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同时显示大鼠中枢神经系统神经元和神经纤维的全程连续切片方法
目的探索一种简便易行并能同时显示大鼠中枢神经系统(CNS)神经元和神经纤维的全程连续切片方法. 方法经过灌流固定的CNS组织低温冰箱速冻后连续冰冻切片和改良的苏木精染色方法. 结果大鼠全程CNS连续切片各断面上神经元呈蓝黑色,神经纤维呈蓝色,背景淡黄色. 结论运用低温速冻、连续冰冻切片、改良的苏木精染色方法可制作同时显示CNS神经元和神经纤维的全程连续切片.
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冷冻保存连续冰冻切片在免疫组化染色中的应用
[目的]探讨科研工作中使用连续冰冻切片进行免疫组化染色时切片的保存方法.[方法]将不能马上完成染色的连续冰冻切片采用干燥、密封的方法置于-80 ℃保存,需要时取出自然干燥后进行常规免疫组化染色.[结果]使用冷冻保存的冰冻切片进行免疫组化染色,组织结构清晰完整,细胞境界分明,染色对比度好,特异性抗原标记明显,与未经冷冻的新鲜切片比较各项观察指标无明显差异.[结论]-80 ℃冷冻保存冰冻切片的方法是可行的.
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一种用APES处理载玻片防止免疫组化染色掉片的方法
无论是石蜡切片,还是冰冻切片,在进行常规H-E染色、组织化学染色、原位杂交、免疫组织化学染色时,都存在着掉片现象.特别是在需要连续冰冻切片时,如果在免疫组化染色的过程中,掉片就带来重复取材、切片、染色,因而影响整个实验的进度并造成人,财、物的浪费.人们为了防止冰冻切片在免疫组化染色过程中的脱片,采用购置商品化的防脱载玻片,但费用较高,尤其针对于小额资助的科研项目及缺乏足够经费支持的研究生科研,选择自已动手制备防脱玻片是切实可行的手段.
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改良的Timm染色法显示大鼠海马苔藓纤维末梢出芽的变化
Timm染色方法是一种能够显示组织细胞内重金属分布的常用方法 .苔藓纤维末端是脑内含锌量高的区域,因此可以用此方法显示苔藓纤维末梢分布的情况 .1、材料与方法1.1 样品制备在恒温冷箱切片机中制备大鼠脑海马部位的连续冰冻切片,片厚30μm,吹干备用.1.2 染色步骤采用改良的Timm染色法配制Timm′s混合液.用30g阿拉伯胶粉剂溶于60ml 蒸馏水,搅拌均匀,放置24hr,双层纱布过滤,配成50%的阿拉伯胶60ml.放入 1 0ml枸橼酸缓冲液(25.5%枸橼酸+23.5%枸橼酸钠)和30ml 5.67%对苯二酚溶液,充分混合.切片依次浸入0.1%Na2S溶液(用0.1M磷酸缓冲液配制,pH7.4)和3%戊二醛溶液(用0.15M磷酸缓冲液配制,pH7.4)各1hr,然后再回到0.1%N a2S溶液中浸泡1hr固定.染色前,在暗室内将0.5ml的17%硝酸银溶液加入上述Timm′s混合液中,充分混匀.倒入已经放好脑切片的染缸中,染色40～60min,自来水冲洗10min以上 ,吹干、脱水、透明、封固.2、结果与讨论用此方法在显微镜下可以清楚地划分出大鼠海马苔藓纤维出芽等级.在操作步骤上原方法要求先动脉插管,依次注入0.1%Na2S溶液、3%戊二醛溶液、0.1%Na2S 溶液以固定脑组织,然后再制备冰冻切片.本实验为了利用新鲜脑组织观察别的指标,因而将新鲜脑组织先速冻、切片,再将切片依次置入上述溶液中固定.从本实验结果看,这种改进是成功的,为今后将Timm染色和其他也要求新鲜脑组织的研究项目同时进行研究提供了经验.
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大鼠中枢神经系统连续切片制作的实验研究
大鼠中枢神经系统 (central nervous system,CNS)显示神经核团和/或神经纤维束的全程连续切片标本是神经生物学教学的重要的实习标本,也是神经生物学研究工作中的重要参考;但这类标本比较缺乏,尤其是同时显示神经核团和神经束的标本更不易制作, 而且这方面的实验研究也较少.现有的一些连续切片制作方法,大多局限于火棉胶包埋切片 ,其过程相当繁琐,制作周期长,已有的染色方法多为显示单一结构的方法.为了教学和科研工作的需要,我们进行了CNS全程连续切片和染色方面的实验研究.材料和方法:健康成年Wistar大鼠,重250-300g,1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉.取出嗅脑到脊髓腰膨大的完整的CNS.10%中性福尔马林浸泡固定2周以上,按30%蔗糖比例加入蔗糖 ,4℃,3d.将完整的CNS按顺序修成厚2cm的块待切.低温冰箱(-70℃)速冻 ,恒冷箱切片机切片,厚30μm,间张贴片,共制成两套CNS连续切片.室温干燥1周左右.染色:(1)冰冻切片从无水酒精下行至蒸馏水,各20min.(2)入2.5%铁铵矾水溶液中媒染4-6h,蒸馏水速洗.(3)入苏木精液(10%酒精苏木精5ml+蒸馏水 100ml)染色2-6h,蒸馏水速选.(4)入2.5%铁铵矾水溶液中分色,镜检至神经纤维束呈兰色,神经核团呈兰黑色.(5)自来水冲洗,晾干,无水酒精脱水,10%石碳酸二甲苯透明,DPX封片,结果:CNS神经纤维及神经纤维束呈鲜兰色,神经元呈兰黑色, 其它细胞胞核呈黑色.讨论:本实验是将CNS速冻后制作连续冰冻切片,同时显示神经纤维束和神经核团,方法简便,结果稳定,重复性好.要注意的问题是冰冻切片需经酒精脱脂 ,媒染铁铵钒水溶液应新鲜配制,CNS各段媒染及染色时间略有不同,应作适当调整.
