多种肿瘤干细胞标志物在食管鳞癌 Eca109细胞球细胞中的表达

目的：观察肿瘤干细胞标志物P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog在食管鳞癌Eca109细胞系富集的细胞球细胞中的表达。探讨食管鳞癌的肿瘤干细胞标记物。方法采用无血清成球培养法，富集培养细胞球细胞，观察其增殖过程。培养5d获得小细胞球继续培养至14d获得又大又圆的悬浮生长的细胞球，收集第14天的细胞球，一部分用于实验，一部分予以传代。应用免疫荧光技术检测细胞球细胞中P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog的表达和定位。结果 P75NTR、Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上，贴壁的Eca109为细胞核和细胞质表达，但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱；Lin28在细胞球细胞上为细胞核表达，贴壁的Eca109上为细胞核和细胞质表达；Nanog和Sox-2在食管鳞癌Eca109细胞球细胞和贴壁的Eca109上均为细胞质表达。结论 P75NTR、Oct-4、Lin28核表达阳性的细胞球可能为食管癌干细胞。

RNA结合蛋白LIN28的研究进展

RNA结合蛋白(RBP)是决定细胞分化、活动力和其他过程的调节子.LIN28是一种高度保守的RBP,在线虫和高等物种中有着复杂的调节机制和表达方式.它对微小RNA表达的调节、骨髂肌及心肌分化、肿瘤形成、多潜能诱导等多种发育的重要事件中起关键作用.本文就LIN28的研究进展予以综述.

Lin28与肿瘤关系的研究进展

Lin28在结构上是一种高度保守的RNA结合蛋白,其在胚胎干细胞内大量表达,可以促进细胞快速增殖.同时Lin28在多种肿瘤组织或肿瘤细胞系中高表达,可以促进肿瘤细胞的增殖、肿瘤细胞的转移以及肿瘤细胞的耐药,与患者的预后不良有关.在机体内,Lin28的异常表达常常反映了机体的异常状态,包括炎症或肿瘤的发生.目前阐明细胞癌变机制、演进与预防治疗方向是研究的热点,而Lin28将成为新的分子指标.

Lin28信号通路与肿瘤

Lin28是一种结构上高度保守的RNA结合蛋白，其在机体正常生长发育代谢及某些疾病状态，如肿瘤发生发展中有重要作用。近年的研究发现，Lin28在机体中的过表达能够抑制let-7 miRNA的功能，并上调某些细胞周期相关基因如cyclin A、cyclin B等的表达，从而促进干细胞的增殖。在人类恶性肿瘤细胞中，Lin28的激活能选择性地阻断原始let-7 miRNA的加工成熟并终促进肿瘤的发生；Lin28在肿瘤疾病进程中的其他作用机制包括：通过抑制肿瘤相关microRNA的分化成熟、上调细胞周期相关基因的表达影响肿瘤的发展及预后。另外，Lin28在肿瘤放化疗耐受相关研究中的重要作用日益凸显。为此，本文对Lin28的相关生理功能和其在肿瘤发生发展的相关机制及治疗前景做一综述。

Lin28在浸润性乳腺癌中的表达及临床意义

目的 通过免疫病理分析Lin28在浸润性乳腺癌中的表达情况,探讨其与浸润性乳腺癌发生、发展和转移的相关性.方法 选取2012年1月-2014年3月无锡市妇幼保健院病理明确诊断的浸润性乳腺癌患者94例(研究组)和乳腺腺病患者45例(对照组)为研究对象,采用免疫组化法检测Lin28、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体-2蛋白(HER-2)的表达水平.HER-2结果附加荧光原位杂交(FISH)确诊.结果 Lin28在对照组中不表达,在研究组中阳性率为15.9％,Lin28主要表达于HER-2阳性或ER、PR和HER-2三阴性乳腺癌中.Lin28在ER阴性的乳腺癌中的表达高于ER阳性的乳腺癌,差异有统计学意义(P＜0.05);Lin28在PR阴性与阳性的乳腺癌间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).Lin28在淋巴结转移的乳腺癌中的表达高于淋巴结未转移的乳腺癌,差异有统计学意义(P＜0.05).Lin28的表达水平与年龄无关,但高表达于病理分级为Ⅲ级或临床分期为Ⅲ-Ⅳ期的患者组织中,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Lin28有可能促进浸润性乳腺癌的增殖和侵袭能力.Lin28有可能作为乳腺癌,特别是三阴恶性乳腺癌的一种新型标志物.

