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JQ1诱导SUP-B15细胞凋亡的Notch1通路机制研究
目的:本研究观察布罗莫结构域抑制剂JQ1诱导人Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞株(SUP-B15)凋亡的Notch1通路可能机制.方法:用不同浓度JQ1在不同时期处理SUP-B15细胞,用四甲基偶氮唑蓝试验(MTT法)检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞周期;实时定量PCR法检测MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达水平.结果:JQ1在0-4 μmol/L的浓度范围内能抑制SUP-B15细胞的生长,并呈现剂量-时间依赖性;JQ1在1、2、4 μmol/L处理SUP-B15细胞48 h后,诱导细胞S期阻滞,并呈剂量依赖性,与同时间对照组比较有统计学差异(P＜0.05);与同时间对照组相比,JQ1能够降低MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达.结论:JQ1可以有效抑制SUP-B15细胞生长增殖,而Notch1通路凋亡途径很可能是JQ1促进Ph+ ALL细胞凋亡的多途径之一.
关键词： JQ1 SUP-B15细胞株 Notch1通路 -
BRD4抑制剂JQ1对Jurkat细胞增殖抑制及凋亡诱导作用的研究
目的:探讨布罗莫结构域抑制剂(JQ1)对急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat)的增殖抑制、诱导凋亡作用以及可能的作用机制.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测JQ1作用于Jurkat细胞后的细胞增殖抑制率,AnnexinV-FITC/PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡率的改变,实时荧光定量PCR检测Notch1及c-Myc基因表达水平.结果:随药物浓度的增加,Jurkat细胞生长受到明显抑制,表现为时间-剂量依赖性.JQ1 0.8、1.6、4μmol/L处理Jurkat细胞48和72 h后,Jurkat细胞株的凋亡率呈时间-剂量变化,与对照组比较有统计学差异(P＜0.05).PCR检测显示,药物作用48 h后Notch1及c-Myc mRNA表达均下调,与对照组相比,有显著差异.结论:JQ1可以有效抑制Jurkat细胞株的增殖,这可能是通过Notch1基因和c-Myc基因促进凋亡.JQ1可以作为治疗T-ALL新途径之一.
关键词： JQ1 Notch1/c-Myc Jurkat细胞 细胞凋亡 -
溴结构域蛋白4抑制剂JQ1对肝癌细胞活性的影响
目的:探讨溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)抑制剂JQ1对两种不同肝癌细胞系增殖、凋亡的影响.方法:用BRD4抑制剂JQl处理HepG2,Bel-7402细胞株,磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)染色检测细胞活力;EdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)嵌入和Hoechst 33342染色法检测细胞增殖;以流式细胞术和AnnexinV-FITC/PI双染法分别分析细胞周期、细胞凋亡;后用Western blot法观察JQl介导抗增殖作用主要下调蛋白C-myc在蛋白水平上的变化,进一步验证JQ1抑制肝癌细胞增殖的作用.同时探讨JQ1与目前肝癌细胞治疗药物甲苯磺酸索拉非尼片对肝癌细胞的比较和联合作用.结果:BRD4抑制剂JQ1可以以剂量依赖的方式显著抑制HCC细胞系:HepG2细胞和Bel-7402细胞的活力,具体表现为:抑制其细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染法分析发现能促进其凋亡;同时C-myc蛋白表达的也被显著抑制.与JQ1、索拉非尼片单药应用相比,小剂量的JQ1与索拉非尼片联合应用,HCC细胞的生长抑制率增加,凋亡率也增加,提示BR D4抑制剂JQ1联合索拉非尼片对细胞生长的抑制作用要强于JQ1或索拉非尼片单独用药.结论:BRD4抑制剂JQ1可能是一种潜在的可治疗肝细胞癌的新型药物.
