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miR-124靶向调控STAT3调节动脉粥样硬化中血管内皮细胞的生物学特性
目的 研究miR-124在高脂饮食(HFD)致载脂蛋白(Apo)E-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)模型中的表达和对AS血管内皮细胞生物学特性的影响及潜在分子机制.方法 与正常饮食(ND)喂养ApoE-/-小鼠相比,用HFD喂养ApoE-/-小鼠12 w构建AS模型,用HE染色和油红O染色检测AS损伤.使用流式细胞术从主动脉弓分离Pecam-1阳性小鼠内皮细胞.氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理人主动脉内皮细胞(HAECs)用于构建AS体外模型.MTT检测细胞增殖能力,RT-qPCR检测miR-124表达,Western印迹检测蛋白表达.生物信息学分析预测miR-124的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因和Western印迹进行鉴定.结果 与ND喂养ApoE-/-小鼠相比,经HE染色和油红O染色鉴定,HFD喂养的ApoE-/-小鼠12 w内发生了AS.与ND小鼠相比,在HFD小鼠主动脉弓中内皮细胞标记物Pecam-1表达明显降低,间充质细胞标记α-SMA和Vi-mentin表达显著增加,内皮细胞凋亡显著增加.类似的结果在体外研究得到验证,miR-124能够消除ox-LDL诱导的HAECs凋亡,其中机制可能是miR-124通过靶向抑制STAT3表达发挥作用.结论 AS相关的内皮细胞凋亡可部分通过下调miR-124进而诱导STAT3表达而引起.
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三七皂苷R1调节炎性T细胞亚群保护血管内皮的实验研究
目的 探讨炎性T细胞亚群在胶原酶诱导的血管内皮损伤早期的变化状态及三七皂苷R1的保护作用机制.方法 采用扫描电镜观察ApoE-/-小鼠动脉内皮损伤程度;流式细胞术检测小鼠外周血中CD62Phi、CD62P+CD62E+脱落内皮细胞的比例;胞内外因子染色法检测炎性T细胞亚群分泌TNF-α、IL-17的水平.结果 扫描电镜下,内皮损伤模型组小鼠血管内膜受损明显,内皮脱落面积明显增加,实验组经三七皂苷R1处理后血管内皮偶有脱落(P均<0.05);另外,模型组脱落内皮细胞CD62Phi、CD62P+CD62E+比例明显高于正常对照组,同时,T细胞分泌TNF-α、IL-17的能力明显升高,而实验组脱落内皮细胞比例明显低于模型组,T细胞分泌IL-17的比例下降(P均<0.05).结论 Th17细胞亚群比例升高与血管内皮早期损伤密切相关,三七皂苷R1在保护血管内皮的同时,可选择性地下调Th17细胞亚群比例.
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通心络联合阿托伐他汀、阿司匹林对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响
目的 观察通心络与阿托伐他汀、阿司匹林联合应用对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响,为缺血性心脑血管病的防治提供一种优选方案.方法 将ApoE-/-小鼠随机分为模型组(AS)、阿托伐他汀组(ATO)、阿司匹林组(ASP)、通心络组(TXL)、ATO联合ASP组(A+A)以及3药联用ATS低剂量组(ATS-L)、高剂量组(ATS-H),饲以高脂饲料同时灌胃给药,每组20只;另选20只同系C57BL/6J小鼠作为正常对照组(CON),饲以普通饲料;12周末HE染色观察血管病理形态变化,酶比色法、ELISA法检测血脂及血清高敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平,Western blot检测主动脉胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的蛋白表达.结果 HE染色显示AS组动脉内皮剥脱,内皮下可见大量泡沫细胞和胆固醇结晶,斑块形成明显.血清TC、TG、LDL、hs-CRP水平较CON组均明显升高(P<0.01),HDL明显降低(P<0.01);主动脉ICAM-1、VCAM-1及MCP-1蛋白表达明显增多(P＜0.01).与模型组比较,各用药组均能不同程度的降低TC、TG、LDL、hs-CRP水平(P<0.05或P<0.01),下调主动脉ICAM-1、VCAM-1及MCP-1蛋白表达(P<0.05或P<0.01),其中ATO、ASP、TXL 3组间上述各指标无明显差异(P＞0.05);A+A及ATS-L组上述各指标水平均明显低于3药单用组 (P<0.05或P<0.01),但均高于ATS-H组(P<0.05);ATS-H组血清HDL水平明显高于其他各用药组 (P<0.05或P<0.01).且三药联用ATS干预后动脉内皮完整,内皮下泡沫细胞明显减少,脂质斑块明显消退.结论 通心络联合阿托伐他汀、阿司匹林不仅具有确切的调脂作用,而且能够协同抗炎,延缓AS脂质斑块的形成,其综合疗效明显优于三药单用及两西药联用,具有协同增效之优势.