Lin28对胃腺癌细胞株增殖周期的影响及机制

目的:通过检测可以调控微小RNA(microRNA)生成的RNA结合蛋白Lin28在不同分化程度胃腺癌细胞中的表达水平,探讨了Lin28对胃癌细胞周期的影响及其可能的机制.方法:用RT-PCR法在RNA水平检测Lin28的表达,免疫荧光染色分析Lin28蛋白和人细胞角蛋白18(CK-18)在细胞中的共表达情况,分别应用RNA干扰技术敲减Lin28,及细胞转染技术过表达Lin28,比较Lin28表达水平变化前后细胞周期调控相关蛋白的变化情况,碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞周期变化.结果:Lin28在高分化胃腺癌细胞株MKN28中的RNA和蛋白水平均低表达,而在低分化胃腺癌细胞株MKN45中均高表达;Lin28与肿瘤干细胞的常见标志物CK-18共表达于极少数胃癌细胞中;敲减了Lin28的MKN45细胞株S期则明显增加,而G1期比对照组相应地减少.相反,Lin28过表达导致S期明显减少,而G1期比对照组相应增加.Western blot检测发现,敲减了Lin28的MKN45细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)蛋白发生明显的上调,抑制其活性的蛋白p21和p27水平降低;而MKN28获得Lin28后,CDK2水平有所下调,p21和p27表达水平上调.结论:Lin28参与胃癌细胞分化和细胞周期相关的调控,且对细胞周期抑制蛋白p21/CDK2,p27/CDK2也发挥着一定的调节作用.

小鼠iPS细胞具备诱导性原始生殖细胞分化潜能的研究

目的:探讨小鼠诱导性多能干细胞IP14D-1是否具备诱导性原始生殖细胞(induced primordial germ cells,iPGCs)分化潜能,以及特异基因表达变化及可能机制.方法:未分化IP14D-1培养扩增,分化形成诱导性拟胚体(induced embryoid bodies,iEBs).RT-PCR和免疫荧光分别检测4、7、9d的iEBs中Lin28、Blimpl、Stra8和Mvh的表达变化和蛋白定位情况.结果:未分化IP14D-1同小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)相同,Lin28表达较弱,Blimp1表达相对较强,Mvh和Stra8也在这两种细胞及其相应iEBs和Ebs中表达,但均无明显差别.IP14D-1分化形成的iEBs从4d生长到7d时,Lin28表达逐渐增强,到9d时表现为下降,Blimp1表达则随着iEB生长时间延长而逐渐降低.结论:建立了IP14D-1和相应拟胚体(iEBs)的完善、稳定的培养及分化体系；未分化IP14D-1与mESCs在Lin28、Blimp1、Mvh和Stra8表达方面无明显差别；iEB和Ebs的Mvh和Stra8表达也无明显差别.IP14D-1及iEBs具有iPGCs分化潜能,且可能是7d的iEBs内iPGCs分化数量较多,之后进入iPGCs分化的Lin28低表达时期.