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BET蛋白通过调控NF-κB通路参与炎症基因转录
目的:探讨特异性抑制溴结构域(bromodomain and extra-terminal,BET)蛋白对血管内皮细胞激活与早期动脉粥样硬化形成的作用及其分子机制.方法:1.原代分离培养脐静脉内皮细胞和小鼠心脏血管内皮细胞后用肿瘤坏死因α(TNFα)刺激模拟炎症过程,以小分子化合物JQ1特异性抑制BET蛋白,分组如下:(1)对照组;(2)TNFα(25 ng/mL)处理组;(3) TNFα+JQ1处理组.采用Realtime-PCR及流式细胞术检测各组细胞炎症因子mRNA及蛋白水平的表达,采用5XκB荧光素酶报告基因检测各组核转录因子kappa B(NF-κB)转录活性.2.LDL受体基因敲除(LDLR-/-)小鼠随机分为2组:JQ1组(n=8,JQ1腹腔注射,50 mg/kg,每天一次)和对照组(n=8,DMSO溶媒组),同时给予高胆固醇饮食8周,采用免疫组化方法检测主动脉弓部血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达水平.结果:与对照组相比,TNFα组炎症因子mRNA、蛋白表达明显上调(P＜0.01),使用JQ1干预后,炎症因子E选择素(E-selectin)、P选择素(P-selectin)、VCAM-1及白细胞介素-8(IL-8)mRNA及蛋白表达均明显下调(P＜0.01).LDLR-/-小鼠高脂饮食诱导8周后JQ1显著下调了主动脉弓部VCAM-1蛋白表达.5XκB荧光素酶报告基因结果显示,与TNFα(-)相比,TNFα㈩组荧光素酶报告基因活性增强,JQ1可以显著下调报告基因活性(P＜0.01).结论:BET蛋白通过调控NF-κB信号通路参与了血管内皮炎症基因转录;抑制BET蛋白下调了NF-κB目的基因表达从而减轻了内皮激活及高脂诱导的早期动脉粥样硬化病理改变.
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JQ1通过抑制Akt/mTOR通路协同阿霉素抑制人骨肉瘤细胞的实验研究
目的 探索BRD4抑制剂JQ1协同传统化疗药物阿霉素(adriamycin,ADM)治疗骨肉瘤的有效性.方法 选取人骨肉瘤细胞系143b,在体外进行CCK8细胞增殖实验,了解ADM和JQ1对143b细胞的半数抑制率(IC50)剂量;应用低于IC50剂量的ADM或JQ1或联合应用ADM和JQ1,进行平板克隆实验和细胞凋亡实验;利用裸鼠皮下成瘤实验,观察应用ADM或JQ1或联合应用ADM和JQ1对体内肿瘤生长的抑制,以及诱导体内肿瘤细胞凋亡的作用;通过Western印迹法探索JQ1协同ADM抑制骨肉瘤细胞的可能机制.结果 ADM和JQ1对人骨肉瘤细胞系143b的IC50分别为0.23 μmol/L和9.47 μmol/L;选取0.2μmol/L ADM和8μmol/L JQ1进行平板克隆和细胞凋亡实验.单独应用ADM或JQ1可以抑制骨肉瘤细胞的克隆形成能力并诱导凋亡,联合ADM和JQ1可显著抑制骨肉瘤细胞的克隆形成能力并诱导凋亡,效果显著优于单药(P＜0.05).单独应用ADM或JQ1可抑制小鼠体内骨肉瘤的生长,联合应用ADM和JQ1对肿瘤生长的抑制要明显优于单独用药,差异具有统计学意义(P＜0.05).Caspase3免疫组化染色提示单独应用ADM或JQ1都可以在体内诱导人骨肉瘤细胞143b的凋亡,联合ADM和JQ1显著增强了对骨肉瘤细胞凋亡的诱导.Western印迹法提示骨肉瘤细胞在单独应用ADM后,磷酸化的Akt(p-Akt)和磷酸化的mTOR(p-mTOR)蛋白表达都上调了,而JQ1能够抑制p-Akt和p-mTOR的表达,JQ1联合ADM处理过的骨肉瘤细胞中p-Akt和p-mTOR的表达显著低于单独应用ADM组.结论 JQ1联合ADM能够显著抑制骨肉瘤细胞在体外和体内的生长,并诱导骨肉瘤细胞的凋亡;JQ1可能是通过抑制Akt/mTOR通路协同ADM发挥抑制人骨肉瘤细胞的作用.
