱的表达状况,同时使用流式细胞术计数患者外周血CD4 +CD25+ Treg细胞数量.结果 324例慢性丙型病毒性肝炎患者,有136例患者至少有1项自身抗体阳性,另有188例慢性丙型病毒性肝炎患者自身抗体谱表达均为阴性.自身抗体阳性组CD4+ CD25+ Treg细胞百分比明显低于自身抗体阴性组(P＜0.05);同时慢性丙型肝炎患者CD4+ CD25+ Treg细胞水平随着自身抗体表达数的增加而降低,呈负相关.结论 对HCV感染患者进行CD4+ CD25 + Treg细胞水平监测,能有效预判患者发生免疫耐受的可能性.
关键词： 慢性丙型肝炎 自身抗体 CD4+ CD25+ Treg细胞 -
天然CD4+CD25+Treg细胞的研究进展
天然CD4+ CD25+ Treg细胞在针对自身抗原和外来抗原的免疫应答中起关键控制作用,其缺乏或功能性的缺陷将导致多重病理性的失调.本文就近年在其产生、作用机制以及与免疫耐受的诱导关系等方面的研究进展进行了综述.
关键词： CD4+ CD25+ Treg细胞 自身免疫 -
红细胞输注无效患者外周血T淋巴细胞亚群和调节性T细胞的变化
目的 研究红细胞输注无效患者外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg细胞)水平变化.方法 采用流式细胞仪分别检测30例红细胞输注无效患者和30例红细胞输注有效患者输血前后外周血T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+、CD4+ CD25+ Treg)的水平.结果 红细胞输注无效组输血后的CD3+T细胞百分比、CD4 +T细胞百分比以及CD4 +/CD8+比值较输血前升高(P＜0.05),而CD8+T细胞百分比无改变(P＞0.05),CD4+ CD25+ Treg水平较输血前下降(P＜0.05);红细胞输注有效组输血前后外周血T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+、CD4+ CD25 +Treg)的水平没有变化(P＞0.05).结论 红细胞输注无效患者存在T淋巴细胞异常活化现象,调节性T细胞CD4+ CD25+数量的减少可能是其活化的原因,进而导致患者红细胞输注无效.
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间充质干细胞移植对小鼠动脉粥样斑块形成的影响
目的:研究间充质干细胞移植对ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块形成的影响.方法:分离培养ApoE-/-小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并进行鉴定.将30只ApoE-/-小鼠分为阴性对照组、阳性对照组、MSCs移植组,每组10只,阳性对照组和MSCs移植组从尾静脉注射MSCs.比较各组小鼠的斑块面积；分析各组小鼠不同组织中CD4+ CD25+ Treg细胞的数目和功能；利用ELISA法检测各组小鼠脾细胞炎性因子浓度.结果:与对照组比较,MSCs移植组小鼠斑块面积明显缩小(P＜0.05),CD4+ CD25+ Treg细胞的数目显著增加(P＜0.05),CD4+ CD25+ Treg细胞增殖反应下降；上清液中TGF-β和IL-10浓度显著升高,而IFN-γ浓度显著下降.结论:MSCs移植可能通过调控体内炎症反应而产生抗动脉粥样硬化作用.
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CD4+ CD25+ Treg细胞与移植免疫耐受
诱导器官移植受者对供者抗原的免疫耐受是防治同种异型移植排斥反应的理想途径.目前认为,免疫耐受形成的主要机制包括:胸腺及骨髓阴性选择引起的克隆清除(Clonal deletion)、组织特异性自身抗原低表达引起的克隆忽视(Clonal ignorance)、阻断T细胞共刺激信号引起的克隆无能(Clonal anergy)、嵌合体(Chimerism)的形成、调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)介导的克隆抑制(Clonal suppression)等.近年来CD4+ CD25+ Treg细胞的研究已成为免疫学界的热门课题之一.已知CD4+ CD25+ Treg细胞存在于小鼠、大鼠和人体中,是机体自然存在的具有主动调节活性的T细胞,对维持自我耐受和控制自身免疫病发挥着重要作用.本文着重就CD4+ CD25+ Treg细胞的免疫调节机制及其在诱导移植免疫耐受方面的研究进展做一综述.
关键词： CD4+ CD25+ Treg细胞 移植免疫耐受