Lin28与肝癌细胞紫杉醇耐药关系的研究

[目的]Lin28是一种重编程因子和保守的RNA结合蛋白，存在Lin28A和Lin28B两种同源基因，两者结构和功能类似。本研究旨在探讨Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药的关系。[方法]MTT法检测紫杉醇对HepG2、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞的IC50；用荧光定量PCR法（简称RT-PCR）在RNA水平检测Lin28A和Lin28B在Hep3B、HepG2、SMMC-7721中的表达，蛋白质印迹法分析Lin28A和Lin28B蛋白在Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞中的表达情况。[结果]Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株对紫杉醇的IC50分别为：Hep3B为0.194μM、HepG2为19.54μM、SMMC-7721为0.444μM。HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28A基因表达量分别是Hep3B的5.06、3.10倍；HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28B基因表达量分别是Hep3B的7.16、3.16倍。Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株中Lin28A和Lin28B蛋白的表达量与从荧光定量数据显示的趋势一致。[结论]Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药密切相关，肝癌细胞中Lin28表达与肝癌细胞对紫杉醇的耐药性成正比，暗示Lin28表达可能是肝癌细胞紫杉醇耐药的潜在机制并有望成为逆转肝癌紫杉醇耐药的靶点。

MicroRNA let-7表达调控机制研究进展

MicroRNAlet-7调控干细胞分化、调节发育,抑制肿瘤发生发展,这些功能与let-7的表达水平密切相关.研究发现,Lin28、组蛋白去甲基化酶、miR-107和NF90-NF45复合物在转录和转录后水平调控let-7的表达；也存在一些Lin28依赖和Lin28非依赖的调控环路,调节let-7的表达.本文就let-7的调控机制研究进行综述.

LIN28、CD30和PLAP在卵巢生殖细胞肿瘤诊断中的应用

目的 探讨LIN28、CD30和PLAP在卵巢生殖细胞肿瘤(OGCTs)诊断中的应用价值.方法 采用免疫组化MAXVISION法检测LIN28、CD30和PLAP在45例OGCTs中的表达,包括11例无性细胞瘤、16例卵黄囊瘤、4例胚胎性癌和14例未成熟性畸胎瘤.另选取10例正常卵巢组织作为对照.结果 LIN28在无性细胞瘤(8/11)、卵黄囊瘤(16/16)、胚胎性癌(3/4)和未成熟性畸胎瘤(10/14)中呈弥漫型阳性.CD30在胚胎性癌(3/4)中阳性,在无性细胞瘤、卵黄囊瘤和未成熟性畸胎瘤中均为阴性.PLAP在无性细胞瘤(10/11)、卵黄囊瘤(9/16)和胚胎性癌(6/6)中阳性表达,在未成熟性畸胎瘤为阴性.结论 LIN28是诊断OGCTs敏感性和特异性均较好的免疫标志物.

男性原始生殖细胞中LIN28和OCT4的表达

目的:分析LIN28在男性原始生殖细胞(PGCs)中的表达变化.方法:收集男性胚胎/胎儿,胎龄为7周、8周、9周、10周、11～12周、13～ 14周各3例.分离早期胚胎性腺组织,运用免疫荧光技术分析PGCs中LIN28和OCT4的表达.结果:6组睾丸组织中LIN28和OTC4阳性细胞百分数比较,差异均有统计学意义(F=15.651,6.501,P均＜0.05).胎龄第7～14周,OCT4一直定位于PGCs的细胞核中;胎龄第8～9周时,OCT4在PGCs中的表达低于第7周,第10～12周OCT4表达再次升高,而在第13周后,OCT4表达逐渐降低.从胎龄第7周开始直至第14周,PGCs中LIN28蛋白的表达逐渐增强,在胎龄第13 ～ 14周达到高峰.在定位上,在胎龄第7周时LIN28表达于PGCs胞核内;在胎龄第8～9周时,PGCs胞核和胞质中均可观察到LIN28的表达;而在胎龄第10周以后,部分PGCs仅胞质中表达LIN28;在胎龄第11～14周时LIN28均定位于PGCs的胞质中.结论:LIN28可能是一个可行的、比较稳定的雄性生殖细胞标记因子.