关键词： 骨肉瘤 JQ1 阿霉素 Akt/mTOR通路 -
含溴结构域和ET域蛋白抑制剂对结肠癌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路和有氧糖酵解的影响
目的 观察抑制含溴结构域和ET域(BET)蛋白能否影响结肠癌细胞的有氧糖酵解,并进一步探讨其影响机制是否通过下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活性实现.方法 选择人结肠癌RKO、LS174T、HCT116细胞株.实验分成DMSO组和JQ1组.DMSO组分别于RKO、LS174T、HCT116细胞株中加入溶媒DMSO处理,JQ1组分别于RKO、LS174T、HCT116细胞株中加入BET蛋白抑制剂JQ1(将1μmol/LJQ1溶于DMSO中)处理,每组每个细胞株设3个副孔.测定两组各细胞株的乳酸含量和计算糖耗量,通过细胞计数观察RKO细胞的增殖密度.为研究JQ1能否协同低糖环境发挥其效应,另取未经处理的HCT116细胞株加入低糖DMEM培养基(葡萄糖浓度6.1 mmol/L)中培养,进行细胞计数.采用Western印迹法测定mTOR下游蛋白表达情况.结果 JQ1组RKO、LS174T、HCT116细胞株的乳酸含量和糖耗量均显著低于DMSO组同细胞株(P值均＜0.01).JQ1组RKO细胞株和LS174T细胞株的细胞计数均显著少于DMSO组(P值均＜0.01).高糖或低糖培养基中,JQ1组HCT116细胞株的细胞计数均显著少于DMSO组(P值均＜0.05).光学显微镜下见,JQ1组RKO细胞增殖密度明显减少.Western印迹法结果显示,JQ1组RKO细胞株mTOR下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白)、HCT116细胞株mTOR下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白、抗4E结合蛋白1、抗S6蛋白激酶1蛋白)表达的灰度值均显著低于DMSO组(P值分别＜0.05、0.01).结论 抑制BET蛋白可能通过抑制mTOR通路影响结肠癌细胞有氧糖酵解,从而抑制结肠癌细胞增殖.
关键词： 含溴结构域和ET域蛋白 JQ1 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 结肠癌 有氧糖酵解 -
BRD4抑制剂JQ1抑制非小细胞肺癌生长的研究
目的:探讨BRD4抑制剂JQ1对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株及厄洛替尼耐药细胞株生长的影响并探讨其作用机制.方法:用不同浓度JQ1处理不同类型NSCLC细胞株,72 h后用磺酰罗丹明B(SRB)法检测JQ1对细胞增殖的抑制作用,分别用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测癌基因eIF4E的mRNA及蛋白表达水平.结果:JQ1呈浓度依赖性抑制NSCLC细胞株的生长,包括厄洛替尼敏感和耐药细胞株,下调eIF4E的mRNA及蛋白水平表达.结论:JQ1可抑制不同NSCLC细胞株的生长,其作用机制可能与降低eIF4E表达有关.
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JQ1下调SKP2和上调p27诱导HeLa细胞凋亡的研究
[目的]观察JQ1对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及可能的作用机制.[方法]采用CCK-8比色法检测JQ1对HeLa细胞增殖的影响,分为二甲亚砜(DMSO)对照组和JQ1处理组(终浓度分别为0.01、0.1、1和10 μmol/L),分别处理24、48、72和120h.将细胞分为DMSO对照组和10μmol/L JQ1处理组进行后续实验,细胞培养12d后计算细胞克隆形成数量;细胞培养72h后采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹法检测S期激酶相关蛋白2(SKP2)和p27的表达变化.[结果]JQ1抑制HeLa细胞增殖,且作用呈剂量与时间依赖性,10μmol/L JQ1处理细胞72h后细胞存活数量减半;与DMSO对照组相比,10μmol/L JQ1显著抑制HeLa细胞克隆形成(细胞克隆形成数量:3±2vs240±10,P＜0.001);且能诱导HeLa细胞凋亡(细胞凋亡百分比:12.80±0.88 vs 2.90±0.27,P＜0.01);与DMSO对照组相比,JQ1能抑制细胞SKP2 mRNA和蛋白表达(其中SKP2 mRNA表达倍数:0.43±0.02vs 1.00±0.03,P＜0.01),并上调p27 mRNA和蛋白表达(p27 mRNA表达倍数:2.60±0.13 ys 1.00±0.11,P＜0.01).[结论]JQ1通过诱导细胞凋亡来抑制HeLa细胞的增殖,其可能的机制是抑制SKP2表达和上调p27表达.
