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大鼠中枢神经系统连续切片显示神经核团
大鼠中枢神经系统(CNS)连续切片是神经生物学教学重要的实习标本,它能显示大鼠神经传导通路、位置、走向及其上下左右邻里关系,尤其通过CNS连续切片的观察和思维联想,有助于学员建立完整的直观的CNS 的立位体形象.目前此类工作国内外研究较少,开展的工作也不多,有一些介绍连续切片制作方法,但多数局限于火棉胶切片,其过程相当繁琐,难以大量制作,且连续切片有一定困难.为此我室申请了一项校管理题,专门对制作方法进行研究,现就目前完成的工作介绍一下.材料和方法:1.健康成年Wistar大鼠,1%戌巴比妥钠腹腔注射麻醉,心脏穿刺10%Formalin灌注固定.取嗅脑至脊髓尾段,10%Formalin浸泡固定3d以上.2.按30%蔗糖比例加入蔗糖,浸泡3d,Leica恒冷箱切片机切片, 厚30μm.3.切片入蒸馏水,30min两次,入0.2%硫堇水溶液染5～10mi n,蒸馏水分化,室温自然干燥,二甲苯透明,Dpx封固.结果:大鼠CNS各段面切片神经元尼氏体呈紫蓝色,神经胶质细胞和其它细胞胞核呈淡蓝色.讨论:制片方法方面我们同时进行了石蜡包埋切片,切30μm厚片,效果不甚理想,进行火棉胶包埋切片,由于连续切片方面的问题也做得不好,唯有冰冻切片进行得很顺利,而且染色不掉片.染色方面我们选择硫堇染色,尼氏体呈鲜蓝色,背景对比好.要注意载玻片用蛋白甘油处理,稍稍多涂一些;冰冻切片放室温自然晾干,染色时间不宜过长.
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恒冷箱切片机对不同新鲜组织冷冻切片的结果分析
恒冷箱切片机是冷冻切片机中先进,精密、价格昂贵的一种.它用途广泛,常用于组织化学,特别是酶的组织化学,免疫组织化学,临床病理切片快速诊断,以及某些组织学教学标本的制作[1-5].
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大鼠中枢神经系统连续切片制作的实验研究
大鼠中枢神经系统 (central nervous system,CNS)显示神经核团和/或神经纤维束的全程连续切片标本是神经生物学教学的重要的实习标本,也是神经生物学研究工作中的重要参考;但这类标本比较缺乏,尤其是同时显示神经核团和神经束的标本更不易制作, 而且这方面的实验研究也较少.现有的一些连续切片制作方法,大多局限于火棉胶包埋切片 ,其过程相当繁琐,制作周期长,已有的染色方法多为显示单一结构的方法.为了教学和科研工作的需要,我们进行了CNS全程连续切片和染色方面的实验研究.材料和方法:健康成年Wistar大鼠,重250-300g,1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉.取出嗅脑到脊髓腰膨大的完整的CNS.10%中性福尔马林浸泡固定2周以上,按30%蔗糖比例加入蔗糖 ,4℃,3d.将完整的CNS按顺序修成厚2cm的块待切.低温冰箱(-70℃)速冻 ,恒冷箱切片机切片,厚30μm,间张贴片,共制成两套CNS连续切片.室温干燥1周左右.染色:(1)冰冻切片从无水酒精下行至蒸馏水,各20min.(2)入2.5%铁铵矾水溶液中媒染4-6h,蒸馏水速洗.(3)入苏木精液(10%酒精苏木精5ml+蒸馏水 100ml)染色2-6h,蒸馏水速选.(4)入2.5%铁铵矾水溶液中分色,镜检至神经纤维束呈兰色,神经核团呈兰黑色.(5)自来水冲洗,晾干,无水酒精脱水,10%石碳酸二甲苯透明,DPX封片,结果:CNS神经纤维及神经纤维束呈鲜兰色,神经元呈兰黑色, 其它细胞胞核呈黑色.讨论:本实验是将CNS速冻后制作连续冰冻切片,同时显示神经纤维束和神经核团,方法简便,结果稳定,重复性好.要注意的问题是冰冻切片需经酒精脱脂 ,媒染铁铵钒水溶液应新鲜配制,CNS各段媒染及染色时间略有不同,应作适当调整.
