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细胞周期相关激酶在大肠癌组织中的表达及其意义
目的 探讨细胞周期相关激酶(CCRK)在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌临床病理特征之间的关系. 方法 选取50例经病理学确诊的原发性大肠癌患者的癌组织,以配对的癌旁组织作为对照,采用RT-PCR和Western blot 检测CCRK mRNA和CCRK蛋白表达的差异性. 结果 CCRK蛋白在大肠癌组织中的阳性率为60.00％ (30/50),癌旁结肠组织阳性率为40.00％(20/50)差异有统计学意义(x2=5.769,P＜0.05);CCRK蛋白在大肠癌组织中的相对表达量为2.69±0.87,癌旁组织为1.00±0.28,差异有统计学意义(t=5.81,P＜0.05).CCRK mRNA在大肠癌组织中的阳性率为64.00％,癌旁组织为42.00％,差异有统计学意义(x2=4.857,P＜0.05);CCRK mRNA在大肠癌组织中的相对表达量为2.45±0.92,癌旁组织为1.00±0.21,差异有统计学意义(t=4.83,P＜0.05).PT3-4期大肠癌组织CCRK mRNA阳性率为85.70％ (12/14),PT1-2期大肠癌组织阳性率55.56％ (20/36),差异有统计学意义(x2=3.979,P＜0.05);PN1-2期大肠癌组织CCRK mRNA阳性率为87.50％(14/16),PN0期为52.94％(18/34),差异有统计学意义(x2 =5.640,P＜0.05). 结论 CCRK的高表达与大肠癌发生、发展及其TNM分期有关,检测CCRK蛋白和CCRK mRNA表达可以作为大肠癌早期诊断和预后的一项重要参考指标.
关键词： 细胞周期相关激酶 大肠癌 RT-PCR Western blot 临床病理 -
乙型肝炎病毒e抗原肝细胞结合蛋白新基因E-36基因表达谱芯片分析
目的:为了研究未知功能的HBeAg结合蛋白E-36的生物学功能,我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-E-36分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析,筛选能被E-36反式调节的靶基因.方法:应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增E-36蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载淋pcDNA3.1(-)-E-36.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1159个基因表达谱的筛选中,发现有20个基因表达水平显著上调,包括甲状旁腺激素应答的骨肉瘤B1蛋白、SLIT2、核因子κB、白介素受体3、白介素6、血管紧张素Ⅰ转换酶、急性髓细胞性白血病1b、caspase 2、低密度脂蛋白1、T细胞受体重组β链、肿瘤坏死因子受体、肿瘤抑制亚转化因子、细胞周期相关激酶-2、亲代谢性谷氨酸盐受体-7、唾液酸转移酶-8及5个未知蛋白;真核细胞翻译延伸因子2基因的表达水平显著下调.结论:E-36基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.DNA芯片技术是分析反式激活靶基因的有效技术途径.
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人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究
目的:分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子.方法:采用5′-RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点;对启动子区3′端3个截短片段255 bp(-367/-128),210 bp(-322/-128)和160 bp(-272/-128)进行删除分析,双荧光素酶分析测出的小活性片段作为核心启动子的上游位点.通过生物软件MatInspector V2.2分析核心启动子区域,寻找并推测重要的转录因子,并对其核心序列进行定点突变分析,再通过电泳迁移率(EMSA)实验加以鉴定.结果:采用5′-RACE技术,得到的PCR产物直接测序,定位-242 "T"为转录起始点;通过启动子3′端小片段删除分析,255,210和160 bp均无活性,由此判断3′端255个核苷酸不存在核心启动子序列,并定位一段74 bp的区域为核心启动子(-441/-367)区域.通过MatInspector软件分析,发现在这段核心启动子区域内有3个重要的结合位点:Delta EF-1,NF-κB和Sp1.对这3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373,经双荧光素酶分析发现Delta EF-1的活性明显升高,NF-κB没有变化,Sp1的活性降低但不太明显.进一步通过电泳迁移率(EMSA)实验鉴定,Delta EF-1和NF-κB能与U373核蛋白形成特异性的DNA-蛋白质复合体,表明Delta EF-1和NF-κB两个转录因子与人CCRK基因表达相关.结论:对人CCRK启动子的特性研究,为今后认识该基因的转录调控机制打下了基础,为揭示恶性神经胶质瘤的发生机制及防治措施的研究提供了新的思路.