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高三尖杉酯碱联合JQ1对急性髓系白血病细胞株Kasumi-1、Mv4-11的凋亡诱导作用
目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合BRD4抑制剂JQ1对急性髓系白血病(AML)细胞株Kasumi-1、Mv4-11的凋亡诱导作用.方法MTS法测HHT、JQ1单药及两药联合对AML细胞株的抑制作用,流式细胞仪检测两药联合对AML细胞株凋亡的作用,Western blot法检测两药联合对凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3、Parp)的作用.结果与HHT、JQ1单药比较,两药联合的抗白血病效应明显增强,能明显抑制AML细胞株Kasumi-1、Mv4-11的增殖;可促进细胞凋亡作用,并明显抑制Bcl-2蛋白表达,激活Caspase-3,促进Parp的裂解.结论HHT联合JQ1可以增强抗AML细胞株的作用,促进AML细胞株的凋亡,是有效的联合方案.
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Nutlin3和JQ1协同抗骨肉瘤的作用
目的 探讨Nutlin3和JQ1在骨肉瘤细胞中是否具有协同的抗骨肉瘤作用.方法 采用1.0μmol/L Nutlin3单药,0.5μmol/L JQ1单药以及两药联合处理骨肉瘤细胞,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞活性检测、协同效应分析、流式细胞仪检测凋亡和Western blot实验,检测Nutlin3 和JQ1两种药物的协同抗骨肉瘤效应,并探讨其分子机制.结果 CCK-8结果显示,在SJSA-1细胞株中,Nutlin3和JQ1单药均能够一定程度的抑制骨肉瘤细胞活性,半数抑制浓度(IC50)值分别为3.7 μmol/L和1.0 μmol/L;但两药联合处理后抗癌效果显著提高,IC50值减低至0.12 μmol/L;采用联合作用指数研究表明在携带有野生型p53的SJSA-1骨肉瘤细胞中CI值为0.18,在p53缺失的Saos-2骨肉瘤细胞中CI值为0.94,表明两个抗癌制剂具有高度协同作用,且这两种新型抗癌制剂的协同作用依赖于p53的活性.流式细胞仪检测凋亡发现1μmol/L Nutlin3和0.5μmol/L JQ1单药分别诱导15％和37％的细胞发生凋亡,两者联合能够诱导80％的细胞发生凋亡,显著高于单药的凋亡作用(P=0.000),表明两者联合能够诱导大量骨肉瘤细胞发生凋亡.Western blot结果显示Nutlin3和JQ1联合应用能够激发半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3高度活化,导致PARP绝大部分裂解,促进了凋亡信号的活化;同时也发现,Nutlin3和JQ1联合应用能够促进p53的表达升高.结论 新型抗癌制剂Nutlin3和JQ1具有明显的协同抗骨肉瘤作用,这种协同作用具有p53依赖性.
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BRD4抑制剂对前列腺癌细胞增殖与凋亡的作用及其机制
目的:探讨BRD4抑制剂JQ1对前列腺癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法:JQ1浓度分别为0.016,0.08,0.4,2,10,20,50 μmol/L处理前列腺癌细胞DU145,在24,48,72 h用CCK8法检测JQ1对前列腺癌细胞DU145增殖的影响并计算JQ1在前列腺癌细胞DU145的IC50值,之后选取JQ1浓度为10,20 μmol/L.流式细胞仪检测JQ1对前列腺癌细胞株DU145凋亡及细胞周期的影响,细胞划痕实验检测JQ1对前列腺癌细胞DU145迁移能力的影响,Western Blot法检测癌基因C-MYC蛋白表达量.结果:浓度为10,20 μmol/L的JQ1抑制前列腺癌细胞DU145的增殖及迁移,促进前列腺癌细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,下调C-MYC蛋白表达量.结论:JQ1可以抑制前列腺癌细胞株的生长,其作用机制可能与JQ1下调癌基因C-MYC表达有关.