LIN28在膀胱癌和膀胱癌细胞系中的表达及意义

目的:探讨LIN28在膀胱癌组织和细胞系中表达情况,以及与microRNA初级Let-7g(pri-Let-7g)之间关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响.方法:采用常规RT-PCR、miRNA转录、免疫荧光和免疫组化方法,检测LIN28 mRNA和pri-Let-7g表达,以及LIN28蛋白表达定位.结果:2例膀胱癌细胞系均表达LIN28 mRNA,T24表达较强,免疫荧光显示这两个细胞系均表达LIN28蛋白,阳性部位位于细胞胞质,T24荧光强度强于5637.所选10例膀胱癌和相应癌旁组织均表达LIN28 mRNA,二者并无明显不同,与临床分级也无明确关系.免疫组化显示癌组织LIN28表达阳性并定位于胞质,而癌旁正常组织LIN28表达为阴性.此外,两个细胞系pri-Let-7g表达较强,而癌和癌旁组织的pri-Let-7g表达强度无明显差异,需进一步检测其成熟Let-7g在这些组织中是否存在不同,以明确这些miRNA是否发生生物合成的转录后阻断.结论:明确T24和5637两个膀胱癌细胞系均可作为研究LIN28、Let-7与其相应靶基因关系的体外实验模型.尽管并不确定膀胱癌和癌旁组织LIN28、Let-7g表达强度与临床分级是否相关,但至少明确LIN28/LIN28在膀胱癌中表达,为探讨LIN28和Let-7在泌尿系统来源的其他恶性肿瘤中的作用提供借鉴和实验依据.

Let-7g微小RNA在甲状腺乳头状腺癌的表达及其临床意义

目的 观察Let-7g微小RNA(rniRNA,miR)在甲状腺乳头状腺癌组织中的表达,探讨Lin28/Let-7g轴在甲状腺乳头状腺癌中作用.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测Lin28和Let-7g miRNA在甲状腺乳头状腺癌组织中的含量,进行定量分析,并运用免疫组织化学技术检测Lin28基因产物在甲状腺乳头状腺癌中的表达水平,探讨两者与甲状腺乳头状腺癌的关系.结果 免疫组织化学分析显示,Lin28蛋白在甲状腺乳头状腺癌组织呈阳性反应,其棕色效应产物定位于细胞质中,细胞核无表达;在对照组织中,Lin28在细胞质和细胞核中均无表达.在Real-timePCR中,Lin28A在37例甲状腺乳头状腺癌组织的表达为3.587±2.472,较13例甲状腺瘤组织的1.263土1.273升高(P＜0.01),Lin28B在37例甲状腺乳头状腺癌组织的表达为4.908±5.222,较13例甲状腺瘤组织的1.070±0.252升高(P＜0.01),Let-7gmiRNA在37例甲状腺乳头状腺癌组织的表达(0.8512±0.749 0)较13例甲状腺瘤组织(1.714 0±0.654 0)降低(P＜0.01).结论 在甲状腺乳头状腺癌中Lin28上调而Let-7g下调,提示Lin28/Let-7g轴调节异常可能是甲状腺乳头状腺癌发生发展的分子调节机制之一.

Lin28/Let-7调节环分子机制及相关因子研究进展

人骨肉瘤细胞株与正常成骨细胞株中基因 Lin28表达的比较

目的：观察基因 Lin28在人骨肉瘤细胞株 MG63、U2os 及正常成骨细胞株 hFOB1.19中的表达差异。方法培养人骨肉瘤细胞 MG63、U2os、正常成骨细胞株 hFOB1.19，以实时定量 PCR 检测三种细胞株中Lin28基因 mRNA 表达情况。结果 Lin28基因 mRNA 在 hFOB1.19、MG63、U2os 的相对表达量分别为：1.012±0.18、7.013±1.29、4.783±0.59，两种骨肉瘤细胞 Lin28 mRNA 明显高于成骨细胞，差异均有统计学意义（P ＜0.05）。结论 Lin28基因高表达可能在骨肉瘤发生、发展过程中起一定作用。