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瑞舒伐他汀对ApoE-/-小鼠心肌SIRT1信号通路的影响
目的 探讨SIRT1、p-FOXO3a信号通路在高脂饮食下ApoE--小鼠心脏氧化应激损伤中的保护作用,及瑞舒伐他汀对该通路的影响.方法 随机选取C57BL/6J小鼠(对照组)10只,给予普通饮食.选取同品系ApoE--小鼠20只,随机分为模型组和干预组,每组10只,均给予高脂喂养.干预组瑞舒伐他汀悬液灌胃,模型组等量生理盐水灌胃.连续喂养16周后处死所有小鼠,全自动生化仪检测血清血脂,HE染色观察各组小鼠心肌细胞形态变化,Western blotting法检测心肌细胞SIRT1、p-FOXO3a的表达,免疫组化法检测心肌SIRT1蛋白的表达,同时检测心脏组织匀浆中SOD、MDA含量.结果 模型组较对照组血清TC、TG、LDL-C明显升高(P＜0.05),HDL-C显著降低(P＜0.05),心肌细胞粗大、排列紊乱,胶原增多,SIRT1、p-FOXO3a表达减少(P＜0.05),组织匀浆中SOD降低,MDA增多(P＜0.05).与模型组相比,干预组小鼠血清TC、TG、LDL-C明显降低(P＜0.05),HDL-C明显升高(P＜0.05),心肌细胞排列整齐,胶原减少,SIRT1、p-FOXO3a表达增加(P＜0.05),组织匀浆中SOD增多,MDA降低.结论 高脂饮食下ApoE-/-小鼠心脏易发生氧化应激损伤,瑞舒伐他汀可通过上调SIRT1、p-FOXO3a保护心脏免受氧化应激损伤.
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ApoE基因缺失小鼠视网膜及Bruch膜组织形态观察
目的 探讨ApoE基因缺失(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠视网膜及Bruch膜的组织形态改变.方法 随机将24只2月龄C57BL小鼠分为高脂组和普食组,每组12只,另用2月龄ApoE-/-小鼠12只作为普食组,喂养4个月后检测各组动物血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、甘油三脂(triglyceride,TG)含量,光镜和电镜下观察视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)细胞、视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞和Bruch膜形态结构改变,半定量检测视网膜ONL、RPE细胞数和Bruch膜厚度.结果 6月龄ApoE-/-普食组小鼠、6月龄C57 BL高脂组小鼠、6月龄C57BL普食组小鼠血浆TC的含量分别为(9.72±0.41)mmol·L-1、(6.97±0.54) mmol·L-、(5.15±0.31)mmol·L-1,LDL的含量分别为(1.05±0.16)mmol·L-1、(1.25±0.10)mmol·L-1、(0.43±0.08)mmol·L-1,TG的含量分别为(0.78±0.16) mmol·L-1、(0.56±0.19)mmol·L-1、(0.53±0.17)mmol·L-1,ONL细胞核面积分别为(23 208.00±716.91)μm2、(24 269.00±1263.13) μm2、(26 952.00±2449.10) μm2,RPE细胞数目分别为10.20±0.83、11.70±0.62、13.80±1.01,Bruch膜厚度分别为(0.87±0.04) μm、(0.77±0.07) μm、(0.59±0.03) μm.TC:6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL高脂组和普食组明显增高(P＜0.001)；LDL:6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL普食组明显增高(P ＜0.001)；TG:6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL普食组明显增高(P＜0.05),比6月龄C57BL高脂组增高(P＞0.05).光镜下观察发现:6月龄ApoE-/-普食组小鼠视网膜ONL、RPE细胞排列紊乱、萎缩；半定量结果显示,6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL普食组视网膜RPE细胞明显减少(P＜0.001),ONL细胞数显著减少(P＜0.01),Bruch膜显著增厚(P＜0.001).6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL高脂组视网膜RPE细胞明显减少(P＜0.O1),ONL细胞数减少(P＞0.05),Bruch膜显著增厚(P＜0.05).电镜观察发现:6月龄ApoE-/-普食组小鼠RPE基底膜皱褶减少,胞质内线粒体轻度肿胀,可见核边聚现象,Bruch膜纤维结构不均匀,弹力层断裂,有空泡出现.结论 ApoE-/-普食组小鼠出现显著高脂血症,引起视网膜ONL、RPE及Bruch膜呈现AMD的病理改变,表明ApoE-/-与AMD具有明显相关性.