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溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对人乳腺癌细胞的作用
目的:研究BET家族小分子抑制剂JQ1对乳腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响及其作用机制.方法:JQ1作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7,采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,MTT法测定细胞存活曲线,克隆形成法测定细胞抑制率,real-time PCR检测c-MYC的基因表达水平变化.Western blotting方法检测c-MYC及BRD4蛋白表达水平的变化.结果:乳腺癌细胞MDA-MB-231对BRD4抑制剂JQ1敏感,而MCF-7则对JQ1耐受.JQ1可以诱导MDA-MB-231细胞G1期阻滞和凋亡,相同的处理因素作用于MCF-7后,则无明显的细胞周期及凋亡水平的改变.JQ1作用于MDA-MB-231细胞后可以显著下调c-MYC基因及蛋白表达水平,而JQ1作用于耐药的MCF-7后,c-MYC的基因的表达水平升高,而蛋白表达水平无明显改变.结论:BET抑制剂提供了一个潜在的治疗乳腺癌的靶点.
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溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对哮喘小鼠气道重塑作用机制研究
目的 探讨溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对哮喘小鼠气道重塑治疗的分子学机制.方法 将24只小鼠随机分成对照组、OVA诱导哮喘组(OVA组)、JQ1干预哮喘组(JQ1+OVA组)(n=8).采用OVA致敏/激发制备哮喘小鼠模型,雾化激发前1 h,JQ1+OVA组小鼠经腹腔注射JQ1溶液(50μg/g).末次激发24 h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,计算各组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比,肺组织行病理染色观察各组小鼠肺组织病理改变;采用RT-PCR及Western blot法分别检测小鼠肺上皮间质转化(EMT)过程中钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 与对照组比较,OVA组小鼠气道炎性细胞明显浸润,气道壁增厚,黏液渗出增多;BALF中细胞总数增加,嗜酸性粒细胞百分比增多(P<0.01).与OVA组比较,JQ1+OVA组小鼠气道炎症反应明显减轻;BALF中细胞总数明显减少,嗜酸性粒细胞百分比降低(P<0.01).与对照组比较,OVA组小鼠肺组织气道上皮E-Cadherin mRNA及蛋白表达水平明显下调,vimentin mRNA及蛋白表达水平明显上调(P<0.01);与OVA组比较,JQ1+OVA组E-Cadherin mRNA及蛋白表达水平升高,vimentin mRNA及蛋白表达水平下降(P<0.01);JQ1+OVA组与对照组上述指标表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 OVA哮喘小鼠存在EMT气道重塑;溴化结构域蛋白抑制剂JQ1可降低哮喘小鼠气道炎症,抑制EMT,减轻气道重塑,为哮喘治疗提供了一个潜在的新方向.
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JQI对系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞中自身免疫相关基因表达的作用
目的:探讨溴结构域(bromodomain and extra-terminal,BET)蛋白抑制剂JQ1对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)外周血CD4+T细胞中自身免疫相关基因表达的作用.方法:利用磁珠分选获得SLE患者CD4+T细胞,采用流式细胞检测CD4+T细胞纯度.用JQ1 (100 nm/L)处理CD4+T细胞6,24,48 h后收集细胞.采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测不同辅助性T细胞亚类特异性基因的mRNA表达.采用ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子的蛋白水平.结果:磁珠分选所得CD4+T细胞百分比为97.2％.与对照组相比,JQ1处理组IFNG,IL-17F,IL-21,CXCR5和FOXP3 mRNA表达水平在6,24,48 h均显著降低(P＜0.05),IL-17A mRNA表达在6,24h显著下降(P＜0.01),IL-4 mRN表达在24,48 h显著升高(P＜0.01),TGF-β1 mRNA表达在6,48 h显著升高(P＜0.05).JQ1处理48 h细胞培养上清中IFN-γ,IL-21和IL-17蛋白水平明显下降(P＜0.05),IL-4和TGF-β蛋白水平明显升高(P＜0.05).结论:BET蛋白抑制剂JQ1可纠正SLE患者CD4+T细胞中的免疫调节失衡,促进免疫稳态恢复.
