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用颜色显现细胞中蛋白间小动作
《科技日报》报道,据2015年1月26日出版的《自然·方法学》报道,活细胞中蛋白间相互作用的检测和成像将变得更加丰富多彩,这要归功于加拿大科学家开发出的一种新技术。这种新方法可将生化过程转换为更易可视化的颜色变化,从而为细胞生物学家和神经学家提供了一种新工具,以帮助其解决从细胞生物学基本机制到精神疾病根源,乃至开发新颖疗法等方面的问题。
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酵母三杂交系统研究进展
许多生物过程是通过大分子如蛋白-蛋白,核酸-蛋白的相互作用来实现的,对这些大分子间的相互作用的研究有助于揭示生命过程的分子作用机制.酵母双杂交系统是研究蛋白间相互作用的有用工具,随着该系统的广泛应用,在此基础上发展了三杂交系统,研究包括三种成分在内的更为复杂的大分子相互作用,为蛋白-蛋白、RNA-蛋白和小分子-蛋白相互作用的研究提供了新的手段.
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科学家利用大数据发现新的癌症驱动基因
来自美国的科学家将两个开放的“组学”数据库进行了整合,得到了一个新的癌症驱动基因目录。
癌症驱动基因是一类一旦发生改变就有可能促进癌症进展的基因,研究人员使用癌症突变基因与蛋白质结构数据库在病人肿瘤中发现了导致正常蛋白间相互作用发生改变的基因突变。通过这种方法,他们共发现了超过100个新的癌症驱动基因,或可帮助解释为什么由相同基因驱动的肿瘤会导致不同病人出现不同结果。 -
应用酵母双杂交系统筛选FGFR3相互作用的蛋白质
目的通过酵母双杂交系统从小鼠17.5 d全胚胎cDNA质粒文库中筛选与成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)相互作用的蛋白质,为研究FGFR3信号通路提供新的线索.方法构建FGFR3胞内区的真核表达载体R3-PI,转化酵母菌AH109.毒性实验及自激活实验证实FGFR3胞内区蛋白对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象.将小鼠17.5 d全胚胎cDNA质粒文库转入AH109/R3-PI酵母菌中,能够与FGFR3胞内区相互作用的蛋白质.结果通过初步筛选得到3种能够与FGFR3胞内区相互作用的蛋白质,经回复性实验进一步验证CLK4与FGFR3胞内区之间存在相互作用.结论通过筛选发现CLK4与FGFR3胞内区之间存在相互作用,提示FGFR3可能通过CLK4参与能量代谢调节,而CLK4可能通过对FGFR3的磷酸化或去磷酸化调节FGFR3的活性.
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GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽
目的体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用.方法首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b/p50和pET22b/p65,并在大肠杆菌E.coli BL-21中诱导表达,后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κBp50和p65的结合效应.结果经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50、p65蛋白,GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用.结论证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用,这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础.
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结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c假想蛋白间的相互作用
目的 观察结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c假想蛋白间的相互作用.方法 采用PCR技术克隆结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c假想蛋白基因, 构建酵母双杂交载体质粒pGBKT7-Rv1247c和pGADT7-Rv1246c, 经酶切分析和DNA测序证实重组质粒构建成功后, 采用醋酸锂法顺序转染酵母菌AH109,检测β半乳糖苷酶活性.结果 共转染GBKT7-Rv1247c和pGADT7-Rv1246c的酵母菌AH109可以在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp营养缺陷培养基上生长,β半乳糖苷酶活性实验阳性.结论 利用酵母双杂交系统证实结核分枝杆菌Rv1246c与Rv1247c假想蛋白可以相互作用.
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结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用
目的观察结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用.方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌 ESAT-6与CFP-10 基因,构建酵母双杂交载体质粒pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,采用醋酸锂法顺序转染酵母菌AH109.结果共转染pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10的酵母菌AH109可以在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp培养基上生长,β-半乳糖苷酶活性实验阳性.结论结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白可以相互作用.