Lin28在幼鼠与成年鼠成骨细胞中的表达差异

目的：检测幼鼠与成年鼠的 Lin28基因表达量。为骨关节疾病的研究及临床治疗提供新的思路和选择。方法取新生 SD 大鼠的颅盖骨，分离、培养、纯化及鉴定成骨细胞。实时定量 PCR 检测幼年鼠成骨细胞与成年成骨细胞（MC3T3）中 Lin28基因 mRNA 表达情况。结果成骨细胞进行分离、培养、纯化经鉴定后93%为成骨细胞；实时定量 PCR 检测结果显示 Lin28基因在幼鼠成骨细胞和 MC3T3中都有所表达，但在幼鼠成骨细胞中的相对表达量明显高于 MC3T3，其差异有统计学意义（p <0.01）。结论 Lin28基因可能在机体骨骼成长发育、骨愈合过程及骨关节疾病中发挥重要作用，具体机制还需进一步研究。

Lin28的功能研究进展

Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,在let-7的转录调节过程中起重要的负性调控作用,可以抑制let-7的加工合成.Lin28促进胚胎干细胞的快速增长,参与干细胞的增殖,在肿瘤干细胞的形成中发挥重要作用.Lin28在多种肿瘤组织或肿瘤细胞系中高表达,可以促进肿瘤细胞的增殖和肿瘤的进展,与患者预后不良有关.另外Lin28能够促进组织修复.

let-7i通过调节LIN28影响胶质瘤U251干细胞成熟分化

目的 探讨微小RNA(miRNA)let-7i对胶质瘤U251干细胞成熟分化的影响及其调控机制. 方法 (1)体外培养胶质瘤U251细胞,磁珠分选出CD133阳性细胞,通过合成let-7imimics(let-7i mimics组)及let-7i control (let-7i control组)转染U251干细胞,实时荧光定量PCR验证转染后let-7i表达水平,Western blotting检测U251干细胞转染前后CD133、巢蛋白(nestin)和LIN28表达水平,利用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色U251干细胞评价其成熟分化水平.(2)LIN28 siRNA(LIN28 siRNA组)及siRNA control(siRNA control组)转染U251干细胞后,Westernblotting检测转染前后CD133和nestin表达水平.(3)利用Targetscan软件分析及荧光素酶报告系统验证LIN28是let-7i靶基因的可能性. 结果 (1)转染let-7i mimics的U251干细胞中let-7i显著过表达,为let-7i control组的17.9倍;CD133、nestin和LIN28表达水平分别是let-7i control组13.9％、43.7％和53.6％;GFAP阳性标记指数为(83.0±1.93)％,显著高于let-7i control组[(39.7±6.73)％],差异有统计学意义(P＜0.05).(2)LIN28 siRNA转染U251干细胞后CD133和nestin表达水平分别下调为siRNA control组的23.7％和37.9％.(3)Targetscan软件分析表明LIN28 3'UTR存在let-7i的配对结合位点,荧光素酶报告系统证明LIN28是let-7i的靶基因. 结论 过表达let-7i可显著下调CD133及nestin的表达水平,促进胶质瘤干细胞的成熟分化,其机制可能是通过下调LIN28表达.

Lin28在妇科恶性肿瘤中的研究进展

目前妇科恶性肿瘤仍是严重威胁女性健康的疾病.部分妇科恶性肿瘤患者就诊时已是中晚期,其预后和生存质量较差.Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,与多种妇科恶性肿瘤的发生发展及预后密切相关.现就Lin28在妇科恶性肿瘤中的相关研究进展综述如下.

Lin28/Let-7在肿瘤中的研究进展

Lin28是存在于高级真核生物的一种在结构上高度保守的RNA结合蛋白,对人体的正常发育及某些疾病状态有着重要作用[1].在人体细胞中,Lin28对Let-7的转录有负性调节的作用,抑制Let-7成熟体的合成,上调细胞周期,促进干细胞的增殖.在人类肿瘤干细胞中,Lin28可通过选择性抑制Let-7成熟体的加工合成,从而促进肿瘤干细胞增殖及抑制其凋亡,终导致肿瘤发生;在人类肿瘤细胞中,Lin28呈现高表达状态,而Let-7呈低表达状态,普遍认为Lin28与Let-7是一对相互抑制和负向调控的因子,故被称为双向负反馈调节轴或调节环.本文对Lin28及Let-7在肿瘤细胞中表达的研究进展进行综述如下.