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BET蛋白抑制剂JQ1对脑缺血再灌注损伤的作用
目的 探讨表观遗传学信号分子BET蛋白的抑制剂JQ1对脑缺血再灌注损伤的保护作用和机制.方法 选择成年雄性Wistar大鼠55只,并随机分为对照组、模型组和实验组,利用线栓法制造大鼠脑缺血再灌注损伤模型.实验组在造模的同时给予JQ1干预.24 h后处死所有实验动物,并通过Zea-Longa神经行为学评分、TTC染色、HE染色、ELISA法等方法,检测大鼠的神经功能、脑梗死体积、脑组织病理学改变、变性细胞指数(DCI)以及脑组织炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)]的水平.结果 模型组和实验组大鼠的神经行为学评分较对照组均明显增高(P<0.05),但实验组大鼠的神经行为学评分较模型组明显下降(P<0.05);模型组大鼠的脑梗死体积、DCI明显高于对照组(P<0.05);当给予JQ1干预后,虽然实验组大鼠脑梗死体积、DCI仍然高于对照组(P<0.05),但是较模型组已明显下降(P<0.05);模型组大鼠脑组织的炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平明显高于对照组(P<0.05);当给予JQ1干预后,虽然实验组大鼠脑组织的炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平仍然高于对照组(P<0.05),但较模型组已明显下降(P<0.05).结论 BET蛋白的抑制剂JQ1对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与JQ1具有抑制炎症因子表达的作用有关.
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溴结构域蛋白4抑制剂JQ1促使肝癌细胞侵袭迁移的分子机制
目的 探讨溴结构域蛋白4抑制剂JQ1对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探究其相关作用机制.方法 采用细胞增殖实验(MTS)检测JQ1对肝癌细胞增殖的影响,Transwell检测JQ1对肝癌细胞细胞迁移、侵袭能力的影响,蛋白免疫印迹法检测JQ1对肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、基质金属蛋白酶(MMP)-9/2表达情况;Transwell检测P-ERK1/2抑制剂(SCH772984)联合JQ1处理对肝癌细胞迁移、侵袭能力的变化,并用蛋白免疫印迹法检测JQ1联合P-ERK1/2抑制剂处理后MMP-9/2变化.结果 JQ1对肝癌细胞Hep3b、SMMC-7721增殖有抑制作用(P<0.05),JQ1能够促进肝癌细胞系Hep3b、SMMC-7721的MMP-9、P-ERK1/2表达,进而增强肝癌细胞系Hep3b、SMMC-7721迁移、侵袭能力(P均<0.001).JQ1诱导的肝癌细胞的迁移、侵袭的能力的增强可以被P-ERK1/2抑制剂(SCH772984)抑制(P均<0.001).结论 JQ1可以通过促进ERK1/2磷酸化进而促进MMP-9/2表达,进而促进肝癌细胞侵袭、迁移.
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JQ1合成工艺的改进
目的 改进JQ1的合成工艺.方法 以4-氯苯甲酰基乙腈为原料,与丁酮和硫在碱性条件下环合得到中间体V[(2-氨基-4,5-二甲基噻吩-3-基)(4-氯苯基)甲酮];中间体V再与9-芴甲氧羰基-天冬氨酸-β-叔丁基酯成酰胺后,脱保护得到中间体Ⅲ[(S)-3-氨基4-((3-(4-氯苯甲酰基)-4,5-二甲基噻吩-2-基)氨基)-4-氧丁酸叔丁酯],后者经环合、构建三唑环,得到目标化合物JQ1.结果与结论 通过1HNMR、13CNMR、MS及IR对目标产物进行了结构确证,HPLC检测其纯度达100％;以原料4-氯苯甲酰基乙腈计算,产物的总收率为21.2％.