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苯并芘诱导的小鼠腹主动脉瘤模型的建立
目的:建立苯并芘诱导的小鼠腹主动脉瘤模型,并与经典ApoE基因敲除(ApoE-/-)模型进行比较.方法:采用苯并芘高脂饲料喂养C57BL/6小鼠合并皮下注射血管紧张素Ⅱ(Bap模型)诱导腹主动脉瘤的形成,造模第28天与ApoE-/-模型比较腹主动脉瘤形成率、大体观的差别以及组织形态学的不同.结果:与正常对照组比较,苯并芘模型实验组小鼠腹主动脉表现为管腔扩张,直径增大(P＜0.001)且未出现壁间血肿,成瘤率为40％;ApoE-/-模型实验组小鼠腹主动脉直径明显增加(P＜0.01)并伴有壁间血肿形成,成瘤率为60％.结论:与ApoE-/-模型比较,苯并芘模型成瘤率虽然有所降低,但造模成本低廉同时模拟人类主动脉瘤的病理特征.
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ApoE-/-小鼠颈总动脉粥样硬化不同阶段自噬水平的变化
目的 探究在载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE-小鼠)颈总动脉粥样硬化(As)不同阶段自噬水平的变化情况.方法 40只6周龄雄性ApoE/-小鼠随机分为对照组(10只)与模型组(30只,套管后平均分为3组,分别在套管2周、4周、8周后处死).股动脉取血进行血脂检测;光镜和透射电镜观察右侧颈总动脉显微和超微结构;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测右侧颈总动脉组织中ATG5、Beclin1、LC3-Ⅱ的mRNA水平和蛋白的相对表达量.结果 随着套管手术时间增加,ApoE.-小鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平逐渐升高(P＜0.05).光镜观察显示,对照组管壁结构较为完整,弹性膜完整且较丰富;但是随着套管时间的增加,管壁逐渐加厚,弹性膜结构逐渐破坏,泡沫细胞、炎性细胞浸润逐渐增多,管腔逐渐狭窄.透射电镜观察显示,随着套管时间增加,小鼠右侧颈总动脉巨噬细胞内脂滴数目逐渐增多,自噬体数目在术后4周时高.qRT-PCR及Western blot结果显示,右侧颈总动脉组织中ATG5、Beclin1、LC3-Ⅱ的mRNA和蛋白的相对表达量在术后4周时高(P＜0.05).结论 随着ApoE.-小鼠颈总动脉As的形成自噬持续被激活,自噬水平在As某一时间点(术后4周)达到峰值,而后逐渐降低.