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CCRK在肝细胞癌组织中的表达及其与HBx的关系
目的 为了研究肝细胞癌的发病机制,探讨细胞周期相关激酶(CCRK)在肝细胞癌组织中的表达及意义,以及CCRK与乙肝病毒X蛋白(HBx)之间的关系.方法 RT-PCR法和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测CCRK和HBx在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达情况.结果 肝癌组织中CCRK mRNA及蛋白水平均明显高于癌旁肝组织,差异具有统计学意义(P＜0.05)；CCRK的表达与肝癌患者的性别、年龄,HBsAg,肿瘤大小均无关,而与临床分期有关；CCRK与HBx没有相关性.结论 CCRK在肝癌组织中的表达水平高于癌旁组织,对肝细胞癌的发生发展具有促进作用,但是与HBx没有相关性.
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结直肠腺癌CCRK基因表达在分化程度评估中的意义
目的：检测不同分化程度结直肠腺癌患者CCRK基因及其蛋白表达水平，探讨 CCRK在结直肠腺癌患者分化程度中的作用，为结直肠腺癌分化程度及其预后提供分子生物学依据。方法分别采用RT-PCR、免疫组织化学方法检测234例结直肠腺癌组织中CCRK mRNA和CCRK蛋白质表达水平。结果在234例结直肠腺癌组织中，CCRK的阳性表达者140例，不表达者94例。其中CCRK阳性表达者在不同分化程度的结直肠腺癌患者中CCRK蛋白染色得分值不同（HC ＝123．765，P＜0．0001）；而且CCRKmRNA相对表达量在结直肠癌低分化组（3．71±0．41）明显高于中分化组（3．09±0．23）和高分化组（2．14±0．21），差别具有统计学意义。结论CCRK的表达与结直肠腺癌分化程度有关，CCRK蛋白及其CCRKmRNA相对表达量越高，其分化程度越低，恶性程度也越高；检测CCRK蛋白表达和CCRK mRNA水平有助于结直肠腺癌分化程度和预后的判断。
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宫颈癌组织中细胞周期相关激酶的表达功能与化疗药物敏感性的关系
目的：探究宫颈癌组织中细胞周期相关激酶（CCRK）的表达功能与化疗药物敏感性的关系。方法收集不同发展时期的90例宫颈癌样本并从中提取出 Caski 细胞系，通过 RT-PCR、Northern blot 鉴定筛选有效的细胞系克隆，建立稳定沉默 CCRK 的宫颈癌细胞系模型，化疗药物顺铂、5-氟尿嘧啶处理 Caski 细胞系，分别检测化疗药物处理前后的 Caski 细胞系的 CCRK 表达功能。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的宫颈癌组织中 CCRK 蛋白表达量组间比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）。随着宫颈癌临床分期的增加，CCRK 表达的阳性率逐渐升高，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的宫颈癌组织 CCRK 表达的阳性率组间比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）；采用5-氟尿嘧啶处理的宫颈癌 Caski 细胞样本 CCRK 阳性化疗药物敏感度为49．2％，采用顺铂的 CCRK 阳性化疗药物敏感度为62．7％，采用5-氟尿嘧啶＋顺铂的 CCRK 阳性化疗药物敏感度为88．1％，三组间差异具有统计学意义（P ＜0．05）。采用5-氟尿嘧啶、顺铂及5-氟尿嘧啶＋顺铂的 CCRK 阴性化疗药物敏感度差异具有统计学意义（P ＜0．05）。结论宫颈癌组织中 CCRK的表达功能与化疗药物敏感性具有显著相关性，CCRK 的表达能够为宫颈癌的临床诊断提供参考，并能为宫颈癌的化疗治疗提供指导与参考。