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BRD4抑制剂JQ1对膀胱癌细胞增殖与凋亡的作用及其机制研究
目的 探讨BRD4抑制剂JQ1对膀胱癌细胞株的作用及其作用机制.方法 以浓度分别为0.0032、0.016、0.08、0.4、2、10μmol/L JQ1处理膀胱癌细胞株,在24、48、72 h用CCK8法检测JQ1对膀胱癌细胞增殖的影响并计算JQ1在膀胱癌细胞中的IC50值,之后选取浓度为0.5、1 μmol/L的JQ1,采用流式细胞仪检测JQ1对膀胱癌细胞凋亡及周期作用,Transwell侵袭实验检测JQ1对膀胱癌细胞侵袭能力的影响,qRT-PCR法检测癌基因C-MYC及抗凋亡基因Bcl-2的表达.结果 JQ1抑制膀胱癌细胞的增殖,促进膀胱癌细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,抑制膀胱癌细胞侵袭,下调癌基因C-MYC及抗凋亡基因Bcl-2的表达.结论 JQ1可以抑制膀胱癌细胞株的生长,其作用机制可能与JQ1抑制癌基因C-MYC及抗凋亡基因Bcl-2表达有关.
关键词： 溴化结构蛋白4(BRD4) JQ1 膀胱癌 c-myc Bcl-2 -
JQ1对急性髓系白血病细胞株U937增殖抑制作用及其对STAT-5信号转导途径的影响
目的 探讨布罗莫结构域抑制剂JQ1抑制急性髓系白血病细胞株U937的作用机制及对STAT-5信号转导途径的影响.方法 各实验组取对数生长期U937细胞,分别加入0.2、1.0、4.0μmol/L JQ1,同时设置不加JQ1的空白对照组,培养48 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测黏着斑激酶(FAK)、P21活化激酶(PAK1)mRNA的表达水平,蛋白质印迹法分析细胞STAT-5蛋白的表达.结果 不同浓度JQ1对U937细胞的增殖均有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;不同浓度JQ1可诱导U937细胞凋亡,且呈剂量依赖性.不同浓度(0.2、1.0、4.0μmol/L)JQ1处理U937细胞48 h后均能降低FAK mRNA和PAK1 mRNA表达,FAK mRNA的表达量分别为0.417±0.066、0.140±0.026、0.027±0.006(F=454.651,P=0.000),PAK1 mRNA的表达分别为0.533±0.045、0.080±0.010、0.010±0.001(F=2434.610,P=0.000);STAT-5蛋白表达也被明显地抑制,在48 h后对照组STAT-5蛋白相对含量为1.00±0.21,不同浓度(0.2、1.0、4.0μmol/L)JQ1组中STAT-5蛋白相对含量分别为0.71±0.19、0.62±0.16、0.53±0.14(F=263.135,P=0.000).结论 JQ1能有效地抑制急性髓系白血病细胞株U937增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过STAT-5信号转导途径来实现的.
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布罗莫结构域4抑制剂JQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞增殖的抑制作用和机制研究
目的 观察布罗莫结构域4(brd4)抑制剂JQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)细胞株SUP-B15的增殖抑制、凋亡作用及对brd4及其下游基因myc、p53表达的影响,探讨其是否对bcr-abl有逆转作用.方法 采用不同浓度的JQ1处理SUP-B15细胞.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率;AnnexinV-FITC/PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测bcr-abl、brd4 、myc 、p53的mRNA表达.结果 不同浓度的JQ1均能抑制SUP-B15细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,凋亡率较对照组明显增高,并呈时间-剂量依赖性,作用72 h半数抑制浓度为1.0 μmol/L.同时JQ1可以使bcr-abl、 brd4、 myc的mRNA水平下降,而使p53 mRNA的水平升高.结论 brd4抑制剂JQ1可通过下调brd4的表达,影响其下游基因myc及p53的表达,同时逆转bcr-abl表达,达到抑制Ph+ ALL细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用.