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CD59基因在藻蓝蛋白抗动脉粥样硬化中的作用研究
目的 探讨CD59基因在藻蓝蛋白(C-phycocyanin,CPC)抗动脉粥样硬化发生发展中的作用.方法 将40只ApoE基因缺失(ApoE-/-)小鼠随机分为4组:对照组、CPC处理组、CD59处理组、CD59+CPC处理组.在高脂饮食同时进行药物干预.12周后,RT-PCR检测全血中CD59 mRNA水平,Western blot检测组织中CD59蛋白表达量.检测血清生化指标,并取主动脉根部制作石蜡切片,HE染色观察动脉粥样硬化斑块形成情况.结果 动脉粥样硬化小鼠模型构建成功.CD59与CPC都具有一定的降低血脂水平和抑制动脉粥样硬化发展的作用,并且两者联合作用比单独给药效果更显著.此外CPC能促进小鼠体内CD59基因的表达.结论 CPC对ApoE-/-小鼠的抗动脉粥样硬化作用可能是通过促进体内CD59基因的表达,进而延缓或抑制了动脉粥样硬化的发生发展.
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间充质干细胞移植对小鼠动脉粥样斑块形成的影响
目的:研究间充质干细胞移植对ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块形成的影响.方法:分离培养ApoE-/-小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并进行鉴定.将30只ApoE-/-小鼠分为阴性对照组、阳性对照组、MSCs移植组,每组10只,阳性对照组和MSCs移植组从尾静脉注射MSCs.比较各组小鼠的斑块面积；分析各组小鼠不同组织中CD4+ CD25+ Treg细胞的数目和功能；利用ELISA法检测各组小鼠脾细胞炎性因子浓度.结果:与对照组比较,MSCs移植组小鼠斑块面积明显缩小(P＜0.05),CD4+ CD25+ Treg细胞的数目显著增加(P＜0.05),CD4+ CD25+ Treg细胞增殖反应下降；上清液中TGF-β和IL-10浓度显著升高,而IFN-γ浓度显著下降.结论:MSCs移植可能通过调控体内炎症反应而产生抗动脉粥样硬化作用.
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健脾祛瘀法对血脂异常ApoE基因缺失小鼠色素上皮VEGF及VEGFR2的影响
目的 通过观察血脂异常ApoE缺失(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)组织及超微结构,探讨健脾祛瘀法对其RPE层VEGF/VEGFR2信号传导通路的影响.方法 随机将36只2月龄ApoE-/-小鼠分为3组,即:普食组(A组)、高脂组(B组)、治疗组(C组),每组动物12只,喂养5mo后检测其体质量、血脂、血流变,RPE层行光镜、免疫组织化学、透射电镜观察,Western-blot检测VEGF表达.结果 7月龄ApoE-/-小鼠B组体质量、血脂、血流变指标均高于A组和C组,差异具有统计学意义(P<0.05).A组RPE厚度明显高于B组和C组,差异具有统计学意义(P<0.05),但B组与C组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).B组RPE层VEGF及VEGFR2染色面积及积分光密度均高于A组和C组,差异具有统计学意义(P<0.05).B组视网膜VEGF蛋白的相对表达量明显高于A组和C组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 健脾祛瘀法对改善血脂异常ApoE-/-小鼠的血脂、血流变等生化指标有积极作用,并且提示对该AMD动物模型中RPE层VEGF/VEGFR2信号传导通路有一定调控作用.
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血脂异常对ApoE基因缺失小鼠视网膜及Bruch膜的影响
目的:研究血脂异常对ApoE基因缺失(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠视网膜及Bruch膜的影响.方法:随机将24只2月龄(ApoE-/-)小鼠和24只C57BL/6J小鼠分别分为高脂组和普食组,每组动物12只,喂养4mo后检测其体质量、血浆总胆固醇,视网膜及Bruch膜行光镜和电镜检查.结果:6月龄ApoE-/-高脂组的血浆总胆固醇均显著性高于对照组(P<0.05);6月龄ApoE-/-高脂组外核层厚度、色素上皮细胞层厚度显著低于对照组(P<0.05),而其Bruch膜厚度则显著大于对照组(P<0.05).结论:血脂异常使ApoE-/-动物的视网膜光感受器细胞、色素上皮细胞及Bruch膜发生病理改变,其改变相似于早期年龄相关性黄斑变性的改变.
